השתלת לב צוואר הרחם הטרוטופית בעכבר תוך שימוש באזיקי כלי דם

Summary

מודלים להשתלת לב עכברים מייצגים כלי מחקר חשובים לחקר אימונולוגיה של השתלות. הפרוטוקול הנוכחי מפרט השתלת לב צווארית הטרוטופית של עכברים הכוללת מיקום של אזיקים על עורק הצוואר המשותף של המושתל ועל גזע עורק הריאה של התורם כדי לאפשר זרימת דם למינרית.

Abstract

מודלים של השתלת לב משמשים לעתים קרובות לחקר פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה, תגובות חיסוניות מולדות ונרכשות לאחר ההשתלה, וההשפעה של טיפולים אימונומודולטוריים על דחיית השתל. השתלת לב צווארי הטרוטופי בעכברים תוארה לראשונה בשנת 1991 באמצעות אנסטומוזות תפורות ולאחר מכן שונתה כך שתכלול טכניקות חפתים. שינוי זה איפשר שיפור בשיעורי ההצלחה, ומאז, היו דיווחים רבים שהציעו שיפורים טכניים נוספים. עם זאת, התרגום לשימוש נרחב יותר נותר מוגבל בשל הקושי הטכני הקשור לאנסטומוזות השתל, הדורשות דיוק כדי להשיג אורך וקליבר נאותים של האזיקים כדי למנוע פיתול אנסטומוטי וסקולרי או מתח מוגזם, מה שעלול לגרום נזק לשתל. הפרוטוקול הנוכחי מתאר טכניקה מותאמת לביצוע השתלת לב צווארית הטרוטופית בעכברים הכוללת מיקום האזיקים על עורק הצוואר המשותף של המושתל ועל עורק הריאה של התורם בהתאמה לכיוון זרימת הדם.

Introduction

Abbott et al. פרסמו¹ את התיאור הראשון של השתלת לב בטן הטרוטופית בחולדות בשנת 1964. טכניקות כירורגיות אלה שוכללו ופשטו על ידי Ono et al. בשנת 1969². Corry et al. תיארו לראשונה שיטה להשתלת לב בטני הטרוטופית בעכברים בשנת 1973; בדומה למודלים של חולדות שדווחו בעבר, זה כלל חריטה לתוך הבטן של הפונדקאי עם revascularization על ידי anastomoses מקצה לצד של עורק הריאה של התורם ועלייה אבי העורקים אל הווריד הנבוב נחות של המקבל ואבי העורקים הבטן, בהתאמה³. השתלת לב צווארי הטרוטופי בחולדות תוארה על ידי הרון בשנת 1971 באמצעות חפתים מסוג טפלון העשויים מ-16 גרם (קוטר חיצוני של 1.6 מ"מ) קטטרים תוך ורידיים⁴. Chen⁵ ו- Matsuura et ^al.6 דיווחו מאוחר יותר על השתלת לב צווארי הטרוטופי בעכברים בשנת 1991, שהטכניקות שלהם היו שונות בעיקר בשיטה שלהם של אנסטומוזיס מחדש. גישתו של צ'ן כללה אנסטומוזות תפורות של אבי העורקים העולה של התורם לעורק הצוואר של המקבל ועורק הריאה של התורם לווריד הג'וגולרי החיצוני של המקבל⁵. בשל המיומנות הטכנית המתקדמת הנדרשת עבור אנסטומוזות תפורות מיקרו-כירורגיות אלה, היה צורך בכמות משמעותית של זמן וניסיון כדי להשיג אחוזי הצלחה גבוהים. Matsuura et al. תיארו שיטה המשתמשת בטכניקת חפתים ללא תפרים, בדומה לזו המשמשת את הרון, שכללה אנסטומוזות מקצה לקצה תוך שימוש במיקום חוץ-זוהר של אזיקים. הוא עיצב חפתים מסוג טפלון מ-22 גרם (קוטר חיצוני של 0.8 מ"מ) ו-24 גרם (קוטר חיצוני של 0.67 מ"מ) וצנתרים תוך ורידיים והניח אותם על הווריד הג'וגולרי החיצוני של המושתל ועל עורק הצוואר המשותף,^{בהתאמה 6}. אזיקים אלה הונחו לאחר מכן בתוך עורק הריאה ואבי העורקים של התורם ואובטחו על ידי קשירת ליגטורה של תפר סביב החיבור. גישה זו תורגמה לשיפור בשיעור ההצלחה. והכי חשוב, זה הביא לקיצור הזמן הדרוש להשלמת שתי האנסטומוזות של צוואר הרחם, ובכך הפחית את הזמן האיסכמי החם של השתל לפחות משליש מזה תוך שימוש בשיטת תפירת הבטן. יתר על כן, מכיוון שהאזיקים ממוקמים סביב פני השטח החיצוניים של כלי השיט, אין גוף זר שנחשף לומן כלי הדם, מה שמקטין במידה רבה את האפשרות של פקקת לאחר ניתוח⁷. בינתיים, שימוש בטכניקת השרוול מספק תמיכה סביב כלי הדם באתר האנסטומוזיס ללא צורך בתפירה כלשהי, מה שמפחית את הסיכון לדימום לאחר רה-וסקולריזציה⁶.

תיקונים רבים של טכניקה זו הוצעו. כדי להתאים לאורך הקצר של עורק הצוואר המשותף של העכבר (כ-5 מ"מ), Tomita et ^al.8 פיתחו שינוי בטכניקה זו עם שרוול עורקי קטן יותר (קוטר חיצוני של 0.6 מ"מ) תוך השמטת החזקת תפרים ומשיכת העורק ישירות דרך השרוול עם מלקחיים עדינים במקום זאת. Wang et al. פישטו עוד יותר את הגישה הזו על ידי הצבת 22 G ו-24 G אזיקים על עורק הריאה הימני של התורם ועורק הצוואר המשותף הימני של המקבל,^{בהתאמה 9}. דיווחים שונים תיארו שינויים בגישות אלה, כולל שימוש באזיקים מיוחדים, מלחציים מיקרו-כירורגיים, מרחיבי כלי דם וקרדיופלגיה^10,11,12. יש לציין כי כל השיטות הללו כרוכות במחזור הדם המדרדר דרך הלב, כאשר הדם זורם מעורק הצוואר המשותף של המקבל לאבי העורקים התורם, העורקים הכליליים, הסינוס הכלילי, ואז מתרוקן לאטריום הימני ויוצא מעורק הריאה אל תוך הווריד הג'וגולרי החיצוני של המקבל.

בהשוואה לחריטה בבטן, השתלת לב צוואר הרחם מציעה יתרונות רבים. כאמור, חשיפה לצוואר הרחם מאפשרת רה-וסקולריזציה מהירה יותר וזמנים איסכמיים חמים קצרים^{יותר 6}. השיטה הצווארית היא גם פחות פולשנית והיא קשורה לזמני החלמה קצרים יותר לאחר הניתוח מכיוון שהיא נמנעת מלפרוטומיה⁶. חשוב לציין, ניתן לבצע אנסטומוזות מקצה לקצה עם אזיקים במקום אנסטומוזות מקצה לצד, מה שמקטין את הסיכון לסיבוכים כגון דימום אנסטומוטי. הגישה הבטנית מהווה גם סיכון מוגבר לפתח סיבוכים טרומבוטיים באבי העורקים הבטני או בווריד הנבוב התחתון, מה שמוביל לאיסכמיה של חוט השדרה ולשיתוק אחורי. המיקום השטחי של צוואר הרחם של ההשתלה מאפשר גישה נוחה להערכת כדאיות השתל על ידי מישוש, אלקטרוקרדיוגרפיה והדמיה פולשנית או לא פולשנית. למרות שהשתלים בצוואר הרחם מחדשים את פעילות הלב הספונטנית לאחר רפרפוזיה, הם אינם משפיעים באופן משמעותי על הפרמטרים הסיסטוליים והדיאסטוליים של המקבל. מודל זה מספק תובנות חשובות לחקר תגובות תאיות לאחר השתלה, כגון פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה ודחיית השתל. יתר על כן, מודל זה מציע גישה אידיאלית המאפשרת הדמיה לאחר ההשתלה, כגון מיקרוסקופיה תוך-ויטלית של שני פוטונים או הדמיה טומוגרפיה של פליטת פוזיטרונים (PET). לשם כך, המעבדה שלנו דיווחה בעבר על שיטות להדמיה של רקמות ואיברים נעים בעכבר, כולל לבבות מורין פועמים והשתלות קשת אבי העורקים לאחר השתלת צוואר הרחם הטרוטופית כדי לדמיין סחר בלוקוציטים במהלך פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה ובתוך פלאקים טרשת עורקים,^{בהתאמה 13,14,15} . בנוסף, בשל מיקומו השטחי וקלות החשיפה, מודל זה מתאים להשתלת לב מחדש¹⁶.

דו"ח זה מתאר טכניקה המאפשרת זרימת דם למינרית עם מיקום חיצוני של אזיקי כלי הדם על כלי הדם שמהם נובעת זרימת הדם. זה מאפשר מעבר חלק של זרימת הדם מכלי אחד למשנהו, הימנעות מחשיפה של קצה כלי הדם הדיסטלי לתוך לומן כלי הדם. בנוסף, הטכניקה משתמשת בשרוול גדול יותר של 20 גרם, במקום אזיקים של 22 גרם ששימשו בעבר, עבור עורק הריאה התורם כדי להבטיח חזרה מספקת של זרימת הדם למקבל.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

כל נהלי הטיפול בבעלי חיים נערכו בהתאם להנחיות NIH לטיפול ושימוש בחיות מעבדה ואושרו על ידי הוועדה למחקרים בבעלי חיים בבית הספר לרפואה של אוניברסיטת וושינגטון. לבבות מעכברי C57BL/6 (B6) ו-BALB/c (במשקל 20-25 גרם) הושתלו במושתלי B6 מותאמי מגדר (גילאי 6-8 שבועות). העכברים התקבלו ממקורות מסחריים (ראו טבלת חומרים). השתלות סינגניות בוצעו כדי להעריך תגובות תאיות הקשורות לפגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה, והשתלות אלוגניות בוצעו כדי לחקור את מנגנוני החיסון המעורבים בסבילות ודחייה של שתלים. B6 lysozyme M-green פלואורסצנטי חלבון (LysM-GFP) עכברים מדווחים¹⁷, שהתקבלו במקור מקלאוס ליי ממכון לה ג'ולה לאלרגיה ואימונולוגיה, לה ג'ולה, קליפורניה, ולאחר מכן גודלו במתקן שלנו, שימשו כמושתלים לניסויים נבחרים כדי לדמיין חדירת נויטרופילים לשתלי לב. ניתוח ההישרדות בוצע באמצעות הליכים אספטיים.

1. הליך התורם

1. הרדמת העכברים על ידי הזרקת קטמין (80−100 מ"ג/ק"ג) וקסילזין (8−10 מ"ג/ק"ג) (ראו טבלת חומרים) באופן תוך-צפק לעכבר התורם. אשר מישור כירורגי של הרדמה עם צביטה בוהן וזנב.
2. הכינו את אזור הניתוח על ידי גילוח השיער מהחזה והבטן באמצעות סכין גילוח חשמלי.
3. יש לתת 100 יחידות של הפרין (ראו טבלת חומרים) לווריד הפין (זכרים) או לווריד הג'וגולרי החיצוני (זכרים או נקבות).
4. הניחו את העכברים בתנוחת שכיבה עם מעליונים מעליהם. אבטחו את הפורלימבים והאחוריים עם סרט כירורגי וחטאו את העור עם שלושה קרצוף לסירוגין של 0.75% יוד ו-70% אתנול.
5. בצע חתך, laparosternotomy חציוני, מן הטבור לזווית החזה (3-4 ס"מ), ולאחר מכן כריתת בית החזה דו-צדדית לאורך כל שוליים קוסטליים (2 ס"מ דו צדדית). קפלו את דופן בית החזה הקדמי מעל הצוואר לחשיפה מלאה של המדיאסטינום.
6. הבלו את התימוס ולחשוף את הווריד הנבוב התחתון intrathoracic.
7. Transect לרוחב אבי העורקים הבטן עבור exsanguination.
8. עבור זלוף מדרדר, להזריק 1.5 מ"ל של 4 מעלות צלזיוס מלוחים לתוך הווריד הנבוב התחתון intrathoracic עם המחט מכוונת מעולה לכיוון השתל, כפי שתואר קודם לכן¹³.
9. ליגייט הווריד הנבוב המעולה באמצעות 8-0 תפר משי ומחלק באופן דיסטלי.
10. חזור על הזלוף המדרדר על ידי הזרקת עוד 1.5 מ"ל של 4 מעלות צלזיוס מלוחים דרך הווריד הנבוב התחתון.
11. ליגייט הווריד הנבוב התחתון באמצעות 8-0 תפר משי ומחלק באופן דיסטלי.
12. נתחו את קשת אבי העורקים ואת גזע עורק הריאה לצורך קצירת השתל והעבירו את שניהם באופן דיסטלי. Ligate את הוורידים הריאתיים על פני השטח האחורי של הלב באמצעות תפר משי 6-0 ולחלק דיסטלי.
13. בצע הכנת השתל על ידי הסרת הלב התורם מחלל החזה. מניחים את הלב שנכרת במיכל פלסטיק מלא במלח הפריני בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס למשך 1-2 דקות. העבירו את השתל על בקבוק פלסטיק סטרילי מלא בקרח להנחת חפתים (איור 1A).
    הערה: השתלת הלב צריכה להישאר על הבקבוקון במשך כ -5 דקות כדי למקם את השרוול של עורק הריאה התורם.
14. יש להניח שרוול אנגיוקטטר באורך 20 גרם (ראו טבלת חומרים) מעל עורק הריאה של השרוול התורם. בעזרת מלקחיים עדינים, מקפלים בעדינות את קצוות העורק בחזרה מעל השרוול. הצמידו את הכלי המקופל לשרוול באמצעות עניבת ניילון של 10-0, כפי שתואר קודם^{לכן 18} (איור 1B,C).
15. אחסנו את הלב התורם במי מלח שעברו הפרין או בתמיסת שימור אחרת בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.
    הערה: בעוד שחלקם עשויים להעדיף פתרונות שימור ספציפיים (למשל, הפתרון של אוניברסיטת ויסקונסין) לשימור איסכמי ממושך, זה יכול להיות יקר¹⁹. מי מלח עשויים להיות חלופה מתאימה לתקופות קצרות של איסכמיה (<1 שעות)²⁰. בסופו של דבר, הבחירה בפתרון השימור תלויה בתכנון הניסוי²¹.

2. הליך הנמען

1. להזריק קטמין (80−100 מ"ג/ק"ג) וקסילזין (8−10 מ"ג/ק"ג) באופן תוך-צפקי לעכבר המקבל לצורך הרדמה. להזריק בופרנורפין בשחרור מושהה (0.5-1.0 מ"ג/ק"ג) תת עורית לשיכוך כאבים. אשר מישור כירורגי של הרדמה עם צביטה בוהן וזנב.
2. הכינו את אזור הניתוח על ידי גילוח השיער מאזור צוואר הרחם באמצעות סכין גילוח חשמלי. יש למרוח משחת עיניים סטרילית ולא תרופתית על העיניים כדי למנוע התייבשות של הקרנית.
3. מניחים את החיה בתנוחת שכיבה עם פורלימבים צמודים לגוף והראש מופנה מעט שמאלה. אבטח את הפורלימבים והאחוריים באמצעות סרט ניתוחי. יש לחטא את העור עם שלושה פילינגים מתחלפים של 0.75% יוד ו-70% אתנול.
4. בצעו חתך צווארי בקו האמצע מהמנדיבל התחתון ועד לעצם החזה.
5. טרנסקט שריר הירך הימני סטרנוקלידומסטואיד. הבלו את האונה הימנית של הבלוטה submandibular כדי ליצור מקום להשתלת שתל.
6. קושרים תפר מעל הווריד הג'וגולרי החיצוני הפרוקסימלי באמצעות תפר משי 6-0. Ligate את הווריד הג'וגולרי החיצוני הדיסטלי ואת הענפים הסמוכים באמצעות 8-0 תפר משי. בצע חתך רוחבי על פני הקיר הקדמי של הווריד הג'וגולרי החיצוני.
7. הניחו תפר ניילון בגודל 10-0 דרך קצה הווריד הג'וגולרי החיצוני הפרוקסימלי והרקמה שמתחתיו כדי לאבטח את הווריד במהלך החדרת השרוול (איור 1D).
8. ליגייט של עורק הצוואר המשותף הימני הדיסטלי באמצעות 8-0 תפר משי פשוט נחות מהביפורקציה הקרוטידית. קושרים תפר מעל עורק הצוואר המשותף הפרוקסימלי באמצעות תפר משי 6-0. מעבירים את העורק באופן דיסטלי בין התפרים.
9. בדומה לשרוול התורם, הניחו חפת אנגיוקטטר באורך 0.6 מ"מ של 24 גרם מעל עורק הצוואר המשותף הימני של המושתל. בעזרת מלקחיים עדינים, מקפלים בעדינות את קצוות העורק בחזרה מעל השרוול. הצמידו את הכלי המקופל לשרוול באמצעות עניבת ניילון 10-0.
10. מקם את לב התורם עדיף על אזור צוואר הרחם הנכון.
11. לטפטף מלוחים קרים על השתלת הלב כל כמה דקות במהלך ההשתלה.
12. הניחו תפר ניילון בגודל 10-0 דרך קצה אבי העורקים התורם ודרך נגיסה שטחית של הרקמה שמתחתיו כדי לאבטח את השתל במקומו (איור 1E).
13. לשטוף את אבי העורקים התורם עם 0.5 מ"ל של 0.9% מלוחים heparinized.
14. הכנס את חפת עורק הצוואר הנפוצה של המקבל לאבי העורקים התורם. לאבטח את האנסטומוזיס עם 8-0 עניבת משי (איור 1F). הסר את תפר עוגן אבי העורקים.
15. יש לאוורר את הווריד הג'וגולרי החיצוני על ידי שטיפת הווריד הג'וגולרי החיצוני של המקבל ב-0.5 מ"ל של 0.9% מי מלח שעברו הפרינטציה.
16. לבצע אנסטומוזיס של עורק הריאה על ידי החדרת השרוול של עורק הריאה התורם לתוך הווריד הג'וגולרי החיצוני של המקבל ולאבטח עם 8-0 עניבת משי (איור 1G). הסר את תפר עוגן הווריד הג'וגולרי החיצוני והעביר את הדופן האחורית הנותרת של הווריד הג'וגולרי החיצוני כדי לשחרר את השתל מהרקמה שמתחת. ודא שהשתל מכוון כראוי ללא פיתול או פיתול של האנסטומוזות.
17. שחררו את ההחלקות על וריד הג'וגולרי החיצוני של המושתל, ולאחר מכן את עורק הצוואר המשותף, כדי ליזום רפרפוזיה של השתלת הלב (איור 1H).
18. יש לסגור את החתך בעור הצווארי באמצעות תפר ניילון 6-0 מופרע.

3. טיפול לאחר הניתוח

1. יש להניח את המושתל בחדר התאוששות חם מיד לאחר הניתוח ולעקוב מקרוב עד להחלמה מלאה מההרדמה (כשעתיים).
2. המשך לעקוב מקרוב אחר בעל החיים (כל 6-8 שעות) במשך 72 שעות לפחות לאחר הניתוח לאיתור סימנים של התנהגות חריגה, כגון עייפות, רעד, נשימה מהירה או אנורקסיה.
3. לשליטה בכאב, יש להזריק קרפרופן (5 מ"ג/ק"ג) באופן תת עורי כל 8-12 שעות לשיכוך כאבים, בנוסף לבופרנורפין תת עורי (0.05 מ"ג/ק"ג) כל 8-12 שעות למשך 24-48 שעות החל מסוף הניתוח.

4. הדמיה תוך-ויטלית של שני פוטונים של סחר בלויקוציטים בשתל הלב

1. הזרקת קטמין (80-100 מ"ג/ק"ג) וקסילזין (8-10 מ"ג/ק"ג) באופן תוך-צפקי לעכבר מושתל B6 LysM-GFP¹⁷ 2 שעות לאחר השתלת רפרפוזיה להרדמה.
2. בצע אינטובציה orotracheal באמצעות 20 גרם אנגיוקטטר, כפי שתואר קודם^{לכן 18}.
3. חבר את האנגיוקטטר לצינורות ממכונת הנשמה מכנית של עכבר ואוורור עם אוויר החדר בקצב של 120 נשימות לדקה ונפח גאות של 0.5 מ"ל¹⁸.
4. להזריק 12 μL של 655 ננומטר נקודות קוונטיות לא ממוקדות (ראה טבלת חומרים), תלוי ב 50 μL של PBS תוך ורידי, כפי שתואר קודם^{לכן 13}.
5. פתח מחדש את החתך בצוואר כדי לחשוף את השתלת הלב. הנח את העכבר בתא ייצוב.
6. אבטחו חלק מהדופן החופשית של החדר השמאלי באמצעות טבעת דקה של דבק רקמה (ראו טבלת חומרים), המיושמת על כיסוי זכוכית המחובר ללוח התא העליון.
7. מקם את התא מתחת למיקרוסקופ הדו-פוטונים במטרה להשיג תמונות וסרטונים, כפי שתואר קודם^{לכן 13}.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

תוצאות

מודל השתלת לב הטרוטופי צווארי עכברי זה נוצל לביצוע למעלה מ-1,000 השתלות במעבדה שלנו, עם שיעור הישרדות של כ-97%. שיעור ההצלחה מעט גבוה יותר מדיווחים קודמים המשתמשים בטכניקות השתלת לב הטרוטופיות אחרות של צוואר הרחם בעכברים^10,11,20. ניתן לייחס זאת ל...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

באמצעות טכניקה זו, השתלת לב צוואר הרחם הטרוטופית של עכבר יכולה להתבצע תוך פחות מ -40 דקות על ידי מיקרוכירורג מנוסה ותוך כ -60 דקות על ידי מיקרוכירורג ברמת הכניסה. בעוד שהשתלת לב צווארי נחקרה במודלים רבים של בעלי חיים, מודל עכבר נותר תקן הזהב בשל זנים גנטיים רבים ומוגדרים היטב, יכולות שינוי גנט?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
6-0 braided silk ties	Henry Schein Inc	7718729
0.75% Providone iosine scrub	Priority Care Inc	NDC 57319-327-0
10-0 nylon suture	Surgical Specialties Corporation	AK-0106
655-nm nontargeted Q-dots	Invitrogen	Q21021MP
70% Ethanol	Pharmco Products Inc	111000140
8-0 braided silk ties	Henry Schein Inc	1005597
Adson forceps	Fine Science Tools Inc	91127-12
BALB/c and C57BL/6 mice (6-8 weeks)	Jackson Laboratories
Bipolar coagulator	Valleylab Inc	SurgII-20, E6008/E6008B
Carprofen (Rimadyl) injection	Transpharm	35844
Carprofen (Rimadyl) oral chewable tablet	Transpharm	38995/37919
Custom-built 2P microscope running ImageWarp acquisition software	A&B Software
Dumont no. 5 forceps	Fine Science Tools Inc	11251-20
Fine vannas style spring scissors	Fine Science Tools Inc	15000-03
GraphPad Prism 5.0	Sun Microsystems Inc.
Halsey needle holder	Fine Science Tools Inc	91201-13
Halsted-Mosquito clamp curved tip	Fine Science Tools Inc	91309-12
Harvard Apparatus mouse ventilator model 687	Harvard Apparatus	MA1 55-0001
Heparin solution (100 U/mL)	Abraxis Pharmaceutical Products	504031
Imaris	Bitplane
Ketamine (50 mg/kg)	Wyeth	206205-01
Microscope—Leica Wild M651 × 6–40 magnification	Leica Microsystems
Moria extra fine spring scissors	Fine Science Tools Inc	15396-00
Ohio isoflurane vaporizer	Parkland Scientific	V3000i
Qdots	ThermoFisher	1604036
S&T SuperGrip Forceps angled tip	Fine Science Tools Inc	00649-11
S&T SuperGrip Forceps straight tip	Fine Science Tools Inc	00632-11
Sterile normal saline (0.9% (wt/vol) sodium chloride	Hospira Inc	NDC 0409-4888-20
Sterile Q-tips (tapered mini cotton tipped 3-inch applicators)	Puritan Medical Company LLC	823-WC
Surflow 20 gauge 1/4-inch Teflon angiocatheter	Terumo Medical Corporation	SR-OX2032CA
Surflow 24 gauge 3/4-inch Teflon angiocatheter	Terumo Medical Corporation	R-OX2419CA
ThermoCare Small Animal ICU System (recovery settings 3 L/min O2, 80 °C, 40% humidity)	Thermocare Inc
VetBond	Santa Cruz Biotechnology SC361931	NC0846393
Xylazine (10 mg/kg)	Lloyd Laboratories	139-236