גירוי דוראלי ובדיקות פריאורביטל פון פריי בעכברים כמודל פרה-קליני של כאב ראש

Summary

התסמין הבולט ביותר של מיגרנה הוא כאבי ראש חמורים, וההשערה היא כי הדבר מתווך על ידי נוירונים חושיים המחדירים את קרום המוח. כאן אנו מציגים שיטה ליישום מקומי של חומרים על הדורה באופן זעיר פולשני תוך שימוש ברגישות יתר לפנים כפלט.

Abstract

קרום המוח הגולגולתי, המורכב מהדורה מאטר, ארכנואיד ופיה מאטר, נחשבים כמשרתים בעיקר תפקודים מבניים של מערכת העצבים. לדוגמה, הם מגנים על המוח מפני הגולגולת ומעגנים/מארגנים את האספקה הווסקולרית והנוירונית של קליפת המוח. עם זאת, קרום המוח מעורב גם בהפרעות במערכת העצבים כגון מיגרנה, שם הכאב שחווה במהלך מיגרנה מיוחס לדלקת סטרילית מקומית והפעלה לאחר מכן של אפרנטים נוסיספטיים מקומיים. מבין השכבות בהרי קרום המוח, הדורה מאטר מתעניין במיוחד בפתופיזיולוגיה של מיגרנות. הוא בעל כלי דם גבוהים, מכיל תאי עצב מקומיים, והוא ביתם של מגוון רחב של תאים מקומיים כגון תאים חיסוניים. שינויים עדינים במיקרו-סביבה המקומית של קרום המוח עלולים להוביל להפעלה ורגישות של נוציצפטורים פריווסקולריים דוראליים, ובכך להוביל לכאבי מיגרנה. מחקרים ביקשו לטפל באופן שבו אפרנטים דוראליים הופכים להיות מופעלים/רגישים על ידי שימוש באלקטרופיזיולוגיה in vivo, טכניקות הדמיה או מודלים התנהגותיים, אך אלה דורשים בדרך כלל ניתוחים פולשניים מאוד. פרוטוקול זה מציג שיטה ליישום לא פולשני יחסית של תרכובות על דורה מאטר בעכברים ושיטה מתאימה למדידת רגישות מישוש דמוית כאב ראש באמצעות בדיקת פון פריי פריי פריירביטלית לאחר גירוי דוראלי. שיטה זו שומרת על שלמות הדורה והגולגולת ומפחיתה את ההשפעות המבלבלות של טכניקות פולשניות על ידי הזרקת חומרים דרך צינורית שונה בקוטר 0.65 מ"מ בצומת של תפרים סגיטליים ולאמבדואידים לא מאוכלסים. מודל פרה-קליני זה יאפשר לחוקרים לחקור מגוון רחב של גירויים דוראליים ואת תפקידם בהתקדמות הפתולוגית של מיגרנה, כגון הפעלת נוציצפטורים, הפעלת תאי מערכת החיסון, שינויים בכלי הדם והתנהגויות כאב, כל זאת תוך שמירה על מצבים נטולי פציעות בגולגולת ובקרומי קרום המוח.

Introduction

מיגרנה כואבת עדיין בעיה מרכזית בבריאות הציבור ברחבי העולם. ארגון הבריאות העולמי מדרג אותה כמחלה השישית בשכיחותה בעולם, כשהיא סובלת מקצת פחות מ-15% מאוכלוסיית כדור הארץ¹ וגורמת לנטל חברתי-כלכלי משמעותי על החברה ^2,3. אפשרויות הטיפול ויעילותן היו לא אופטימליות ומספקות רק הקלה סימפטומטית ואינן משנות באופן משמעותי אירועים פתופיזיולוגיים שבבסיסם התרחשות מיגרנה ^4,5. חוסר ההצלחה הטיפולית נובע ככל הנראה מכך שמיגרנה היא הפרעה מולטי-פקטוריאלית שהפתולוגיה שלה אינה מובנת היטב, מה שמוביל למספר מוגבל של מטרות טיפוליות. מיגרנה היא גם מאתגרת ללכידה מלאה במודלים של בעלי חיים, במיוחד לאור העובדה שאבחון מיגרנה נעשה על סמך תקשורת מילולית עם מטופלים המתארים את החוויה שלהם עם סימני היכר של מיגרנה כגון הילה, כאבי ראש, פוטופוביה ואלודיניה. עם זאת, חשוב לציין כי ההתקדמות האחרונה בטיפולי מיגרנה עולה כיום על טיפולים במצבים נוירולוגיים רבים שאומתו היטב על ידי מודלים פרה-קליניים. לדוגמה, נוגדנים חד-שבטיים ומולקולות קטנות המכוונות לפפטיד הקשור לגן קלציטונין, או לקולטן שלו, הצליחו מאוד לשפר את איכות חייהם של הסובלים ממיגרנה ועלולים לשנות את הניהול הקליני של מיגרנה. אמנם חלה התקדמות בהבנת ההפרעה הזו, אך עדיין יש הרבה דברים שטרם הובהרו.

בהתבסס על מודלים פרה-קליניים של בעלי חיים ומחקרים בבני אדם, מקובל כי מיגרנות נגרמות על ידי הפעלה חריגה של סיבים נוסיצפטיביים בתוך קרום המוח המאותתים דרך הגרעינים הטריגמינליים והצוואריים העליונים ^6,7,8,9,10. למרות תיאוריה זו, מחקרים רבים עדיין משתמשים במתן סיסטמי של תרופות כדי להבין את המנגנונים התורמים הבסיסיים במיגרנה. בעוד שמינון מערכתי של תרופות חיזק באופן משמעותי את הבנתנו, ממצאים אלה אינם מעריכים באופן ישיר אם פעולות מקומיות בתוך רקמת המטרה המעניינת ממלאות תפקיד במיגרנה. לעומת זאת, מספר מחקרים נקטו בגישה כדי לעורר את הדורה; עם זאת, ניסויים אלה דורשים השתלת צינורית באמצעות כריתת גולגולת פולשנית וזמני התאוששות ממושכים^11,12. בגלל המגבלות האלה, פיתחנו גישה זעיר פולשנית כדי לעורר את הדורה באופן מקומי, כאשר היעדר כריתת גולגולת מבטל את ההחלמה לאחר הניתוח ומאפשר ניסויים מיידיים בבעלי חיים ערים 12,13,14. זריקות אלה מבוצעות בהרדמה איזופלורנית קלה וניתנות בצומת של תפרים סגיטליים ומבדואידים בעכברים.

מספר גישות פותחו כדי להעריך תגובות התנהגותיות nociceptive במכרסמים¹⁵. אלודיניה עורית דווחה בכ-80% מהסובלים ממיגרנה^16,17 ומייצגת נקודת קצה תרגומית פוטנציאלית לשימוש במכרסמים. במודלים פרה-קליניים, היישום של חוטי פון פריי על האזור הכפי של כף המכרסמים שימש להערכת התנהגויות כאב במודלים פרה-קליניים של מיגרנה. המגבלה העיקרית של גישה זו היא שהיא אינה בודקת את האזור הצפלי. ניקוד עגמומי פנים שימש ללכידת התנהגויות כאב במכרסמים על ידי ניתוח הבעות פנים לאחר אינדוקציה של גירויי כאב^18,19. עם זאת, מגבלותיו כוללות רק לכידת תגובות לגירויים חריפים ולא מצבי כאב כרוניים. טיפוח פנים וגידול מופחת נחשבים גם לתפוקות של תגובות התנהגותיות במודלים פרה-קליניים של מיגרנה^20,21. המגבלות של הראשונים כוללות קושי בהבחנה בין תגובות כאב לבין טיפוח שגרתי רגיל ותחושות אחרות כגון גירוד. במקרה של האחרון, התנהגויות גידול בדרך כלל פוחתות במהירות לאחר הכנסת מכרסמים לסביבות חדשות. למרות שכל אחת מנקודות הקצה ההתנהגותיות הללו היא בעלת ערך בהבנת מנגנונים שונים התורמים למצבי כאב, קיים צורך קריטי במודלים פרה-קליניים של הפרעות כאב כגון מיגרנה כדי לכלול נקודות קצה הלוכדות באופן ספציפי תגובות רגישות יתר צפלית. הערכת רגישות יתר למישוש של העור הפריאורביטלי בעקבות גירוי דוראלי היא שיטה שעשויה לספק תובנה טובה יותר לגבי מנגנונים התורמים למיגרנות שבהן הסימפטומים החושיים הם בעיקר צפליים בטבעם. כאן אנו מתארים שיטה למתן חומרים על דורה העכבר כמודל פרה-קליני של מיגרנה. בעקבות היישום הדוראלי, אנו מציגים גם שיטה מפורטת לבדיקת רגישות יתר של מישוש פריאורביטלי באמצעות חוטי פון פריי מכוילים המיושמים בשיטת דיקסון למעלה-מטה.

Protocol

כל ההליכים נערכו באישור מראש של הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת טקסס בדאלאס. במחקר זה נעשה שימוש בעכברים מסוג ICR (CD-1) (30-35 גרם) וב-C57/BL6 (25-30 גרם).

1. אינפוזיה דוראלית

1. צרו את המזרקים/מזרקים לעכבר על-ידי שינוי צינורית פנימית ומזרק הזמינים מסחרית להזרקות חד-צדדיות עם מכסה פלסטיק סיליקה מתמזג שאינו מתכתי, הניתן לכוונון ומכניס/מתרחב מתחת לצינורית מנחה של 28 גרם עם קוטר פנימי (I.D.) של 0.18 מ"מ וקוטר חיצוני (O.D.) של 0.35 מ"מ (איור 1A).
2. השתמש בקליפר או במכשיר מדידה אחר כדי להתאים את מכסה הפלסטיק סיליקה שהתמזג על האינפיר לאורך של 0.6 מ"מ; נמדד מקצה האינפיר ועד לקצה מכסה הפלסטיק של סיליקה.
   1. יש להיזהר שלא לכופף או להקהות את ההחדרה בעת כוונון מכסה הפלסטיק.
   2. עבור זני עכברים אחרים שלא שימשו בעבר להזרקות דוראליות, קבעו את אורך ההחדרה האופטימלי על ידי הגדרת האורך ל-0.6 מ"מ וביצוע זריקות טייס עם דיו או צבע, התאמת אורך האינפיר עד שיבחין כי הצבע נמצא רק ב-dura mater ולא במוח או בגולגולת.
3. חברו את הקצה הארוך (או את הקצה שלא נמדד כ-0.6 מ"מ) של החדר המותאם לצינורות פלסטיק (צינורות משאבה, 2 עצירות, תעודת זהות 0.19 מ"מ, אורך 406 מ"מ).
   1. חותכים את הצינורות לאורך מינימלי של 8 אינץ' כדי להבטיח שיש מספיק קו כדי להחזיק נפח של 5 μL.
   2. וודאו שהצינורות מכסים את חלק המתכת ואת החלק העליון של פקק הפלסטיק הממוקם על האינפיר. זה יעזור למנוע מבועות אוויר להצטבר בשורה.
4. חברו את הקצה השני של הצינור למיקרו-מזרק זכוכית של 10 מיקרו-ליטר (מחט צמנטית אטומה לגז; 21 גרם עם הקרנה של 10 מ"מ), שוב, והקפידו על אטימה הדוקה מעל החלק המתכתי של המזרק (איור 1A).
5. לאחר חיבור הקו, מלאו את המזרק ב-5 μL של מלוחים עם מאגר פוספט (PBS), נוזל אינטרסטיציאלי סינתטי (SIF) או כלי רכב אחרים לפי בחירתם כדי למנוע היווצרות של בועות אוויר.
   1. אם בועות אוויר נצפות בקו, הצפת את הקו עם הרכב עד שהבועות יתפוגגו.
      הערה: זה עשוי לעזור למלא את המזרק ברכב לפני חיבורו לקו ולאחר מכן לדחוף את הנוזל דרך הקו לאחר החיבור.
6. לאחר שהקו מתמלא ב-5 μL של הרכב ופועל ביעילות, העמיסו 5 μL של התרופה/תמיסה לתוך מזרק המילטון (דיו או צבע עשויים לשמש כחלופה לתרופה/תמיסה אם לומדים או מתרגלים טכניקה זו).
   1. ודא שכל פתרונות הרכב הניתנים על הדורה נשמרים ב- pH 7.4 ונמדדים לאוסמולאליות של 310. זה מקטין את ההפעלה הפוטנציאלית של תעלות יונים עם חישה חומצית ותעלות אוסמוזנסיטיביות אחרות בתוך הדורה.
7. הנפח המרבי שנבדק בעכברים שלא גרם לדליפה לתוך המוח הוא בערך 10 μL. ההשפעות ההתנהגותיות לאחר זריקות עם נפח זה לא נבדקו. מסיבה זו, לנהל רק 5 μL של הפתרון על dura.
   הערה: תצפיות אלה מבוססות על זני/גילאים/משקלים של עכברי CD1/ICR בני 6-8 שבועות.

2. זריקות דוראל

1. לאחר הכנת המזרק והתרופה טעונה, הניחו עכבר שטוח על בטנו והרדמה אותו תחת איזופלורן קצר של 3% עם קצב זרימת חמצן של 0.5-1 ליטר/דקה באמצעות חרטום האף.
   1. לאחר שהעכבר כבר לא מציג רפלקס צביטה, התאימו את ההרדמה וקיימו אותה באיזופלורן של 1.5%.
2. לאחר הרדמה, להחיל משחה אופטלמית סטרילית על העיניים ולגלח את ראש החיה, ולאחר מכן לחטא את העור עם povidone-יוד ואתנול. בעקבות זאת, להגיע למצב התורם לזריקה מוצלחת.
3. השתמש ביד אחת כדי לייצב את ראש החיה ולהחזיק את ההחדרה ביד השנייה.
4. בדקו היטב ואתרו את הצומת של התפרים הסגיטליים והלמבדואידיים על גולגולת העכבר (איור 1B, C).
   1. כדי לאתר את הצומת הדיסקרטי הזה דרך העור, השתמש בתכונות הטופוגרפיות של הגולגולת ובדוק בעדינות את המיקום הכללי של הצומת עם החדר.
   2. ודא את מיקום הצומת על ידי מיקום מחדש של ההחדרה לאורך הגולגולת ותחושת המיקום המדויק.
5. ברגע שהתפר ממוקם והתפר נמצא במקומו, לאט מאוד ובעדינות מנגבים את האינפיר קדימה ואחורה עד שהוא חודר דרך העור ויורד אל הצומת עד לפקק הפלסטיק.
   הערה: הקפד להכניס את כל קצה ה- 0.6 מ"מ של ההחדרה לצומת.
6. כדי לאמת את הדיוק, השתמש בדיו או בצבע כפתרון הזרקה והרדמה ועריפת ראש של העכבר.
   1. הסר את מכסה הגולגולת כדי לדמיין את הצבע בתוך הדורה מאטר (איור 1C).
      הערה: אין לראות צבע על המוח או על החלק החיצוני של הגולגולת. כמו כן, עכברים בכל ניסוי צריכים להיבדק לאחר המוות כדי לוודא את דיוק ההזרקה, כמו גם כדי להבטיח את שלמות הדורה מאטר לא נפגעה.
7. לאחר ההזרקה, מוציאים את העכבר מהרדמה, ממתינים עד שהוא יחזור להכרה ואז חוזרים לכלוב שלו או מניחים אותו בתא בדיקה כדי להתחיל את הבדיקות הרצויות.
   הערה: אפשר לעכבר להתאושש מהרדמה למשך 30 דקות לפחות לפני ביצוע ניסויים התנהגותיים כלשהם.

3. פריורביטל פון פריי

1. התחל את המחקר עם קבוצה של כ 16-20 עכברים.
2. יום אחד לפני ההרגלה, טפלו בכל עכבר במשך 5 דקות לפחות.
3. כ-24 שעות לאחר הטיפול, התרגלו העכברים לתנאי חדר הבדיקה ולמנגנון הבדיקה של פון פריי (איור 2A).
   הערה: מנגנון הבדיקה האקרילי מורכב מתאים בודדים עם מכסים שהם בערך 3 אינץ ' x 3.5 אינץ ' x 5 אינץ ' (W x H x D) ונתמכים על ידי מעמדי אלומיניום המחוברים באמצעות 0.25 ב 19 G חוט רשת פלדה מגולוון מרובע.
   1. הניחו את העכברים בתוך נייר לבנה באורך 4 אונקיות הממוקמת אופקית, חסרת ריח ואינה מכילה פוליתן או שעוות פרפין.
      הערה: סוגים אלה של כוסות מועדפים מכיוון שהם מפחיתים את ההפרעות במערכת העיכול בעכברים אם הם נבלעים (איור 2B).
4. בזמן שהחיות נמצאות בחדרים המתאימים להן, מניחות כדור של דיאטת הצ'או הרגילה בחדר הבודד של כל עכבר כדי להרגיע את החיות ולהימנע מכל לחץ מיותר על בעלי החיים. עשו זאת במשך 3 ימים לפני כל בדיקת התנהגות של פון פריי.
   1. ודא שבכל פעם שהעכברים נמצאים בחדר יש גישה למזון.
   2. מספר והקצה כל חיה לאותו שטח במדף הבדיקה. הניחו את העכבר באותה בכל יום של תקופת הבדיקה כדי להבטיח שכל בעל חיים יתאקלם בסביבת הבדיקה שלו.
      הערה: עכברים יכרסמו את הכוסות ולאחר מכן ישמידו את הכוסות. אם זה אמור לקרות, החלף את הכוס ותייג אותה במספר העכבר המתאים.
5. לאחר 3 הימים הראשונים של ההרגלה, הניחו את העכברים בתאים הבודדים שלהם.
   1. אפשרו לבעלי החיים להתאקלם בחדר הבדיקה ובחדרי הבדיקה למשך שעה לפחות לפני כל ניסוי של פון פריי כדי לאפשר לעכברים להירגע ולאחר מכן קל יותר לבחון אותם.
6. לאחר ההתאקלמות לחדר ביום הבדיקה, יש להסיר עכבר אחד בעודו בכוס שלו מהתא המתאים.
   1. שמרו על הגביע במצב האופקי כך שהעכבר נמצא גם על המצח וגם על כפות הרגליים האחוריות כדי לסייע בפיזור שווה של משקלם.
      הערה: חלוקת משקל לא שוויונית עשויה לשנות את תגובות בעלי החיים ואף למנוע מבעלי חיים להגיב.
7. הניחו את הכוס עם העכבר בפנים על השולחן מתחת לארון הבדיקה על משטח הספיגה.
8. לצורך בדיקת פון פריי פריי, הניחו את נימת פון פריי 0.07 גרם ישירות במרכז הפנים ובין העיניים.
9. הפעילו מספיק לחץ על החוט כדי לגרום לשיער פון פריי להתכופף לתצורה בצורת "C".
   1. שמור על קשר עם האזור לפחות 3 שניות אבל לא יותר מ 5 שניות או עד שהעכבר מושך את ראשו ומחליק על החוט עם הכפה שלו.
      הערה: אם החוט מחליק או יותר מכפי שקצה החוט נוגע בבעל החיים במהלך הניסויים, אין לספור את כל התגובות. תגובות אלה עשויות להיות בתגובה למברשת המופעלות על ידי מכניורצפטורים שונים ולכן עשויות שלא לשקף תוצאות מדויקות.
   2. החל את חוטי פון פריי על פי שיטת "מעלה-מטה" של דיקסון^22,23.
      1. בתחילה, החל את נימה פון פריי אשר יש משקל של 0.07 גרם. החוט הנמוך ביותר האפשרי והנימה הנבדקת הגבוהה ביותר במחקר זה הם חוטים עם משקלים של 0.008 גרם ו -0.6 גרם, בהתאמה.
      2. השתמש בחוטים של משקל 0.008 גרם, 0.02 גרם, 0.04 גרם, 0.07 גרם, 0.16 גרם, 0.4 גרם ו- 0.6 גרם כדי לבצע בדיקה זו.
      3. בשיטה זו, אם בעל חיים אינו מפגין תגובה לחוט, החל את החוט של משקל הגרם הגבוה הבא.
      4. אם העכבר אכן מגיב לחוט, שקול שהעכבר מגיב לחוט זה. אם זה המקרה, החל את החוט של משקל הגרם התחתון הבא.
      5. חזרו על דפוס זה עד שהחיה תיבדק 4 פעמים לאחר התגובה הראשונית או שבעל החיים ייקבע כלא מגיב לחוטים כלשהם שנבדקו בבדיקה.
         הערה: הימנעו מהפעלת לחץ נוסף הנובע מהזרוע או מפרק כף היד. ניתן להשתמש בסולם כדי לתרגל את היישום של החוט.

4. בדיקת ספי נסיגה בסיסיים

1. לפני ההכללה בניסוי, ודא שהעכברים מגיעים לסף נסיגה בסיסי בין 0.5-0.6 גרם.
   1. עכבר מגיע לנקודת ההתחלה אם הוא לא מגיב לכל נימה שנבדקה בסדרה המוזכרת בשלב 3.9.2.2 (0.07 גרם, 0.16 גרם, 0.4 גרם ו- 0.6 גרם).
2. בדוק עכברים מדי יום בעת קביעת ספי נסיגה בסיסיים.
   1. ניסויים מאפשרים לבעלי חיים להתאקלם לתנאי הניסוי וללחץ של חוטי פון פריי.
   2. אם העכברים עדיין רגישים מאוד לאחר היום השלישי של הבדיקה, נסו להמתין יום או יומיים לפני הבדיקה שוב.
      הערה: זמן רב מדי בין ימי הניסוי עלול לגרום לכך שבעל החיים לא יסתגל למשקל הנימה באזור הפריאורביטלי שלו, ובכך לא יגיע לסף הנסיגה הממוקד.
3. בדקו את העכברים במשך כ-7 ימים לפני שקבעו אילו בעלי חיים אינם עומדים בקריטריוני ההכללה לניסוי.
   הערה: כ-70% מהעכברים יגיעו לרמה הבסיסית הממוקדת.
   1. לפני גירוי דוראלי, נתח את הנתונים הבסיסיים כדי לא לכלול כל עכבר שלא הגיע לערך בסיסי של 0.5-0.6 גרם ומעלה.
   2. לאחר ההחרגה, הקצה באופן אקראי כל עכבר שנותר לקבוצת בדיקה. השג זאת על-ידי ציור מתוך או כתיבת סקריפט בגיליון אלקטרוני כדי לחלק מספרים באופן אקראי לקבוצה.

5. ניתוח תוצאות פון פריי

1. לאחר קבלת סדרת התגובות, קבעו את ערך הדלתא, k, סף ה-50% ואת סף הנסיגה בגרמים על פי שיטות שפורסמו בעבר²⁴.
2. חשב את סף הנסיגה באמצעות נוסחה זו WT = 10^(x*F+B), כאשר WT = סף נסיגה, F = סף נסיגה הכפה המחושב בשיטת Chaplan, ו- B = רגרסיה ליניארית של יומן (כוח כיפוף) = x* מספר נימה + B.
3. התאם את הנתונים כסף נסיגה של 50% או סף משיכה ממוצע בגרמים.

תוצאות

שיטת הזרקה זו משמשת למתן גירויים על הדורה של עכברים, כך שבדיקות התנהגותיות עוקבות עשויות להתרחש. התפוקה ההתנהגותית הנפוצה ביותר שנמדדה במודל זה היא רגישות יתר עורית לפנים שהוערכה באמצעות von Frey 12,13,14. כאן אנו מראים כיצד ניתן להשתמש במודל זה...

Discussion

שינויים לא מסתגלים במערכת הנוסיקפטיבית המקומית בדורה נחשבים לתורמים מרכזיים לשלב כאבי הראש של התקפי מיגרנה למרות היעדר פגיעה^{ברקמות 25,26}. כאן המחקר מציג שיטה לפיה גירוי זעיר פולשני של הדורה יכול לגרום לרגישות יתר של מישוש בפנים. הבהרת המנגנונים והאירועים המ...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
4 oz Hot Paper Cups	Choice Paper Company	5004W	https://www.webstaurantstore.com/choice-4-oz-white-poly-paper-hot-cup-case/5004W.html
Absorbent Underpads	Fisherbrand	14-206-65	https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-absorbent-underpads-8/p-306048
C313I/SPC Internal 28 G cannula	P1 Technologies (formerly Plastics One)	8IC313ISPCXC	I.D. 18 mm, O.D. 35 mm
Gastight Model 1701 SN Syringes	Hamilton	80008	https://www.hamiltoncompany.com/laboratory-products/syringes/80008
Ismatec Pump Tubing, 0.19 mm	Cole-Palmer	EW-96460-10	https://www.coleparmer.com/i/ismatec-pump-tubing-2-stop-tygon-s3-e-lab-0-19-mm-id-12-pk/9646010
Stand with chicken wire	Custom		The galvanized steel chicken wire dimensions are 0.25 in. x 19-gauge
Testing Rack with individual  Chambers	Custom		Each chamber should have a division between each mouse and lids to contain the mouse. The chambers should also be large enough to hold a 4 oz. paper cup.
von Frey Filaments	Touch test/Stoelting	58011	https://www.stoeltingco.com/touch-test.html