In This Article

Summary

פלטפורמת ניסוי המוקסיבציה יכולה לתקן את החולדות ללא הגבלה, והחולדות יכולות לעבור מוקסיבציה רב-דיקורית במצב ערות, להבטיח את רווחת החולדות, להגן על בטיחות המפעילים, להבטיח יעילות טיפולית ולשפר את יעילות הניסוי.

Abstract

בתהליך של moxibustion בפועל קליני, הנבדקים צריכים להיות במצב רוח יציב יציב יציב כדי למנוע בעיות כגון אפר מוקסה נופל, עור רותח, אפקט מרפא ירוד. בעיות כאלה קיימות גם בניסוי מוקסיבציה של חולדות. כדי לדמות פרקטיקה קלינית, יש צורך להציג מכשיר ניסיוני בניסויים בבעלי חיים, כלומר, מכשיר moxibustion עם חולדות קבועות וסנכרון טיפול moxibustion, אשר יכול לגרום חולדות ניסיוני לקבל טיפול moxibustion בשקט ובנוחות תחת ללא הרדמה.

קבוצת המחקר שלנו עיצבה פלטפורמה ניסיונית למוקסיבציה של חולדות. המכשיר מוסגר על ידי לוח עץ עם לוח בסיס תומך, מספר רכיבים קבועים ורכיבים מחולקים. המכשיר יכול להשיג את מצב הפעולה של moxibustion בחולדות ללא קשירה, הימנעות הרדמה ו crading ובו זמנית לחשוף נקודות דיקור מרובות על הגב. פעולה זו יכולה למנוע פגיעה פיזית ונפשית בחולדות ובמפעילים, מה שמשפר את יעילות המחקר ומקדם עוד יותר את הפיתוח והמחקר של ניסויים בבעלי חיים מוקסיבציה.

המכשיר בעל מבנה פשוט, קל לתפעול ולפופולריזציה, מתוכנן באופן מקיף וחדשני, ניתן לשימוש חוזר ומתאים לניסויים בחולדות המבוססים בעיקר על מוקסיבציה. מאמר זה מציג בעיקר את מבנה מכשיר הפלטפורמה הניסיונית למוקסיבציה של חולדות, ההליך הבסיסי של מוקסיבציה של עוגות צמחים-מופרדות בחולדות ניסוי באמצעות המכשיר ומתאר את הקמת מודל החולדות של אי ספיקת כליות כרונית (CRF) ותוצאות ניסוי מייצגות.

Introduction

Moxibustion הופיע עם היישום של אש. רופאים עתיקים מצאו בטעות כי חלקים מסוימים של הגוף הבוער באש יכולים להקל על הסימפטומים של אי נוחות. לאחר תרגול ארוך טווח, "Artemisiae Argyi Folium" נבחר בהדרגה כחומר moxibustion העיקרי1. מוקסיבציה היא אחד המרכיבים החשובים של הרפואה הסינית המסורתית, ובשילוב עם מרתח ודיקור אקופוינט ברפואה הסינית המסורתית, שלושת הטיפולים העיקריים הללו ברפואה הסינית המסורתית נמצאים בשימוש נרחב במחלות רבות.

רופאים סינים השתמשו לעתים קרובות במוקסיבציה לטיפול במחלות כבר בתקופת חואנגדי נייג'ינג (הקלאסיקה הפנימית של הקיסר הצהוב). Artemisiae Argyi Folium הוא סוג של צמחי מרפא סיניים עם פונקציה של חימום מרידיאנים כדי לעצור דימום, להפיג הצטננות, ולהקל על כאב. הוא נפוץ בטיפול החיצוני של הרפואה הסינית המסורתית וניתן להשתמש בו גם בטיפול במרתח של הרפואה הסינית המסורתית. מוקסיבציה היא סוג של טיפול חיצוני2 שבו מוקסה או תרופות אחרות ממוקמות על נקודות דיקור על פני הגוף כדי לשרוף ולהשתמש בחום המתון של אש מוקסיבציה ואת ההשפעה של תרופות לטיפול במחלות3.

כאחת משיטות הטיפול הנפוצות, מוקסיבציה נמצאת בשימוש נרחב בפרקטיקה הקלינית. עם ההתרחבות המתמשכת בטיפול במוקסיבציה, מספר גדל והולך של מחקרים חקרו את מנגנון המוקסיבציה וביצעו ניסויים רבים בבעלי חיים 4,5.

ניתן לסווג את שיטת המוקסיבציה כמוקסיבציה ישירה ומוקסיבציה עקיפה. השיטה של הנחת moxibustion על העור של הגוף נקרא moxibustion ישיר. מוקסיבציה עקיפה מפרידה את פני השטח של חרוט המוקסה ואת נקודות הדיקור עם תרופות או חומרים אחרים. מוקסיבציה יכולה לטפל במחלות שונות, כגון תסמונת המעי הרגיז6, תסמונת התשישות הכרונית7 ודלקת מפרקים ניווניתבברך 8.

מאמר זה דן בעיקר במנגנון של צמחים-עוגה-מופרד-מוקסיבציה. צמחי מרפא-עוגה-מופרדים-מוקסיבציה שייכת לשיטת המוקסיבציה העקיפה, שבה מניחים קונוס מוקסה על העוגה הרפואית כדי להחיל מוקסיבציה. מחקרים עכשוויים הראו כי ההשפעות האינפרא אדום וההתחממות הנוצרות על ידי שריפת חרוט מוקסה, ההרכב הכימי של זפת עלי מוקסה וגירוי אקופוינט יכולות להשיג מניעה וטיפול במחלות9 על ידי הגברת חדירת התרופות לנקודות דיקור. לכן, צמחים-עוגה-מופרד-מוקסיבציה מייצרת בעיקר "אפקט מקיף" באמצעות מוקסיבציה, תרופות ונקודות דיקור10.

מחקרים קודמים הראו כי מוקסיבציה היא שיטה יעילה לטיפול ב- CRF 11,12,13,14,15, אך המנגנון הבסיסי עדיין אינו מוגדר. עבדנו על מחקרים קליניים וניסויים בבעלי חיים על CRF. כיום, אנו עורכים מחקר ניסיוני של מוקסיבציה על חולדות CRF המבוסס על מסלול איתות של קינאז דמוי RNA דמוי רשתית אנדופלסמית (PERK) של עקה אנדופלסמית ברשתית הרשתית האנדופלסמית. באמצעות ניסוי זה בבעלי חיים, אנו שואפים להסביר באופן ראשוני את המנגנון הפוטנציאלי של מוקסיבציה בטיפול במחלת כליות כרונית. בניסוי זה, הטיפול במוקסיבציה של חולדות המופרדות מעוגת צמחים הוא פעולה מרכזית.

בניסוי הקודם16 השתמשו במכסה של כלוב הגידול כדי לקשור ולתקן את החולדות. כדי להגן על המפעיל, יש להרדים את החולדות לפני הקשירה. עם זאת, קל לחשוש מחולדות ספראג-דוולי (SD) ולהבהיל. פעולת הקשירה יכולה בקלות לגרום לאי שקט אצל החולדות. בעיות כגון קיבוע יציבה לקוי של חולדות, סטייה של מיקום אקופוינט, זמן ניסוי מוגבר ופגיעה במפעיל התרחשו לעתים קרובות.

בנוסף, אם הקשירה הדוקה מדי, היא יכולה בקלות לגרום לקשיי נשימה בחולדות, מה שאינו תורם לרווחת בעלי החיים. אם הקשירה רופפת מדי, החולדות נוטות להיאבק ולהזיז את גופן, מה שגורם לקונוסים של מוקסיבציה ליפול ולשרוף את עורם, מה שמשפיע על תוצאות הניסוי. בהתבסס על הספרות, ניסויים בבעלי חיים עדיין כרוכים בקשירת16,17,18, ואת רוב מכשירי הניסוי ניתן לתקן רק מה שמעכב את היישום של טכניקות אחרות כגון מוקסיבציה19. לכן, השגת שילוב של קיבוע ומוקסיבציה במכשיר הניסוי תוך הבטחת רווחת בעלי החיים ומפרטי הניסוי ויעילותם הפכה לאחד מתחומי המיקוד של החוקרים.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

התוכנית עוקבת אחר הנחיות הטיפול בבעלי חיים של אוניברסיטת יונאן לרפואה סינית ואושרה על ידי ועדת האתיקה של בעלי חיים של אוניברסיטת יונאן לרפואה סינית. מספר הסקירה הניסיונית של רווחת בעלי חיים ואתיקה הוא R-062021G098.

1. התקן פלטפורמה ניסיונית Moxibustion (איור 1)

הערה: תכננו ובנינו את מכשיר הפלטפורמה הניסיונית למוקסיבציה של חולדות בהתבסס על המרחק בין הגפיים האחוריות והקדמיות של חולדות והמאפיינים ההתנהגותיים והפיזיולוגיים שלהן.

  1. גודל מכשיר המוקסיבציה
    1. לייצר את המכשיר באמצעות חומר לוח נגד מוכה לוח לוח עץ; הגודל הכולל הוא 52 ס"מ אורך x 23.5 ס"מ רוחב x 64 ס"מ גובה, והשטח התחתון של המכשיר הוא 1222 ס"מ2.
      הערה: פעולת המוקסיבציה מתבצעת על הרציף בגובה זה, וניתן לשמור על החולדות רגועות.
  2. המסגרת הראשית של מכשיר moxibustion
    1. הפוך את הבסיס של המכשיר כולו עם חומר לוח נגד מכות: צלחת הבסיס היא 52 ס"מ אורך x 23.5 ס"מ W עם משטח לבן. ודא שהחלק התחתון מהווה חלק גדול ממשקל המכשיר כדי לייצב את המכשיר כולו.
    2. הפוך את הפלטפורמה המוגבהת של המכשיר עם עץ מלא, 60 ס"מ גובה.
      הערה: זוהי המסגרת הראשית של המכשיר כולו, אשר מייצבת את המכשיר כולו ותומכת במיקום החולדות במצב עמידה.
    3. הניחו חמישה חריצי מיקום מעל הפלטפורמה המוגבהת, בגודל 10 ס"מ אורך x 6 ס"מ רוחב x גובה 10 ס"מ. השתמשו בלוחות מרווחים (אורך 10 ס"מ x רוחב 1.3 ס"מ x גובה 10 ס"מ) כדי להפריד בין חריצי המיקום, המתאימים למרחק בין הגפיים הקדמיות והאחוריות של החולדה במצב עמידה.
  3. מרכיבי מכשיר ה- moxibustion
    1. תקן שתי רצועות נירוסטה מעל חריצי המיקום. כל רצועה קבועה היא מוט פלדה בעל קצה ישר שווה 40 ס"מ אורך x 1.4 ס"מ רוחב (לשני הצדדים רוחב זהה), עם 15 חורים. שלושה חורים ברצועה הקבועה מתאימים לכל חריץ, המשמשים לקיבוע בורג ידית השזיף וצינור הנע. המרחק בין חורים סמוכים הוא 7 ס"מ.
    2. הניחו את בורג ידית פריחת השזיף המתכווננת בשני הקצוות של רשת בידוד החום העשויה נירוסטה 304 והתחברו לרשת בידוד החום הקבועה ולרצועה הקבועה.
    3. חבר את הקצה העליון של כל חריץ מיקום באמצעות רשת בידוד חום הניתנת להרמה המוקפת במסגרת צלחת מגולוונת. חברו מסגרת זו לבורג ידית פריחת השזיף בשני קצותיה. הניחו חומר רשת עגול מנירוסטה 304 במרכז רשת בידוד החום כדי למנוע מהאפר ליפול ולצרוב את החולדות וכדי לתקן את החולדות כדי להקל על ההדבקה.
    4. הדביקו את הקצה התחתון של הצינור הנייד מנירוסטה (באורך 34 ס"מ) עם רצועה קבועה מנירוסטה ואת הקצה העליון עם לוחית החיבור של מהדק הצינור.
      הערה: הצינור הנייד נוח להתאמת מיקום מוט המוקסה במהלך פעולת ההשעיה.
    5. השתמש במהדק הצינור העשוי מסגסוגת אלומיניום כדי לחבר את הצינור הנייד מנירוסטה ואת תפס המוקסה.
    6. חבר את תפס המוקסה מנירוסטה ללוחית החיבור של מהדק הצינור, וקבע 8-10 רצועות מוקסה בו זמנית למוקסיבציה.
      הערה: ניתן להשתמש בצינור הנייד, בלוחית החיבור של מהדק הצינור ובתפס המוקסה לפעולת מוקסיבציה של תרחיף בחולדות.

2. להקים מודל חולדה של אי ספיקת כליות כרונית

  1. התאקלמו אצל 24 חולדות זכרים ללא פתוגן (SPF) SD (בגילאי 3-4 שבועות, במשקל 180-200 גרם) למשך שבוע אחד. שמור על טמפרטורת ההזנה ב 18-24 מעלות צלזיוס; לחות יחסית ב 40-70%; ומחזור אור של 12 שעות ומחזור חושך של 12 שעות. מאכלסים שישה בעלי חיים בכל כלוב ומספקים גישה חופשית למים ולמזון משותף.
  2. ביסוס מודל החולדות של CRF. על פי טבלת המספרים האקראיים ובהתאם לפרוטוקול זה, בחרו שש חולדות כקבוצת הביקורת ואת 18 הנותרות כקבוצת המודל. יש לטפל בקבוצת הביקורת (n = 6) במים מזוקקים (10 מ"ל∙kg-1∙day-1) ובהזנה רגילה ובקבוצת המודל (n = 18) עם תרחיף אדנין (150 מ"ג kg-1∙day-1) והזנה עשירה בחלבון למשך 21 יום.
  3. התבוננו ותיעדו את משקל הגוף, המצב הנפשי והתזונה מדי יום. לאחר תום 21 יום, ודא כי כל בעלי החיים הם בצום במשך 12 שעות לפני דגימת דם מסלולית.
  4. לאסוף את דגימות הדם מסלול.
    1. מרדימים את החולדות לזמן קצר עם איזופלורן. תפסו את גבה של החולדה ביד הלא דומיננטית, החזיקו את ראשה ופניה של החולדה באופן סימטרי בין האגודל לאצבע, חשפו באופן מלא צד אחד של הקנטוס של החולדה והחזיקו בתנוחה זו.
    2. בעזרת היד הדומיננטית, החזיקו נימי נקודת התכה באורך 3 ס"מ בין האגודל לאצבע וסובבו לאט את הנימים, נכנסים למקלעת הוורידית הפנימית של החולדה ב-45 מעלות עד שהדם זורם באיטיות מתוך הצינור.
    3. לאסוף 150-200 μL של דגימות דם ב 0.5 מ"ל דם איסוף צינורות נוגדי קרישה, בעדינות לשלוף את נימים, ולחץ על המסלול עם כותנה.
  5. נערו את צינור נוגדי הקרישה במהירות וביסודיות. מדדו קריאטינין בסרום פלזמה (Scr) וחנקן אוריאה בדם (BUN) באמצעות מנתח ביוכימי אוטומטי.
    הערה: הגידול ב- Scr וב- BUN מצביע על הקמתו המוצלחת של מודל CRF.
  6. חלקו את החולדות לארבע קבוצות: A: שש חולדות ביקורת, ללא טיפול; 18 חולדות מודל מחולקות לקבוצות B: (קבוצת מודל: ללא תרופות או מוקסיבציה), C: (קבוצת אשלגן לוסרטן: ניתנת 2.33 מ"ג∙kg-1∙day-1 על ידי מחט gavage 12 גרם), ו-D: (קבוצת צמחים-עוגה-מופרדת-מוקסיבציה: צמחים-עוגה-מופרד-מוקסיבציה מוחל על שנשו דו-צדדי [B23] ופישו דו-צדדי [B20]).

3. שלב הטיפול

הערה: קבוצות A ו - B אינן מקבלות כל טיפול, ואילו קבוצות C ו- D יטופלו פעם ביום במשך 24 ימים, עם יומיים חופש לאחר 12 ימי טיפול.

  1. הכנות לפני הטיפול
    1. הכינו 300 גרם של Radix astragali מיובש, 300 גרם של Radix Codonopsis מיובש, 200 גרם של Radix Rehmanniae Praeparata מיובש, 100 גרם של עשב אפימדיום קצר קרניים קלוי ו 100 גרם של Cornus officinalis. מערבבים את האבקות האלה.
    2. הכניסו 500 גרם של Artemisiae Argyi Folium למגרסה המסורתית של הרפואה הסינית (מהירות של 34,000 סיבובים לדקה) למשך 5 דקות, העבירו את האבקה הטחונה לצלחת, ולאחר מכן מסך עם מסננת 600 רשת. לאחר שני סבבי הקרנה, סלקו את המוקסה הגסה והעבירו את המוקסה העדינה לשקית לשימוש (איור 2).
    3. הכינו את חרוט המוקסה על ידי מילוי המוקסה הדקה לתוך התבנית ליצירת חרוט מוקסה קטן בקוטר 0.5 ס"מ וגובה 0.5 ס"מ. לחלופין, מלקסה את המוקסה בין האגודלים והאצבעות המורות של שתי הידיים כדי ליצור מדוכי מוקסה (איור 3A).
    4. הכינו את תבנית עוגת הצמחים על-ידי חיתוך מזרק בנפח 5 מ"ל לארבע טבעות פלסטיק עגולות בעובי 0.5 ס"מ והדבקת ארבע הטבעות על אותו מישור אופקי (בפינות מישור מרובע באורך צד של 26 מ"מ, איור 3D).
    5. הכינו עוגות תרופות על-ידי ערבוב האבקה והמים ביחס של 1:1 ומילוי התערובת בתבנית עוגת הצמחים (איור 3E). השאירו את עוגת התרופות בתבנית ואחסנו אותה במקום יבש.
  2. סימון נקודות הדיקור
    1. אתר את נקודות הדיקור באופן הבא: שנשו (B23), שני צידי החוליה המותנית השנייה, נקודת דיקור אחת בכל צד; פישו (B20), החוליה הבין-קוסטלית של בית החזה ה-11 משני הצדדים, נקודת דיקור אחת מכל צד (איור 4).
      הערה: למיקום נקודות הדיקור, עיין במדריך לדיקור סיני לבעלי חיים ניסיוניים20.
    2. לבשו כפפת גומי עבה על היד הלא דומיננטית כדי לכסות בעדינות את ראשה של החולדה, אתרו את נקודות הדיקור על גבה של החולדה ביד הדומיננטית, ולאחר מכן סמנו את נקודות הדיקור בטוש צבע.
  3. הצבת החולדות
    1. יש ללבוש כפפות גומי עבות. השתמשו באגודל ובארבע האצבעות האחרות של היד הדומיננטית כדי לצבוט מעט את העור בגב ובצוואר של החולדה. השתמשו באגודל ובאצבע המורה של היד הלא דומיננטית כדי לצבוט את זנב החולדה בעדינות.
    2. הרימו את החולדה, יישרו את ראש החולדה לחריץ המיקום של פלטפורמת המוקסיבציה המיוחדת, והניעו את החולדה לאט קדימה. ודאו שהכף הקדמית של החולדה קרובה לקצה חריץ המיקום ושהחולדה מטפסת לתוך החריץ.
      הערה: יש לחטא את כל פלטפורמת המוקסיבציה לפני שמתחילים. לפני שאתם תופסים את החולדה, געו בגבה של החולדה בעדינות או דברו איתה כדי להרגיע אותה. התאימו את גובה רשת הבידוד ממיקום נמוך (כאשר אינו בשימוש) לגבוה ביותר, אשר נוח לחולדות להיכנס.
  4. קיבוע חולדות
    1. הניחו את האגודל והאצבעות המורות של שתי הידיים על בורג פריחת השזיף בשני קצות רשת בידוד החום. פתחו את בורג פריחת השזיף כדי להוריד את רשת בידוד החום למיקום המתאים, קרוב לחלק האחורי של החולדה, אך לא לגרום לדחיסה, ולאחר מכן הדקו את הברגים.
  5. הנחת קונוס מוקסה ועוגה תרופתית.
    1. מניחים את התבנית המוכנה המכילה את עוגת התרופות על רשת בידוד החום המתאימה לנקודות הדיקור של פישו (B20) ושנשו (B23) על פי סימני הדיקור על החולדות. ישנן ארבע נקודות דיקור, שכל אחת מהן מתאימה לעוגת תרופות.
    2. מניחים את גביע המוקסה על העוגה הרפואית בצורה חלקה ויציבה.
  6. מוקסיבציה
    1. הדליקו את חרוט המוקסה עם מצית והתחילו במוקסיבציה עד שקונוס המוקסה נשרף והחום השיורי מתפזר באופן טבעי (העוגה הרטובה מתייבשת).
    2. החליפו את חרוט המוקסה השרוף בקונוס מוקסה חדש ובעוגה תרופתית על אותה נקודת דיקור והמשיכו במוקסיבציה עד שקונוס המוקסה נשרף והעוגה הרפואית מתייבשת. חזור על פעולה זו בסך הכל פי 5 בכל נקודת דיקור.
      הערה: נקו וחיטאו את רשת בידוד החום הניתנת להרמה לפני החלפתה בקונוס מוקסה חדש ובעוגה תרופתית.
    3. כבו את גביעי המוקסה ואת העוגות הרפואיות במיכל פסולת המכיל מים לאחר שריפת חמישה גביעי מוקסה בכל נקודת דיקור.
      הערה: כל אקופוינט מקבל חמישה מדוכים של מוקסיבציה; ניתן להחליף כל חרוט מוקסה לאחר שריפה.
  7. החזרת החולדה לכלוב
    1. הניחו את כלוב הגידול הריק לפני החולדה, קרוב לקצה התחתון של חריץ המיקום של פלטפורמת המוקסיבציה, ושמרו על שקט. טפחו קלות על ישבנה של החולדה כדי שהחולדה תוכל לעבור מחריץ המיקום לכלוב ההאכלה. לאחר שהחולדה נכנסת, הניחו את הכלוב. השתמשו ביד הדומיננטית כדי לתפוס את הפרווה שעל גב החולדה, החזיקו את החולדה בחוזקה והניחו אותה על הקרקע לתצפית נוספת.
    2. שימו לב אם לחולדות יש קוצר נשימה, אם מצב הרוח יציב ואם פני העור צרובים. אם אין חריגה, להחזיר אותו לכלוב. אם הוא צרוב, מיד להחיל את משחה קשקשת על פני העור ומניחים אותו בכלוב אחד.

4. שלב הדגימה

  1. לאחר 24 ימי טיפול, הכינו את החולדות ל-12 שעות צום לפני הדגימה.
  2. יוצקים איזופלורן למכונת הרדמת הגז ומרדים את החולדות עם 2-3% איזופלורן. לאחר 2-3 דקות, יש לוודא שאין רפלקסים (לצבוט את הזנב בפינצטה כירורגית כדי לבדוק שאין להם רפלקס) והמשך קיום דופק ולעבור להרדמה תחזוקתית עם איזופלורן 1-1.5%.
  3. לאסוף 5 מ"ל של דם מן אבי העורקים הבטן על ידי החדרת המחט לתוך אבי העורקים מעין בטן. תן לדם לעמוד במשך 2 שעות, צנטריפוגה ב 2490 × גרם במשך 10 דקות ב 4 ° C, ולהעביר את supernatant בסרום לצינור מיקרוצנטריפוגה 1.5 מ"ל לניתוח נוסף.
  4. מרדימים עמוקות את החולדות לתקופה ארוכה ולוקחים דם מאבי העורקים הבטני תחת הרדמה תחזוקתית. יתר על כן, להרדים את החולדות על ידי נקע צוואר הרחם.
  5. קצרו רקמות משתי הכליות על ידי הפשטת החיתולית הכלייתית הדו-צדדית והשומן עם מספריים כירורגיים ופינצטה ושטיפה במי מלח רגילים 0.9%. לשקול את הכליות השמאלית והימנית ולרשום את המשקל ואת המורפולוגיה.
  6. לשמר את רקמת הכליה על ידי חיתוך הכליה השמאלית לשישה חלקים והכנסתם לצינור צנטריפוגה של 50 מ"ל המכיל 4% פרפורמלדהיד להשריה, קיבוע ושימור. חותכים את הכליה הימנית לשישה חלקים באמצעות סכין בכיוון האורך ושני סכינים בכיוון הרוחבי. מניחים את החתיכות האלה לתוך שישה 2 מ"ל Cryotubes ומיד לשים אותם בחנקן נוזלי; העבירו אותם למקפיא בטמפרטורה של -80°C לאחסון.

5. שלב הזיהוי

  1. השתמש ברקמת הכליה הנכונה בגודל המתאים למיצוי חלבונים, אלקטרופורזה בג'ל, העברת ממברנה, חסימה, דגירה ראשונית של נוגדנים, נוגדן משני, כימילומינסנציה, פיתוח, קיבוע וסריקת פילם.
  2. השתמש במערכת ניתוח נתוני תמונה בג'ל (לדוגמה, Image-Pro Plus 6.0) כדי לנתח את הערך האפור של הרצועה ולחשב את תכולת כל חלבון.
  3. יש להכפיף את רקמות הכליה השמאלית להתייבשות, ניקוי, הטבעה בפרפין, חתך (עובי של 4 מיקרומטר), צביעה בהמטוקסילין-אאוסין וכתם טריכרום של מאסון, ולהתבונן בשינויים הפתולוגיים21 ברקמת הכליה תחת מיקרוסקופ אור בהגדלה של פי 200.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

מורפולוגיה של הכליות
כפי שניתן לראות באיור 5, בהשוואה לקבוצות האחרות, הגודל, הצבע והמרקם של הכליות בקבוצה D (קבוצת צמחים-עוגה-מופרד-מוקסיבציה) היו קרובים יותר לאלה של הקבוצה הרגילה. מורפולוגיית הכליות של קבוצות האשלגן המודל ולוסרטן הראתה דרגות שונות של פ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

מבחינה קלינית, דיקור סיני וטיפול במוקסיבציה דורשים מהמטופלים להיות רגועים ונינוחים, להימנע מכעס ורעב מוגזמים ולהדגיש 'שלווה'. עם זאת, הפרקטיקה הנוכחית של ניסויי דיקור ומוקסיבציה עדיין מבוססת על הנחת היסוד של קשירת בעלי חיים, שאינה רק מנוגדת לכוונה המקורית של הניסוי אלא גם אינה תואמת את הפ?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

המחברים מצהירים כי אין ניגודי עניינים. מספר הפטנט של מכשיר פלטפורמת הניסוי של עכברוש הוא ZL202320880924.X.

Acknowledgements

אנו מודים לפרופסור הואנג ולמיס קוי על הדרכתם הקפדנית ותמיכתם במאמר זה. המחקר נתמך על ידי: 1. הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (NSFC), 82160938, "חקר מחקר מנגנונים על פיברוזיס אינטרסטיציאלי כלייתי עם מוקסיבציה מופרדת עוגה מהאפקט האינטראקטיבי של מסלולי אותות ERK ו- Smad בתיווך TGF-β1"; 2. ועדת הבריאות של מחוז יונאן "2020 כישרונות עתודות TCM ברמה גבוהה"פרויקט הדגירה (Yunwei TCM Development [2021] No.1); 3. מחלקת המדע והטכנולוגיה המחוזית של יונאן - מחקר בסיסי יישומי קרנות מיוחדות משותפות לרפואה סינית (מס '2019FF002-022, מס '202101AZ70001-286, מס '202301AZ070001-030); 4. צוות החדשנות של מחוז יונאן: מניעה וטיפול בטקסיות באמצעות דיקור סיני וטווינה (2023).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
0.5 mL heparin lithium biochemical tubeShijiazhuang Kangweishi Medical Equipment Co., LTD220518Blood collection
0.9% normal salineKunming Nanjiang Pharmaceutical Co., LTD/Rinse
1.5 mL Eppendorf tubeBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD12100024Subpackage
2 mL cryopreservation tubeBaroque Biotechnology Co., LTD88-0151Packaged kidney 
4 °C refrigeratorHaier Group Co. LTDBCD-236WDGLStore
5 mL syringeSichuan New century Medical polymer products Co., LTD20211115Gavage 
 50 mL centrifuge tubeBeijing Langeke Biotechnology Co., LTDCT-002-50APackaged kidney 
12 G gavage needleBeijing Zhongke Hengtian Technology Co., Ltd.12#55mmGavage 
96-well platesBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD11510Determination of protein concentration
 -80 °C freezerThermo Fisher Scientific991Store
AdenineBeijing Boaotuo Technology Co., LTDA0607Molding drug
BCA developerBiyuntian Biological Engineering Co., LTDP0010Determination of protein concentration
BCL-2 protein antibody reagentAbcam Shanghai Trading Co., LTDab196495Western Blot
Caspase-3 protein antibody reagentAbcam Shanghai Trading Co., LTDab184787Western Blot
Chemiluminescence imaging systemShanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., LTD100240073Protein banding imaging
Chinese medicine powderThe Second Affiliated Hospital of Yunnan University of Chinese Medicine/Cure
Direct-load Color Prestained MarkerBeijing Kangrunchengye Biotechnology Co., LTD (GenStar)M221Western Blot
Disposable blood collection needleLiuyang Sanli Medical science and technology development Co., LTDYZB/ Country 0411-2010Blood sampling
Disposable human venous blood sample collection containerLiuyang Sanli Medical science and technology development Co., LTD20210901Blood sampling
DK-30 Automatic snow ice makerHenan Brothers instrument equipment Co., LTDSHDX0023Ice-making
ECL luminescent substrate kitBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTDBL520BConvert latent images in exposed film into visible images
electronic scalesShanghai Ran Hao Electronics Co., LTDJCS-31002CThe body weight and kidney weight of rats were measured
Freezing microtome Thermo Fisher ScientificHM525 NXMicrotome
fully automatic biochemical analyserTianjin Micro nano core Technology Co., LTDPV2112001Z02410305Renal function test
Gas anesthesia systemZhongshi Technology Co., LtdZS-MV-1Anesthesia
GlycineBeijing Soleibao Technology Co., Ltd.Cat#G8200Running buffer, Western transfer buffer
HE staining reagentBeijing Soleibao Technology Co., Ltd.G1120 Staining
High-protein feedJiangsu Synergetics Biological Engineering Co., LTDXT19008Feeding
Intelligent laboratory ultra-pure water machineChongqing huachuag water treatment engineering co.,LTD15LFiltration
Internal reference β-actinJiangsu Qinke Biological Research Co., LTDAF7018Western Blot
IsofluraneJiangsu Zhongmu Beikang Pharmaceutical Co., Ltd20220701Anesthesia
liquid nitrogenKunming Botai dry ice sales Co., LTD/Renal tissue freezing
Losartan potassium tabletsMerck Sharp & Dohme (China) Investment Co., LTDJ20180054Cure
Low temperature high speed tissue grinderWuhan Servicebio technology CO.,LTDSKZ3F20200191Tissue grinding
Maason staining kitBeijing Soleibao Technology Co., Ltd.G1340Staining
MethanolGuangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd20220519Western transfer buffer
Mini-PROTEAN TetraBole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd552BR 233193Electrophoresis
MoxaThe Second Affiliated Hospital of Yunnan University of Chinese Medicine/Cure
Multiskan Spectrum Microplate SpectrophotometerTECANSparkThe absorbance and concentration of tissue protein were detected
operating scissorsZhangjiagang city Jinfeng deer knife cutting factory201118Cut the skin
ParaformaldehydeBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTDBL539AFixed tissue
PERK protein antibody reagentShanghai Pumai Biotechnology Co., LTD (CST China Agent)3192Western Blot
Positive fluorescence microscopeCarl Zeiss Suzhou Co.,Ltd.5446000456Capture picture
Prefabricated glueDerun Cheng (Beijing) Biological Co., LTD (ACE China Agent)B230418Western Blot
ProteinFind Goat Anti-Rabbit LgG(H+L), HRP ConjugateShanghai Dinran electronic Technology Co., LTD (TRAN)HS101Western Blot
pulverizerHefei Rongzhida small household appliances Co., LTDRS-FS1401Crushed Chinese medicine
PVDF membraneMerckMillipore Corporation IPVH00010 Western Blot
Refrigerated centrifugeHettich Precision Technology (Zhuhai) Co., LTDMIKRO 220RCentrifuge
RIPA lysateBeijing Solaibao Technology Co., LTD (Solarbio)R0010Lytic tissue
Sampling capillaryJiangsu Kangjianhua Medical Supplies Co., LTD20160157Blood from inner canthus
Scald ointment (Zilian ointment)Yunnan Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine/Used for the treatment of scalding from moxibustion
Skim milk powderGuangzhou Saiguo Biotechnology Co., LTD (BIOFROXX)1172GR500Western blocking buffer
surgical bladeShanghai Medical Equipment Co., LTDJOBO10Incision kidney tissue
surgical knife handleShanghai Medical Equipment Co., LTDJ11010Mounting blade
TS-200 Orbital shakerHaimen Qilin Bell Manufacturing Co., Ltd.TS-8SGel fixation
Tween 80MedChemExpressHY-Y1819 TBST 
tweezersShanghai Medical Equipment Co., LTDJD1050 Pick up the moxa
Veterinary drugs*Micro core renal function test discTianjin Micro nano core Technology Co., LTD47031-35.5-0145-0227-62-220750Renal function test

References

  1. Run-Ming, Y. The origin and development of Chinese acupuncture and moxibustion. Ancient Science of Life. 4 (4), 224-228 (1985).
  2. Zhang, Q. W. Moxibustion Theories of Different Schools. , China Press of Traditional Chinese Medicine. Beijing. (2016).
  3. Ren, H. W., Cai, D. J. Brief discuss on treating febrile diseases with moxibustion. China's Naturopathy. 29 (02), 1-2 (2021).
  4. Ouyang, X. L., et al. Moxibustion may delay the aging process of Wistar rats by regulating intestinal microbiota. Biomedicine & Pharmacotherapy = Biomedecine & Pharmacotherapie. 146, 112147(2022).
  5. Qi, Q., et al. Gut microbiome alterations in colitis rats after moxibustion at bilateral Tianshu acupoints. BMC Gastroenterology. 22 (1), 62(2022).
  6. Wang, G. Y., Meng, Z., Xu, Q. Y., Dou, L., Cui, X. F. Scar moxibustion Zusanli treatment of diarrhea-predominant irritable bowel syndrome 20 cases. Modern Chinese Medicine. 33 (03), 79-80 (2013).
  7. Xue, K. Y., Fu, J., Lan, L., Tang, J. X., Cui, J. Meta-analysis of the efficacy and safety of barrier moxibustion in the treatment of chronic fatigue syndrome. Journal of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine. 44 (03), 53-59 (2022).
  8. Liu, J. W., Tian, Y., Peng, Y. Y., Ye, Y. Y. Observation on moxibustion sensitivity and curative effect of thermal sensitive moxibustion and knee osteoarthritis. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 41 (10), 1063-1068 (2021).
  9. Liu, W. A., Chang, X. R., Liu, M., Zhang, G. S. Effects of herbal-cake-separated-moxibustion sized cones at different dosages on blood fat and hemorheology in patients with hyperlipemia. Liaoning Journal of Traditional Chinese Medicine. 40 (9), 1787-1790 (2013).
  10. Zuo, Z., Chen, X. M., Jiang, Y. W., Yang, Y. M., Wang, B. Y. Effect of medicinal cake partition moxibustion on serum TGF-β1 and renal function in chronic renal failure rabbits. Yunnan Journal of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica. 38 (04), 82-84 (2017).
  11. Huang, P. D., et al. Effect of herbal cake-partitioned moxibustion on renal function and expression of renal connective tissue growth factor, integrin-linked kinase and bone morphogenetic protein-7 in chronic renal failure rabbits. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 44 (8), 577-582 (2019).
  12. Li, L. R., Huang, X. X., Wei, T. T., Zhang, P. Research progress of TCM external treatment for chronic renal failure. Journal of Guangxi University of Chinese Medicine. 23 (04), 51-54 (2020).
  13. Zuo, Z., Jiang, Y. W., Guan, Z. X., Chen, X. M. Observations on the therapeutic effect of herbal cake moxibustion on chronic renal failure. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 34 (03), 218-220 (2015).
  14. Wang, H., Zhang, H. M., Xu, J. M., Fan, R. Y., Lu, J. Effect of moxibustion on renal hemodynamics in patients with chronic kidney disease. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 43 (11), 722-724 (2018).
  15. Zhang, X. Q., Zhang, X. Y. External treatment of chronic kidney failure. Clinical Journal of Chinese Medicine. 9 (26), 141-143 (2017).
  16. He, C., Zhang, C. X., Zhou, S. Q., Fan, Y. S. Using old meshy cage cover to make a rat fixating device for acupuncture study. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 46 (4), 348-350 (2021).
  17. Zhang, H. X., et al. Introduction of a new type of mouse forelimb fixator and two types of batch mice moxibustion device. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 46 (7), 616-619 (2021).
  18. Chen, W., et al. A batch moxibustion device in the mouse abdominal waist. Journal of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. 45 (04), 110-112 (2022).
  19. Gao, S. Y., Wu, R. N., Wang, M. M., Zhang, S. J. A device for animal experiment. Clinical Journal of Chinese Medicine. 10 (23), 139-140 (2018).
  20. Hu, Y. L. Manual of acupuncture for experimental animals (second edition). , China Agriculture Press. Beijing. (2014).
  21. Liang, Y. L., et al. Reflections on animal experiments with moxibustion. China Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy. 31 (11), 4379-4381 (2016).
  22. Madalina, V. N., Jinyang, Z. -B., Malgorzata, W., Liliana, S. Targeting renal fibrosis: Mechanisms and drug delivery systems. Advanced Drug Delivery Reviews. 129, 295-307 (2018).
  23. Wu, R. N., et al. Design of convenient animal experimental moxibustion therapy device. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 38 (02), 243-244 (2019).
  24. Yan, L. G., Zhou, T., Jia, Z. K., Li, J., Wang, C. X. Influence of Panax pseudo-ginseng-partition moxibustion on cartilage damage in rats with traumatic osteoarthritis by regulating AMPK/SIRT1/NF-?B signaling pathway. Hebei Medical Journal. 45 (10), 1450-1454 (2019).
  25. Xu, Q., et al. Effect of mild moxibustion of 45 °C at "Zusanli" (ST36) of different durations on the inflammatory factors in the abdominal aorta of hyperlipidemia rats. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 48 (9), 923-932 (2023).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles