טווינה במודל חולדת כתף קפואה: פרוטוקול יעיל וניתן לשחזור

Summary

מחקר זה מפתח פרוטוקול Tuina יעיל וניתן לשחזור לטיפול בכתף קפואה שהוקמה במודל חולדה. גישה זו תסייע ללמוד את שיטת הטיפול Tuina עבור כתפיים קפואות.

Abstract

כתף קפואה (FS) היא מצב שכיח ללא טיפול אופטימלי מוגדר. טיפול טווינה, טכניקת רפואה סינית מסורתית (TCM) המשמשת לטיפול בחולי FS בבתי חולים סיניים, הוכיחה תוצאות מצוינות, אך מנגנוניה אינם מובנים במלואם. בהתבסס על מחקר קודם, עבודה זו נועדה לפתח פרוטוקול Tuina עבור מודל חולדות FS. חילקנו באופן אקראי 20 חולדות SD לקבוצות ביקורת (C; n = 5), מודל FS (M; n = 5), מודל FS לטיפול Tuina (MT; n = 5), ומודל FS לטיפול פומי (MO; n = 5). מחקר זה השתמש בשיטת אימוביליזציה יצוקה כדי לבסס את מודל חולדת FS. ההשפעה של Tuina ו dexamethasone דרך הפה על טווח התנועה glenohumeral (ROM) הוערך, ואת הממצאים ההיסטולוגיים הוערכו. המחקר שלנו הראה כי Tuina ו dexamethasone דרך הפה היו מסוגלים לשפר את הכתף פעיל ROM ולשמר את המבנה של הקפסולה, עם טיפול Tuina הוכיח להיות יעיל יותר מאשר dexamethasone אוראלי. לסיכום, פרוטוקול Tuina שנקבע במחקר זה היה יעיל מאוד עבור FS.

Introduction

כתף קפואה (FS), הידועה גם בשם קפסוליטיס דבק של הכתף, היא מחלה המגבילה את עצמה המאופיינת בכאבי כתף וליקויים בניידות. זה בדרך כלל משפיע על אנשים בין הגילאים 30 ל 70 שנים, עם גיל ממוצע של 50 שנים, ויש לו שכיחות של כ 5% באוכלוסייה הסינית¹. נקבות מדווחות על שכיחות גבוהה פי 1.6 של FS בהשוואה לזכרים². השכיחות של FS גבוהה יותר אצל אנשים עם סוכרת, הפרעות מטבוליזם גלוקוז ושומנים או מחלות קשורות אחרות, הנע בין 10% ל 36% ^2,3. הטיפולים הקליניים הנוכחיים עבור FS כוללים פיזיותרפיה, תרופות סטרואידים, וטיפולים כירורגיים⁴.

Tuina, טיפול ברפואה סינית מסורתית (TCM), הוכח ביעילות להקל על כאבי כתף בחולי FS, ולשפר את איכות חייהם ^5,6. עם זאת, המנגנונים הבסיסיים של טיפול זה אינם מובנים היטב. לכן, שימוש במודלים של בעלי חיים כדי לחקור את ההשפעות והמנגנונים של טווינה בטיפול ב- FS הוא חיוני.

למפרק כתף החולדה יש מבנה מורכב הדומה לזה של הכתף האנושית והוא משמש לעתים קרובות במחקרים מכניסטיים של FS⁷. מודל חולדת FS מאופיין בירידה ב- ROM glenohumeral ו- capsule fibrosis⁸. כמו כן, מודל זה מאפשר תצפית על קפסולת הכתף ומאפשר מחקר פתולוגי תוך תיקון הפציעה⁹. יתר על כן, קורטיקוסטרואידים אוראליים משמשים לעתים קרובות כקבוצת הביקורת במחקר הטיפול ב- FS¹⁰. מחקר זה נועד לפתח פרוטוקול Tuina עבור מודל חולדות FS ומדגים את ההיתכנות של ביצוע ניסויים בבעלי חיים במחקר Tuina על ידי השוואת היעילות של טיפול Tuina ו dexamethasone אוראלי.

Protocol

מחקר זה אושר על ידי ועדת האתיקה של בית החולים המסונף של אוניברסיטת שאנדונג לרפואה סינית מסורתית (מספר: AWE-2022-023).

1. חיות ניסוי

1. עשרים חולדות ספראג-דולי (SD) זכרים (בני 7 שבועות, 250-280 גרם) שוכנו בתנאים סטנדרטיים (טמפרטורת החדר [RT] 20-24 מעלות צלזיוס, לחות 40%-60%, ומחזור אור/חושך של 12 שעות/12 שעות).

2. שיטת קיבוץ

1. קבץ את חולדות SD לקבוצת ביקורת (C), קבוצת ביקורת מודל FS (M), קבוצת טיפול טווינה מודל FS (MT) וקבוצת טיפול אוראלי מודל FS (MO), כל אחת מורכבת מ -5 חולדות. החזיקו 5 חולדות בכל כלוב (אותה קבוצה).
2. לאחר 7 ימי התאקלמות, יש לשתק כתף אחת של החולדות בקבוצות M, MT ו-MO באמצעות אימוביליזציה יצוקה מגבס למשך 3 שבועות כדי לחקות FS כמתואר בסעיף הבא.
3. תנו טיפול בטווינא לחולדות בקבוצת MT במשך שבועיים, כמתואר בסעיף 4 (איור 1).
4. חשב את המינון הנדרש של דקסמתזון עבור כל קילוגרם של חולדות (0.0675 מ"ג ליום) בהתבסס על המינון הבוגר (0.75 מ"ג ליום) והיחס בין שטח הפנים של חולדה לגוף האדם (0.018).
5. מתן תמיסת דקסמתזון תוך קיבתית יומית לחולדות בקבוצת MO במינון 0.067 מ"ג/ק"ג/יום בשעה 7:00 למשך שבועיים.
   הערה: השתמש בשיטת קיבוץ זו כדי לאשר את ההשפעה של פרוטוקול Tuina במחקר זה. לבצע את שיטת הקיבוץ על פי מטרות ניסוי במחקרים שונים.

3. פיתוח מודל FS

1. מרדימים חולדות באמצעות טריברומואתנול (250 מ"ג/ק"ג, בהזרקה תוך צפקית)¹¹.
   הערה: בהתאם לדרישות ועדת האתיקה של המוסד, אוחסנה תמיסת מלאי המורכבת מטריבומואתנול (10 גרם) ואלכוהול טרט-עמיל (10 מ"ל) בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.  לפני השימוש הוא דולל ל-2% במים מזוקקים.
2. מרחו תחבושות ספוגות גבס על הכתף והחזה הימניים של החולדות, ושמרו על הגפה הקדמית הימנית ב-90° של סיבוב פנימי של מפרק הכתף למשך 3 שבועות (איור 2)¹².
   הערה: עקבו אחר חולדות כדי לוודא שהן יכולות לבצע פעילויות פיזיולוגיות רגילות כגון הליכה, אכילה ושתייה. תקן את תחבושת הגבס אם החולדות אינן מסוגלות לבצע פעילויות פיזיולוגיות רגילות.
3. לאשר את הקמתו המוצלחת של מודל FS על ידי התבוננות בהתפתחות תסמינים כגון נוקשות במפרק הכתף הימנית, התכווצות הגפה העליונה הימנית, ניוון שרירים וצליעה בחולדות¹³.

4. שיטת טווינא

הערה: לאורך כל ההליך, על החוקר ללבוש ציוד מגן אישי. רק רופא טווינה מקצועי אחד חייב לבצע את כל המניפולציות (איור 3, איור 4 ואיור 5).

1. התאמנו באמצעות מערכת קביעת פרמטרים של טכניקת עיסוי חכמה, הכוללת קולטן מכני ומחשב (איור 3A).
   1. בצעו מניפולציות על הקולטן המכני ועל פרמטרי הכוח בשלושה כיוונים המוצגים באמצעות תוכנה (איור 3B).
   2. השתמשו באצבע האגודל כדי לבצע את שיטת הלישה הסיבובית בתנועה סיבובית בחוזק של 0.5 ק"ג ובתדירות של 100-120 פעמים לדקה (איור 3C).
   3. השתמשו בקצה האגודל כדי לבצע את שיטת הלחיצה הנקודתית בעוצמה של 0.5 ק"ג (איור 3D).
   4. בצעו טווינא על החולדות על ידי שמירה על התצוגה המכנית המוזכרת בשלבים 4.1.2 ו-4.1.3 למשך דקה אחת.
2. החזיקו את החולדה עד שהיא תירגע (~2 דקות). לאחר מכן, בצע את המניפולציה. הניחו את החולדה בתנוחת שכיבה רוחבית, אך המיקום עשוי להשתנות בהתאם לשיטות מניפולציה שונות.
3. השתמשו באצבע המורה הימנית ובאצבע האמצעית כדי להדק את הגפה הקדמית הימנית של החולדה ולהגמיש אותה ולהאריך אותה מספר פעמים כדי לקבוע את מיקומם של מפרק הכתף, המרפק ועצם הזרוע של החולדה.
4. לשו את כתף ימין, הגפה הקדמית והגב של החולדה באמצעות סיבוב בכיוון השעון עם עיסת האגודל בחוזק של 0.5 ק"ג ובתדירות של 100-120 פעמים לדקה למשך 3 דקות (איור 4A-C).
   1. לתפעל את שרירי הגפיים הקדמיות במצב שכיבה לרוחב.
   2. לתפעל את שרירי הכתף והגב במצב נוטה.
5. לחץ על נקודות הדיקור LI15 (Jianyu), SI11 (Tianzong), HT01 (Jiquan,) ו-LI11 (Quchi) במאונך עם קצה האגודל 30 פעמים לכל נקודת דיקור בחוזק של 0.5 ק"ג (איור 4D-G).
   1. השתמשו באטלס הדיקור של חולדה כדי להגדיר את המיקום של כל נקודת דיקור (איור 5)^14,15.
   2. הקש LI15, הממוקם בשקע הקדמי-נחות לקצה האקרומיאלי, במצב נוטה.
   3. לחץ על SI11, הממוקם בשקע ל- infraspinatus fossa בנקודת האמצע של עמוד השדרה הסקפולרי, במצב נוטה.
   4. לחץ על HT01, הממוקם במרכז בית השחי, במצב שכיבה.
   5. לחץ על LI11 הממוקם בשקע המדיאלי לרדיאליס הקרפי המרחיב בקצה הלטרלי של הקמט הקוביטלי במצב שכיבה לטרלי.
6. החזיקו את מפרק הכתף עם האגודל השמאלי והאצבע האמצעית, ומתחו את הגפה הקדמית בתנוחות החניכה, החטיפה, השלוחה הקדמית וההארכה האחורית למשך 10 שניות (איור 4H-K).
   הערה: שיטת מתיחה זו חייבת להתבצע ללא התנגדות בחולדות.
7. השהה את הליך Tuina אם החולדה נעשית נסערת. לטפו את החולדה במשך 10 שניות כדי להרגיע אותה, ואז המשיכו בניסוי.
8. בצע את ההליך מדי יום במשך שבועיים.

5. מדידה של ROM glenohumeral

הערה: חשוב להשלים את תהליך המדידה מהר ככל האפשר כדי למנוע ניוון של רקמת הקפסולה המפרקת.

1. הסר את עצם השכמה ואת שני השלישים הפרוקסימליים של עצם השכמה לאחר הקרבת החולדה עם מינון מופרז של tribromoethanol (מינון ראשוני 3x, על ידי הזרקה intraperitoneal), חושף את הקצה התחתון של עצם השכמה.
2. הכנס מחט הזרקה (1.2 ס"מ x 0.45 מ"מ) לאורך פיר ההומרל לתוך ראש ההומרל.
3. הכנס שתי מחטי הזרקה אנכית לפינה העליונה והתחתונה של עצם השכמה על קצף פלסטיק עטוף ביריעה כירורגית סטרילית.
4. חבר חוט דק למחט ההזרקה על פיר ההומרל ומשוך אותו בקצה השני בכוח של 5 גרם כדי להפוך אותו מקביל לפיר ההומרלי. מדדו את הזווית בין הקצה התחתון של עצם השכמה לבין פיר ההומרל (איור 6).
   הערה: כדי להבטיח תוצאות אמינות, בקש מחוקר נפרד לבצע את המדידות.
5. דווח על נתונים כאמצעי ±סטיית תקן (SD) באמצעות יישום תוכנה לניתוח סטטיסטי.
   הערה: תוכנת SPSS (SPSS, גרסה 25.0) שימשה כאן.
6. נתח את ההבדלים בין קבוצות באמצעות ניתוח חד-כיווני של שונות (ANOVA).
7. השג גרפיקת עמודות באמצעות תוכנה מתאימה.
   הערה: GraphPad Prism 8 שימש כאן.
8. הערך פתולוגיה של הקפסולה באמצעות צביעת H&E ו- Masson לאחר המדידה.

6. הכנת המדור

1. לאחר הערכת ROM glenohumeral, לתקן דגימות שלמות ב 4% PFA במשך 3 ימים, ולאחר מכן decalcification ב EDTA (pH 7.2) פתרון במשך חודשיים נוספים.
2. לאחר התייבשות, פורסים גושי רקמה משובצים המכילים את הדגימות לפרוסות 5 מיקרומטר¹⁶.
3. יבשו את הפרוסה בטמפרטורה של 65°C למשך 60 דקות.
4. מעלים את הפרוסה.
5. משרים את הפרוסה בקסילן I, קסילן II וקסילן III למשך 7 דקות, לאחר מכן סדרת אתנול יורדת (אתנול נטול מים, 5 דקות; 95% אתנול, 2 דקות; 80% אתנול, 2 דקות ו-70% אתנול, 2 דקות), ולבסוף במים אולטרה-טהורים למשך 2 דקות.

7. צביעת יד

1. מכתימים את החלקים באמצעות המטוקסילין למשך 5 דקות, שוטפים באתנול חומצה הידרוכלורית 1% למשך 3 שניות, ושוטפים במים זורמים למשך 5 דקות.
2. מכתימים את הקטע עם eosin במשך 3 דקות ושוטפים במי ברז.
3. משרים את החלק בסדרת אתנול (95% אתנול I, 3 שניות; 95% אתנול II, 3 שניות; אתנול נטול מים I, 3 שניות, ואתנול נטול מים II, 1 דקות) ולאחר מכן טובלים בסדרת קסילן (קסילן I, 1 דקות; קסילן II, 1 דקות).
4. יש להניח טיפה של חומר איטום חניכיים ניטרלי על כל דגימה. אטמו כל דגימה בכוס כיסוי.
5. אסוף תמונות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי הפוך (סרגל קנה מידה = 100 מיקרומטר).

8. צביעת מסון

1. בעזרת עט אימונוהיסטוכימי, ציירו עיגול סביב החלקים ולאחר מכן דגרו על החלקים בתמיסה של Bouin במשך שעתיים ב-37°C למורדנט. לאחר מכן, לשטוף את החלקים עם מים עד צבע צהוב נעלם.
2. לטפל בדגימות עם צבע כחול lapis lazuli במשך 3 דקות ולאחר מכן לשטוף אותם עם מים מזוקקים.
3. לאחר צביעת הקטעים בהמטוקסילין (מאייר) למשך 2 דקות, יש לטפל בקטעים במשך 3 שניות בתמיסת התמיינות אתנול חומצית. לאחר מכן, לשטוף את החלקים במים זורמים במשך 10 דקות.
4. מכתימים את החלקים בתמיסת צבע מגנטה של פונסו למשך 10 דקות ולאחר מכן שוטפים אותם במים.
5. לטבול את החלקים בתמיסת חומצה phosphomolybdic במשך 10 דקות.
6. הוסף תמיסת צביעה כחולה אנילין לחלקים למשך 5 דקות, ולאחר מכן שטוף אותם עם תמיסת עבודה חומצה חלשה במשך 2 דקות.
7. יש לייבש ולהפוך את המקטעים לשקופים כמתואר בשלב 7.3.
8. יש להניח טיפה של חומר איטום חניכיים נייטרלי על כל חלק ולכסות אותו בכוס כיסוי. השאירו את החלקים במכסה אדים לייבוש.
9. אסוף תמונות כמתואר בשלב 7.5.

תוצאות

הפעילות הגופנית של חולדות נצפתה כדי להעריך את ההצלחה או הכישלון של מודל FS. מחקר קודם הראה כי אימוביליזציה של הגבס הפחיתה באופן משמעותי את מרחק הנסיעה ואת מהירות ההליכה בהשוואה לחולדות רגילות¹⁷. מחקר אחר הציע כי FS לא השפיע על המרחק שעבר, וצליעה הייתה התסמין השכיח ביותר¹³. מחקר זה הראה נוקשות במפרק כתף ימין, התכווצות של הגפה העליונה הימנית, ניוון שרירים וצליעה בחולדות לאחר דוגמנות. נגעים אלה בקבוצות MT ו- MO נפתרו לחלוטין על ידי שבועיים של התערבות. אבל לא היה שינוי משמעותי בקבוצת M.

הקריטריון העיקרי להערכת האפקטיביות של Tuina ב- FS הוא מדידת ROM glenohumeral¹⁸. ראינו שהערכים הממוצעים של ROM glenohumeral היו 149.3° ±-5.9° בקבוצת C, 111.1° ±-3.9° בקבוצת M, 128.5° ±-2.8° בקבוצת MT ו-119.56° ±-2.9° בקבוצת MO. כפי שמתואר באיור 7, הרום הגלנוהומרלי של חולדות בקבוצת M היה נמוך משמעותית מזה שבקבוצת C (P < 0.0001). יתר על כן, ROM בקבוצת MT וקבוצת MO היה גבוה משמעותית מזה שבקבוצת M (P < 0.05, P < 0.0001). עם זאת, ROM בקבוצת MO היה נמוך משמעותית מזה בקבוצת MT (P < 0.0001). ממצא זה מצביע על כך שטווינה יכולה לשפר באופן משמעותי את תפקוד מפרקי הכתף בחולדות FS.

בנוסף, צביעת H&E וצביעת Masson יכולות להדגים עוד יותר את ההשפעות של Tuina בשימור המבנה ובהפחתת פיברוזיס בכמוסה. כדי להקל על התצפית, הקפסולה של מפרק glenohumeral שימש לממצאים היסטולוגיים. קפסולת מפרק הכתף מורכבת משכבות סינוביאליות וסיביות¹⁹. צביעת H&E חשפה התפשטות סינוביוציטים, קפלים סינוביאליים שטוחים, קיפאון אריתרוציטים והתפשטות כלי דם בקבוצת M, שהם מאפיינים אופייניים של FS (איור 8A,B). המאפיינים האלה פחתו במידה מסוימת לאחר טיפול בטווינה ובדקסמטזון דרך הפה (איור 8C,D). בהשוואה לקבוצת MT, קבוצת MO הראתה גם הרבה תאים סינוביאליים. צביעת מסון הראתה את סידור צרורות הסיבים בכל קבוצה (חיצים צהובים). הקפסולה מורכבת מרשת רופפת של סיבים רשתיים עם צרורות סיבים המסודרים בכיוון מסודר (איור 8E). בקבוצת M, צרורות הסיבים היו מסודרים בצורה לא מסודרת, מה שמצביע על פיברוזיס כמוסה (איור 8F). הקפסולות של חולדות בקבוצת MT הראו שצרורות הסיבים מרובדים בצורה מסודרת וברורה, אבל נשארים מעט לא מסודרים בקבוצת MO (איור 8G,H).

איור 1: פרוטוקול לביסוס מודל FS והתערבות טווינה. החולדות היו על האכלה אדפטיבית במשך 7 ימים, הקמת מודל FS במשך 21 ימים, וטיפול Tuina בוצע מדי יום במשך 14 ימים. ביום ה-36 הוקרבו כל החולדות. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

איור 2: אימוביליזציה יצוקה לביסוס מודל חולדה של FS. לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

איור 3: בקרה כמותית של מניפולציה . (A) מערכת קביעת פרמטרים אינטליגנטית של טכניקת עיסוי. (B) ניתן למדוד שלושה כוחות ככוח מקביל לאורך כיוון X, כוח אורכי לאורך כיוון Y וכוח אנכי לאורך כיוון Z. (C) חוזק שיטת הלישה הסיבובית. העקומה האדומה מייצגת את הכוח האנכי המיוצב (0.5 ק"ג). העקומה הכתומה מייצגת את הכוח המקביל הרגיל. העקומה הלבנה מייצגת את הכוח האורכי הרגיל. (D) חוזקה של שיטת הלחיצה הנקודתית. העקומה האדומה מייצגת את הכוח האנכי (0.5 ק"ג). עקומות כתומות ולבנות מייצגות כוחות לא מקבילים ואורכיים. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

איור 4: מניפולציה המשמשת בטיפול בטווינה. (א-ג) ללוש את שרירי הכתפיים הימניות, הגפיים הקדמיות והגב. (ד-ג) הקש בנקודה LI15, SI11, HT01 ו- LI11. (ח-ק) למתוח את הגפה הקדמית בתנוחת אדוקציה, חטיפה, הארכה קדמית והארכה אחורית. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

איור 5: מיקומים אנטומיים של LI15, SI11, HT01 ו-LI11 בחולדות. ● משטח רוחבי, ○ משטח מדיאלי. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

איור 6: מדידה של ROM glenohumeral. חוט דק מחובר למחט הזרקה המוחדרת לפיר ההומרלי ונמשכת בקצה השני בכוח של 5 גרם כדי להפוך אותה למקבילה לפיר ההומרלי. הזווית בין הקצה התחתון של עצם השכמה לבין פיר ההומרל נמדדת כ- glenohumeral ROM. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

איור 7: ROM Glenohumeral בשלוש קבוצות של חולדות. ערכים פירושם ± S.D., n = 5. הבדלים משמעותיים מסומנים על ידי ANOVA חד-כיווני (^A P < 0.001 ו^{- b}P < 0.0001). אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

איור 8: ממצאים היסטולוגיים של קפסולת הכתף. (A,E) קבוצת הביקורת מכילה מבנה קפסולה תקין (צביעת H&E ו-Masson). (ב,ו) קבוצת המודלים FS מדגימה שינויים במבנה הקפסולה באופן הבא: קפלים סינוביאליים שטוחים, פיברוזיס קפסולה וצרורות סיבים מופרעים (צביעת H&E ו- Masson). (ג,ז). מודל FS בשילוב עם קבוצת Tuina ממחיש כי מבנה הקפסולה קרוב לנורמה, ופיברוזיס אינו ברור (צביעת H&E ו- Masson). (ד,ח) מודל FS בשילוב עם דקסמתזון אוראלי מראה כי מבנה הקפסולה קרוב לנורמה, ופיברוזיס ברור (צביעת H&E ומאסון). סרגל קנה מידה = 100 מיקרומטר. HH: ראש ההומרוס; חץ שחור: קפלים סינוביאליים; חץ אדום: קיפאון אריתרוציטים והתפשטות כלי הדם; חץ צהוב: צרורות סיבים. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

Discussion

השלב הקריטי הראשון הוא בחירת הדגם. בשל הקושי ביישום מודל FS העיקרי, אימוביליזציה יצוקה וקיבוע פנימי כירורגי משמשים לעתים קרובות כדי להקים מודלים חולדות FS ^9,12. ההגבלה החמורה ביותר של ניידות הכתף ופיברוזיס של הקפסולה נצפו במודל FS שהוקם על ידי אימוביליזציה יצוקה במשך 3 שבועות^12,20. במחקר זה, שיעורי ההצלחה של מודל FS היו מצוינים, עם 100% הצלחה.

השלב הקריטי השני הוא המניפולציות המשמשות בפרוטוקול זה. במחקר זה נעשה שימוש בשלוש מניפולציות (לישה, לחיצה ומתיחה). מניפולציית לישת הרקמה הרכה הוחלה על הכתף, עצם השכמה והזרוע העליונה כדי להרפות את השרירים. מניפולציה בלחיצה בוצעה על ידי הפעלת לחץ על נקודות דיקור כגון LI15, SI11, HT01 ו- LI11, הנפוצים ביותר בפרקטיקה הקלינית עבור FS ^5,21. LI15, SI11 ו-HT01 ממוקמים בתנוחות סביב קפסולת הכתף ויכולים להיות יעילים בשיפור תפקוד ה-ROM והכתף²². LI11 משמש לעתים קרובות לפגיעה מוטורית בגפיים העליונות וממוקם באותו מרידיאן כמו LI15. שיטת התאמת אקופוינט זו מסייעת לשפר את היעילות של LI15²³. לאחר הרפיה מלאה, טכניקות מתיחה שימשו כדי לשחזר פעילויות פונקציונליות.

הבעיה האפשרית בפרוטוקול זה היא שהחולדות מפגינות התנגדות עזה במהלך הטווינה, שעשויה להיגרם על ידי פחד ולא מעבר לסבילות של החולדות. בשלב זה, יש להפסיק את המניפולציות עד שהחולדות יירגעו (ליטוף במשך 10 שניות מרגיע את החולדות). בנוסף, יש להתאים את מידת המתיחה בהתאם לסימפטומים של החולדות. בתחילה, המגבלה של מפרק הכתף הייתה ברורה, ומשרעת המתיחה הייתה קטנה. יחד עם ההתערבות, תפקוד מפרק הכתף של החולדות התאושש בהדרגה ומשרעת המתיחה גדלה בהדרגה. הסטנדרט הוא שחולדות יכולות לקבל את שיטת המתיחה ללא התנגדות. לבסוף, לחולדות יש מידה מסוימת של תוקפנות, וטווינה דורשת מגע ממושך עם חולדות, ולכן חשוב ללבוש ציוד מגן אישי.

הבקרה הכמותית של מניפולציה היא הקשה ביותר בניסויי טווינה. בעוד סימולטור מניפולציה עיסוי יכול לשמש כדי לשלוט על כוח ותדירות של מניפולציה אחת, שיטה זו מוגבלת כאשר מניפולציות מרובות ואתרי טיפול מעורבים^24,25. בפרקטיקה הקלינית, טווינה מבוצעת בדרך כלל ישירות על ידי מתרגלים, ובמחקר זה, היה קשה להתערב עם ציוד רפואי. כדי לשלוט בגירוי, ניתן להשתמש במערכת קביעת הפרמטרים של טכניקת עיסוי חכמה כדי לתקנן את האימון של Tuina. לאחר האימון, החוקר יכול להפעיל את אותו כוח על כל חולדה במידה מסוימת. המגבלה העיקרית של פרוטוקול זה היא שלא ניתן לשלוט לחלוטין במניפולציות.

לטיפול TCM Tuina יש היסטוריה עשירה של שימוש ברחבי סין, עם רופאים שונים בבתי חולים המשתמשים בשילובי מניפולציות ואתרי טיפול שונים. לכן, חשוב לקבוע פרוטוקולים הניתנים לשכפול ויעילים הן לניסויים בבעלי חיים והן למחקרים קליניים. במחקר זה, המניפולציות ונקודות הדיקור בהן נעשה שימוש התבססו על מחקר קודם של הצוות שלנו, המשלב את הניסיון הקליני שלנו עם המאפיינים של מודל בעלי החיים FS²¹. מחקר זה הדגים את יעילותו של פרוטוקול Tuina שפותח בשיפור תפקוד מפרק הכתף ובהפחתת פיברוזיס קפסולה בחולדות FS. ממצאים אלה מספקים בסיס לחקירות נוספות של המנגנונים העומדים בבסיס הטיפול בטווינה. יתר על כן, הפרוטוקול יכול להיות שימושי עבור חוקרים המעוניינים לחקור את היעילות של טיפולים רפואיים אלטרנטיביים עבור FS.

מחקר קודם מצא כי מנגנון התערבות טווינא על פיברוזיס עשוי להיות קשור להפחתת הרגולציה של TGF-β ו- CTGF תוך ויסות האיזון של MMP-1/TIMP-1, ובכך להקל על ייצור מטריצה חוץ-תאית (ECM)²⁶. ההשפעה של טווינה על הפיברוזיס של קפסולת הכתף עשויה להיות מושגת באמצעות ויסות של מנגנונים שונים. עם זאת, נדרש מחקר נוסף כדי להבין באופן מלא את המנגנונים המעורבים בשיפור זה.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
4% paraformaldehyde	Solarbio	P1110
Embedding machine	Changzhou Paisijie Medical Equipment Co., Ltd	BM450A
Ethylene Diamine Tetraacetic Acid (EDTA)	Solarbio	E1171
Hematoxylin eosin (HE) staining kit	Sparkjade	EE0012
Intelligent-massage technique parameter determination system	Shanghai Dukang Intrument Equipment Co. Ltd	ZTC-
Microtome	Leica	531CM-Y43
Modified Masson Trichrome Staining Solution	Shanghai yuanye Bio-Technology Co., Ltd	R20381-8	Bouin 50 mL; lapis lazuli blue dye 50 mL; Hematoxylin (Mayer) 50 mL; acidic ethanol differentiation solution 50 mL; ponceau magenta dye solution 50 mL; phosphomolybdic acid solution 50 mL; aniline blue staining solution 50 mL;  weak acid 50 mL
Tribromoethanol	Macklin	T903147-5