JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

פרוטוקול זה משתמש G6PI פפטידים מעורבים לבנות מודלים דלקת מפרקים שגרונית כי הם קרובים לזו של דלקת מפרקים שגרונית האדם ב CD4+ T תאים ציטוקינים. טוהר גבוהה קבוע הרוצח טבעי תאים T (בעיקר iNKT2) עם פנוטיפים ספציפיים פונקציות הושגו על-ידי בvivo אינדוקציה וטיהור מבחנה עבור חיסוני המאמצת.

Abstract

דלקת מפרקים שגרונית (RA) היא מחלה חיסונית כרונית מורכבת דלקתית. הפתוגנזה של המחלה קשורה הרוצח הטבעי קבוע T (iNKT) תאים. חולים עם RA פעיל מציגים פחות תאים iNKT, הפונקציה תא פגום, ו פולריזציה מוגזמת של Th1. במחקר זה, מודל בעל חיים RA הוקמה באמצעות תערובת של hGPI325-339 ו-hGPI469-483 פפטידים. התאים iNKT הושגו על ידי vivo אינדוקציה וטיהור מבחנה, ואחריו אינפוזיה לתוך עכברים RA לטיפול חיסוני המאמצת. במערכת הדמיה vivo (IVIS) מעקב חשף כי תאים iNKT הופצו בעיקר בטחול ובכבד. ביום 12 לאחר טיפול בתאים, התקדמות המחלה האט למטה באופן משמעותי, הסימפטומים הקליניים היו להקלה, שפע של תאים iNKT ב בלוטת התימוס גדל, הפרופורציה של iNKT1 ב בלוטת התימוס ירד, ואת רמות של TNF-α, IFN-γ, ו-IL-6 ב הנסיוב ירד. חיסוני המאמצת של תאים iNKT שוחזר את האיזון של תאים חיסוניים תוקן דלקת מוגזמת של הגוף.

Introduction

דלקת מפרקים שגרונית (RA) היא מחלה אוטואימונית מאופיין על ידי כרונית, החלטיות מתקדמת עם 0.5 – 1%השכיחות 1,2. הפתוגנזה הבסיסית מיוחסת התפשטות נורמלית של התאים האוטומטיים CD4+ ו CD8+ T, המתבטאת בגידול ביחס של CD4+IFN-γ+ ו CD4+il-17a+ T תאים, ואת מספר מופחת של CD4+il-4+ ו CD4+CD25 + FoxP3 + T תאים. לכן, הפרשת ציטוקינים דלקתיים מוגברת, ותגובה דלקתית מוגזמת הורסת את האיזון הטבעי ואת תפקוד הסובלנות של המערכת החיסונית של הגוף. יתר על כן, המסייע T לימפוציטים (Th) 1 תאים החודרים המפרק להחמיר את התגובה הדלקתית נזק משותף. לכן, עיכוב של תגובה דלקתית מוגזמת ושחזור של סובלנות החיסונית ואיזון החיסון הם המפתח לטיפול RA3,4.

התאים iNKT יש גם תא NK ו-T פונקציות תא ומאפיינים. התאים iNKT הנמל ברורים, קולטן תא T קבוע (TCR) α-שרשרת עם מוגבל TCR β-שרשרת repertoires5 ולהכיר את האנטיגן גליקולפיד הציג על ידי מורכבות מורכבת היסטולידית העיקריים (mhc) מולקולה cd1d ו על פני השטח של תאים אנטיגן הצגת. מיצ ואח '6 זיהה מספר גדול של תאים inkt ופגמים פונקציונליים במחלות אוטואימוניות רבות, כולל RA. Aurore ואח '7 הפגינו כי תאים inkt יש השפעה חיובית על שמירה על סובלנות אוטואימונית וכי כאשר מספר ותפקוד של תאים inkt משוחזרים, המחלה היא להקלה. בנוסף, Miellot-גסו ואח '8 נמצא כי תאים inkt לא רק abרוזין את המחלה אלא גם הגביר את ההתקדמות של המחלה. אלה התוצאות סותרות מראים כי תאים iNKT הם תאים T הטרוגנית, ואת הפונקציה של קבוצות מערכות שונות יכול להיות הפוך. במחקר קליני של RA, תדירות של תאים iNKT בקורלציה עם התוצאה של פעילות המחלה9. התוצאות אישרו גם כי התדירות של inkt הצטמצמה בחולים RA, מספר CD4+ifn-γ+ תא מערכות המשנה של התא גדל, ואת רמות הסוד של ציטוקינים דלקתיות ifn-γ ו-tnf-α גדל10,11. בנוסף, שריף ואח '12 חקר סוכרת סוג 1 (T1D) ומצא כי עירוי סלקטיבי של תאים inkt upregulated את הביטוי של cy, דלקתיות IL-4, מתוחזק סובלנות החיסונית, ומנעו את ההתפתחות של סוכרת מסוג 1. לכן, עירוי המאמצת של תאים מסוימים iNKT או הפעלה ממוקדת של תאים iNKT מגביר את רמת התאים iNKT בחולים RA, אשר יכול להיות פריצת דרך בטיפול RA.

חיסוני הסלולר הוא כעת עניין רב והיה בשימוש נרחב בטיפול בסרטן. עם זאת, תאים iNKT הם נדירים, הטרוגנית החיסונית תאים (רק 0.3% מהמספר הכולל של PBMCs)13, אשר מגביל יישומים קליניים פוטנציאליים. תאים אלה מחולקים בעיקר לשלוש אוכלוסיות משנה: 1) iNKT1 תאים, אשר יש ביטוי גבוה של פרוליקמיה לוקמיה אבץ אצבע (PLZF) ומקדם תמלול T-box (T-bet); 2) iNKT2 תאים עם ביטוי ביניים של חלבון מאגד PLZF ו-טה 3 (GATA3); 3) iNKT17 תאים בעלי ביטוי נמוך של הקולטן PLZF ו retinoid הקשורים ליתומים גרעיני (ROR)-γt להפריש IFN-γ, IL-4, ו-IL-1714. תאים iNKT הופעל להפריש Th1, Th2, ו Th17 כמו ציטוקינים, אשר קובעים את ההשפעות האימונומודולטוריים שונים של תאים iNKT15. האפקטים האימונומודולטוריים והאימונותרפיה של הפעלה ספציפית של אוכלוסיות משנה שונות של תאי iNKT שונים. לכן, הבחירה של פנוטיפים ספציפיים של תאים iNKT (בעיקר iNKT2) עם פונקציות אנטי דלקתיות כדי לווסת את התגובה החיסונית של הגוף יכול לתקן את חוסר האיזון החיסונית הפרעות החיסון RA.

הקמתה של המודל החי האידיאלי הוא משמעותי מאוד לטיפול ולחקר של הפתוגנזה RA. כיום, הדגמים הנפוצים ביותר בשימוש בעלי חיים בוגרים כוללים דלקת מפרקים הנגרמת קולגן, דלקת מפרקים, מפרקים zymosan המושרה, ודלקת מפרקים רב המושרה16–17. עם זאת, אין מודל שיכול לדמות לחלוטין את כל התכונות של RA האנושית. סוג II קולגן המושרה דלקת מפרקים (CIA) הוא מודל דלקת מפרקים קלאסית. ה-CIA נגרמת על ידי חיסון של עכברים עם סוג II הקולגן הספציפי נוגדנים חד שבטיים, המשקף את התלות הנוגדן של מודל זה מחלה. Benurs ואח ' תיאר מודל עם תגובה חיסונית מערכתית ל גלוקוז-6-פוספט איזומראז (G6PI), אשר משרה מערכת מפרקים סימטרית היקפית סימטרי בזנים של העכבר הרגיש18,19. במודל זה, התפתחות של דלקת מפרקים תלויה בתאי T, B תאים, וחסינות מולדת18,19,20. Horikoshi21 נמצא כי מודלים RA כתוצאה מחיסון של DBA/1 עכברים עם שברי G6PI פוליפטידים דומים יותר לאדם RA במונחים של CD4+ T תאים ציטוקינים (כלומר, IL-6 ו-tnf-α) מאשר דגמי ה-CIA. כדי להגביר את ההשפעה המעוררת על אתר הזיהוי של TCR, שברי הפוליפפטיד המעורבים של G6PI (hGPI325-339 ו-hGPI469-483) שימשו לחיסון של עכברים DBA/1 כדי לבנות את מודל העכבר RA. שיעור ההצלחה של גישה זו יכול להיות גבוה בגלל hGPI325-339 ו-hGPI469-483 הם אימונומישומיניטית עבור התגובות האלה של תא T-A-q-מוגבל. לכן, מודל זה יכול לדמות את התפשטות יתר של CD4+ T תאים ופגמים תא inkt בחולים RA22. המחקר הבסיסי של RA immunopathology הניח את הבסיס לחקירה העמוקה יותר שלנו.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

כל העכברים הניסיוניים (150 בסך הכל) היו גברים בריאים DBA/1 עכברים, 6 – 8 בן שבועות (20.0 ± 1.5 g), גדל בסביבה מסוימת ללא הפתוגן (SPF). אין טיפול מיוחד לפני דוגמנות. הניסוי התחלק לקבוצת שליטה בריאה (15 עכברים), קבוצת בקרת מודל (15 עכברים) וקבוצת טיפול בתאים (55 עכברים). מחקר זה אושר על ידי רווחה בעלי חיים והוועדה האתית של אוניברסיטת חביי.

1. בניית מודל המחלה

  1. שכפול מודל בעלי חיים RA
    1. שוקלים 1.75 מ"ג של שני hG6PI 325-339 ו hG6PI 469-483 שברים לפזר אותם 5.25 mL של 4 ° c משולשת מים מזוקקים.
    2. התמוססות להשלים את הפסיקה של פרוינד (פרנק) באמבט מים ב50 ° c, שלוף 5.25 mL לתוך שפופרת צנטריפוגה נוספת של 10 מ ל, וצנן אותו לשימוש.
    3. לשים את התערובת של פתרון hG6PI ואת הפתרון של המכשיר ביחידת אמולסיה מלאכותית עם שני מזרקים זכוכית מחוברים.
    4. לדחוף את המזרק במהירות קבועה ותדירות של 10-20x לדקה כדי לטפל לחלוטין בפתרון פפטיד מעורב ופתרון. בצע את הפעולה באמבט קרח, ושמור את טיפות האמולסיה במים למשך 10 דקות לאחר השלמת התחליב ללא פיזור.
    5. הכנס 150 μL של אמולסיה hG6PIs לתוך תת-עורי הזנב של העכבר.
    6. הכנס 200 מ"ג של הרעלן של פרטזיס לתוך העכבר intraperitoneally ב 0 h ו 48 h לאחר הזרקת hG6PI.
  2. אימות ניסיוני של מודל RA
    1. מדוד את עובי כף העכבר עם קליבר (2x ביום).
    2. להתבונן ולסמן את מידת האדמומיות והנפיחות של כף הרגל. השתמש בקריטריוני הניקוד הבאים: 1) בהונות עם נפיחות קלה; 2) משטח כף רגל עם נפיחות אדומה ברורה; 3) קרסול עם נפיחות אדומה.
    3. המתת חסד העכברים תחת הרדמה עמוקה על ידי הזרקה תוך הצפק של 1% נתרן פנטוברביטל (50 mg/ק"ג משקל הגוף) 14 ימים לאחר דוגמנות ולהסיר את כפות הרגליים עבור כתמים הוא.
    4. בדוק את רמות הפרשת הסרום IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A, TNF-α, ו-IFN-γ באמצעות מערך מסחרי של הסייטוטריק חרוז (CBA) בהתאם לפרוטוקול של היצרן.

2. קבלת תאים iNKT עם טיפול הסלולר המאמצת

  1. אינדוקציה כיוונית של תאי iNKT
    1. הכנס עכברים נורמליים intraperitoneally עם α-GalCer (0.1 מ"ג/ק"ג של משקל הגוף).
  2. בידוד של תאי iNKT
    1. שלושה ימים לאחר דוגמנות, להזריק עכברים intraperitoneally עם 1% נתרן פנטוברביטל (50 mg/ק"ג של משקל הגוף) עבור ההרדמה. עכברים מורדם כראוי לא מראים תגובה נסיגה האחוריות לצבוט בבוהן.
    2. לבודד את הטחול של עכבר DBA/1 לאחר הזרקת אותו intraperitoneally עם α-GalCer. הכן תא השעיה אחד על ידי גזירה ושיוף הטחול בתוך הנפה 200 שינוי.
    3. לשטוף את ההשעיה התא עם PBS, צנטריפוגה ב 200 x g עבור 5 דקות, ולמחוק את supernatant. חזור על.
    4. השהה מחדש את התאים באמצעות 1 מ ל של פתרון לדילול הדם והרקמה השלמה. הוסף 3 מ ל של הפרדה בינונית לימפוציטים של העכבר, ולאחר מכן צנטריפוגה את התאים עבור 20 דקות ב 300 x g בטמפרטורת החדר.
    5. לאסוף את השכבה של לימפוציטים לבנים חלבי (כלומר, השכבה השנייה מלמעלה), לשטוף את זה 2x עם PBS, ולספור עם מונה תאים אוטומטי.
  3. מיון תא מגנטי מופעל (מקינטוש) אסטרטגיה בחירה חיובית לטיהור של תאים iNKT
    הערה: לטיפול מקדים של Cd1d ו ארבמרס, 1 מ"ג/mL של α-Galcer היה מדולל 200 μg/mL עם 0.5% של רצף-20 ו-0.9% של הנאל, ו 5 μL של הפתרון שהתקבל נוספה כדי 100 μL של הפתרון Cd1d ו ארבמאר. התערובת הייתה מודקרת ל -12 שעות בטמפרטורת החדר וממוקמת ב -4 ° c לשימוש. TCR β היה מדולל 80x עם מים מפוהים. כל הנוגדנים האחרים שימשו כפתרון מניות.
    1. השהה מחדש 107 תאים עם 100 μl של 4 ° c PBS, להוסיף 10 μl של α-galcer טעון Cd1d ו הטטרמר-PE, ומארג אותם ב 4 ° c עבור 15 דקות בחושך.
    2. שטוף את התאים 2x עם PBS והשהה אותם מחדש ב-80 μL של PBS.
    3. הוסף 20 μL של anti-PE-מיקרוחרוזים ו מודב 4 ° c עבור 20 דקות בחושך.
    4. לשטוף אותם 2x עם PBS ולהשעות מחדש את התאים עם 500 μL של PBS.
    5. הצב את עמודת המיון בשדה המגנטי של סדרן מקינטוש ושטוף עם 500 μL של PBS.
    6. הוסף את ההשעיה התא משלב 2.3.4 לעמודת מיון, לאסוף את הפרח, ולשטוף 3x עם מאגר PBS.
    7. הסר את השדה המגנטי ואסוף את התאים מעמודת המיון. בשלב זה, להוסיף 1 mL של מאגר PBS לעמודת מיון, ובמהירות לדחוף את הבוכנה בלחץ קבוע כדי לכונן את התאים המסומנים לצינור האוסף ולקבל מטוהר תאים iNKT. . תספור עם מונה תאים אוטומטי
  4. זיהוי התא של iNKT
    1. קח 1 x 106 תאים משלבים 2.2.5 ו 2.3.7, בהתאמה, ו להשעות אותם מחדש ב-50 μl של PBS.
    2. הדגירה נוגדן: לא להוסיף את הנוגדן לצינור הבקרה שלילי, להוסיף 0.5 μL של α-GalCer-PE-Cd1d ו ארבמר או 10 μL של FITC-TCR β בצינור הבקרה החיובי היחיד. להוסיף 0.5 μL של α-GalCer-PE-Cd1d ו ארבמר ו 10 μL של FITC-TCR β במבחנה לדוגמה. מודקון אותם ב 4 ° c עבור 30 דקות בחושך.
    3. לשטוף את התאים PBS ולאחר מכן צנטריפוגה ב 200 x g עבור 5 דקות.
    4. להיפטר supernatant, להוסיף 1 מ ל של Foxp3 Foxation/החדירות הפתרון העבודה, ו מודלת את התאים עבור 45 דקות ב 4 ° c בחושך.
    5. הוסף 1 mL של מאגר חדירות 1x עבודה וצנטריפוגה את התאים בטמפרטורת החדר עבור 500 x g בטמפרטורת החדר עבור 5 דקות.
    6. . מחק את הסופרנטאנט הוסף 1 μL של אלקסה Fluor 647 העכבר Anti-PLZF ו 1 μL של PerCP-Cy 5.5 העכבר נגד-T-bet (או 1 μL של PerCP-Cy 5.5 העכבר anti-RORΥt) עבור 30 דקות בטמפרטורת החדר בחושך.
    7. הוסף ל 2 מ ל של מאגר החדירות פתרון עבודה לניקוי.
    8. להיפטר supernatant, להשעות מחדש את התאים ב-500 μL של PBS, ולמדוד על ידי זרימה cy, לנסות.
  5. זיהוי תפקודי של תאי iNKT
    1. לקחת 3 x 106 תאים inkt משלב 2.3.7 ולהשעות אותם בתוך 12 צלחות טוב עם 1.5 ML של RPMI-1640 בינוני שלם (כלומר, ללא סרום).
    2. הוסף את אסתר (PMA, 50 ng/mL) ואיקונמיצין סידן (IO, 1 μg/mL) ומקום בחממה2 עבור 24 שעות.
    3. לאסוף את הטלפון supernatant ולזהות את רמות הפרשת IL-2, IL-17A, TNF-α, IL-6, IL-4, IFN-γ, ו-IL-10 באמצעות שיטת CBA מסחרי על פי פרוטוקול היצרן.
  6. מחקר ניסיוני על מסלול הגירה של תאים iNKT בעכברים RA
    1. לפזר את צבע DiR (2.5 mg/mL) ב DMSO.
    2. השעיה מחדש של תאים iNKT ב 6 צלחות היטב עם RPMI-1640 בינוני לא שלם. הצפיפות היא 1 × 106 תאים/mL.
    3. הוסף את DiR (5 μg/mL) פתרון ו-מודטה באינקובטור CO2 עבור 25 דקות.
    4. לשטוף עם PBS ולהשעות מחדש את התאים (3 x 106/300 μl) כדי להשיג את התאים inkt שכותרתו DiR (Dir-inkt).
    5. הכנס 1% נתרן פנטוברביטל (50 מ"ג/ק"ג משקל הגוף) intraperitoneally כדי להרג את העכברים. עכברים מורדם כראוי לא מראים נסיגה האחוריות לצבוט הבוהן. החלת משחה וטרינרית על עיני העכבר כדי למנוע יובש תוך הרדמה להדמיה.
    6. הכנס את מספר התאים DiR-iNKT 3 x 106 לכל עכבר לתוך הווריד הזנב עם מודל RA במשך 8 ימים. ניטור תאים iNKT בתוך הזרקת עכברים עבור 0 דקות, 10 דקות, 30 דקות, 60 דקות, ויום 0 (אחרי 3 שעות), 1, 3, 6, 12, 26, 34, 38, ו 42 ימים באמצעות בעל חיים קטן במערכת הדמיה vivo (IVIS). אורך הגל המשמש היה 748 ננומטר, אורך הגל הפליטה היה 780 ננומטר, ואת זמן החשיפה היה אוטומטי.
    7. מניחים כל עכבר בכלוב נפרד לאחר כל התבוננות לשמור על שכיבה. להתבונן עד התאוששות מהרדמה.

3. הערכה של הטיפול חיסוני המאמצת של עכברים RA עם תאים iNKT

  1. תא iNKT-טיפול חיסוני המאמצת עבור עכברים RA
    1. הכנס 3 x 106 תאים inkt תאים לכל עכבר דרך הווריד הזנב. באופן אקראי לבחור 15 עכברים שהיו מעוצב 8 ימים לפני ולהשיג תאים iNKT ללא תיוג משלב 2.3.7 על ידי אינפוזיה וריד הזנב.
  2. הערכת את היעילות של טיפול חיסוני המאמצת עבור תאי iNKT.
    1. למדוד את העובי של כף העכבר, לכמת את הנפיחות של מפרק הקרסול, וציון בשיטתיות לאחר העירוי של תאים iNKT כפי שמתואר בשלבים 1.2.1 – 1.2.2.
    2. להתבונן הסתננות תא דלקתי שינויים משותפים של המפרקים העכבר כפי שמתואר בשלב 1.2.3.
    3. לקבוע את רמות הפרשת IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A, TNF-α, ו-IFN-γ כפי שמתואר בשלב 1.2.4.
  3. קבע את התדירות של תאים וערכות ממשנה של iNKT.
    1. לבודד את התימוס העכבר ולהכין השעיה תא אחד.
    2. הפרד את לימפוציטים עם נוזל הפרדה לימפוציט.
    3. קבע את תדירות התא של iNKT ואת תדירות קבוצות המשנה כפי שמתואר בשלב 2.4.
  4. אנליזה סטטיסטית
    הערה: כל הנתונים מוצגים כממוצע ± SD. ערכים של P < 0.05 נחשבו משמעותיים סטטיסטית.
    1. השתמש בניתוח של גורם אחד של סטיה (ANOVA). אם הסטיה מסופקת, השתמש בבדיקת LSD להשוואה נוספת.
    2. אם הסטיה אינה אחידה, השתמש בבדיקה שאינה פרמטרית. השתמש במבחן מקרוקאל-ווליס. להמשך השוואה31

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

תוצאות

מדד דלקת מפרקים ניקוד ועובי כפה עלה לאחר הדוגמנות. בהשוואה לקבוצת הביקורת, הבהונות של קבוצת מודל RA החלו להראות נפיחות אדומה ב 6 ימים לאחר הדוגמנות, עם החמרה הדרגתית. במהלך 14 ימים, הנפיחות האדומה במפרק הקרסול הגיעה לשיאה, ולאחריה הקלה הדרגתית. עובי כף היד השתנה באופן דומה (P < 0.05) (

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

תאים iNKT הם תאי T מיוחדים המגשרים חסינות מולדת ואדפטיבית מפותחים בעיקר מ CD4+/cd8+ thymocytes. תאים iNKT יש פונקציות immunoregulatory מגוונת אינטראקציה עם תאים חיסוניים אחרים על ידי מגע ישיר הפרשת ציטוקינים שונים23, המשפיעים על תאים דנדריטים (DCs), מקרופאגים, נויטרופילים, B ת...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

המחברים לא מצהירים על שום מימון או קונפליקטים של עניין.

Acknowledgements

המחקר שלנו היה נתמך על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (NSFC) (81771755), מכללות והמדע של האוניברסיטה וטכנולוגיה מפתח מחקר הפרויקט של מחוז חביי (ZD2017009) ואת המעבדה לבעלי חיים של ניסוי רפואי מרכז, אוניברסיטת חביי. . אנו אסירי תודה על תמיכתם

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Alexa Fluor 647 Mouse Anti-PLZFBD563490America
Anti-PE MicroBeadsMiltenyi130-048-801Germany
ColumnsMiltenyiMSGermany
Cryogenic CentrifugeBeckmanAllegra® X-15RAmerica
DiRThermo Fisher ScientificD12731America
Embedding CenterTianjin Aviation Electromechanical Co., Ltd.BMJ-1China
FITC Hamster Anti-Mouse TCR β ChainBD553170America
Flow cytometerBDAccuri C6America
Freund's complete adjuvantSigmaF5881America
hGPI325-339 (IWYINCFGCETHAML)Karebay Biochem18062202China
hGPI469-483 (EGNRPTNSIVFTKLT)Karebay Biochem18062203China
In Vivo Imaging SystemPerkinElmercaliper IVIS lumina IIAmerica
Ionomycin CalciumCayman10004974America
KRN7000AdipoGenAG-CN2-0013America
Mouse CD1d Tetramer-PEMBLTS-MCD-1Japan
Mouse percollSolarbioP8620China
Optical MicroscopeOlympusOlympus-IIJapan
PerCP-CyTM5.5 Mouse anti-ROR-ϒtBD562683America
PerCP-CyTM5.5 Mouse anti-T-betBD561316America
Pertussis toxinSigmaP7208America
phorbol estersCayman10008014America
Red Blood Cell Lysis BufferBD555899America
RPMI-1640Biological Industries01-100-1ACSIsrael
Th1/Th2/Th17 cytokines kitBD560485America
UltramicrotomeLeicaLeica EM UC6Germany

References

  1. Tobón, G. J., Youinou, P., Saraux, A. The environment, geo-epidemiology, and autoimmune disease: Rheumatoid arthritis. Autoimmunity Reviews. 35 (1), 0-14 (2010).
  2. Cross, M., et al. The global burden of rheumatoid arthritis: estimates from the Global Burden of Disease 2010 study. Annals of the Rheumatic Diseases. 73 (7), 1316-1322 (2014).
  3. Kanashiro, A., Bassi, G. S., Queiróz Cunha, F. D., Ulloa, L. From neuroimunomodulation to bioelectronic treatment of rheumatoid arthritis. Bioelectronics in Medicine. 1 (2), 151-165 (2018).
  4. Brennan, P. J., Brigl, M., Brenner, M. B. Invariant natural killer T cells: an innate activation scheme linked to diverse effector functions. Nature Reviews Immunology. 13 (2), 101-117 (2013).
  5. Bianca, B. S. Unraveling Natural Killer T-Cells Development. Frontiers in Immunology. 8, 1950(2018).
  6. Mitsuo, A., et al. Decreased CD161+CD8+ T cells in the peripheral blood of patients suffering from rheumatic diseases. Rheumatology. 45 (12), 1477-1484 (2006).
  7. Miellot, A., et al. Activation of invariant NK T cells protects against experimental rheumatoid arthritis by an IL-10-dependent pathway. European Journal of Immunology. 35 (12), 3704-3713 (2005).
  8. Miellot-Gafsou, A., et al. Early activation of invariant natural killer T cells in a rheumatoid arthritis model and application to disease treatment. Immunology. 130 (2), 296-306 (2010).
  9. Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis. Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).
  10. Ming, M., et al. Effects on immunoregulation of iNKT cells in RA by novel synthetic immunostimulator CH1b. Chinese Journal of Immunology. 32 (02), 218-222 (2016).
  11. Ming, M., et al. Study of the correlation between the percentage of iNKT cells and the ratio of IFN-γ/IL-4 in patients with rheumatoid arthritis. Chinese Journal of Microbiology Immunology. 35 (3), 213-218 (2015).
  12. Sharif, S., et al. Activation of natural killer T cells by α-galactosylceramide treatment prevents the onset and recurrence of autoimmune Type 1 diabetes. Nature Medicine. 7, 1057-1062 (2010).
  13. Gapin, L. Development of invariant natural killer T cells. Current Opinion in Immunology. 39, 68-74 (2016).
  14. Kwon, D. I., Lee, Y. J. Lineage Differentiation Program of Invariant Natural Killer T Cells. Immune Network. 17 (6), (2017).
  15. Thapa, P., et al. The differentiation of ROR-γt expressing iNKT17 cells is orchestrated by Runx1. Scientific Reports. 7 (1), 7018(2017).
  16. Schurgers, E., Billiau, A., Matthys, P. Collagen-induced arthritis as an animal model for rheumatoid arthritis: focuson interferon-γ. Interferon Cytokine Research. 31 (12), 917-926 (2011).
  17. Van Haalen, H. G. M., Severens, J. L., Tran-Duy, A., Boonen, A. How cost-effectiveness A systematic review and stepwise approach for selecting a transferable health economic evaluation rheumatoid arthritis. Pharmacoeconomics. 32 (5), 429-442 (2014).
  18. Schubert, D., Maier, B., Morawietz, L., Krenn, V., Kamradt, T. Immunization with glucose-6-phosphate isomerase induces T cell-dependent peripheral polyarthritis in genetically unaltered mice. Journal of Immunology. 172, 4503-4509 (2004).
  19. Bockermann, R., Schubert, D., Kamradt, T., Holmdahl, R. Induction of a B-cell-dependent chronic arthritis with glucose-6-phosphate isomerase. Arthritis Research, Therapy. 7, 131613-131624 (2005).
  20. Kamradt, T., Schubert, D. The role and clinical implications of G6PI in experimental models of rheumatoid arthritis. Arthritis Research, Therapy. 7, 20-28 (2005).
  21. Horikoshi, M., et al. Activation of Invariant NKT Cells with Glycolipid Ligand α-Galactosylceramide Ameliorates Glucose-6-Phosphate Isomerase Peptide-Induced Arthritis. PlosOne. 7 (12), 51215(2012).
  22. Zhang, X. J., et al. Immunization with mixed peptides derived from glucose-6-phosphate isomerase induces rheumatoid arthritis in DBA /1 mice. Chinese Journal of Pathophysiology. 32 (3), 569-576 (2016).
  23. Motohashi, S., Nakayama, T. Invariant natural killer T cell-based immunotherapy for cancer. Immunotherapy. 1 (1), 73(2017).
  24. Jung, S., et al. The requirement of natural killer T-cells in tolerogenic APCs-mediated suppression of collagen-induced arthritis. Experimental and Molecular Medicine. 42 (8), 547-554 (2010).
  25. Luc, V. K., Lan, W. Therapeutic Potential of Invariant Natural Killer T Cells in Autoimmunity. Frontiers in Immunology. 9, 519-526 (2018).
  26. Chiba, A., et al. Suppression of collagen-induced arthritis by natural killer T cell activation with OCH, a sphingosine-truncated analog of α-galactosylceramide. Arthritis, Rheumatism. 50 (1), 305-313 (2004).
  27. Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis. Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).
  28. Bruns, L., et al. Immunization with an immunodominant self-peptide derived from glucose-6-phosphate isomerase induces arthritis in DBA/1 mice. Arthritis Research, Therapy. 11 (4), (2009).
  29. Parietti, V., et al. Rituximab treatment overcomes reduction of regulatory iNKT cells in patients with rheumatoid arthritis. Clinical Immunology. 134 (3), 331-339 (2010).
  30. Yoshida, Y., et al. Functional mechanism(s) of the inhibition of disease progression by combination treatment with fingolimod plus pathogenic antigen in a glucose-6-phosphate isomerase peptide-induced arthritis mouse model. Biological, Pharmaceutical Bulletin. 38 (8), 1120-1125 (2015).
  31. Chen, D., et al. Study of the adoptive immunotherapy on rheumatoid arthritis with Thymus-derived invariant natural killer T cells. International Immunopharmacology. 67, 427-440 (2019).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

155iNKT6 G6PIvivo IVIS

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved