JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

באמצעות שילוב של עיצוב חוויית אינטראקציה וניתוח דרישות משתמש, אנו מציגים מגרד תאים חדשני המשפר את מבחני ריפוי הפצעים התאיים במונחים של שחזור, אמינות, מעשיות, שלמות התא וחוויית המשתמש.

Abstract

האמינות של מדידת נדידת תאים במבחני ריפוי פצעים מתערערת לעתים קרובות על ידי חוסר היציבות המתודולוגית הנפוצה, כלומר שיטה מבוססת טיפים. אנו מציגים מכשיר חדשני שנועד להתמודד עם מגבלות אלה. מגרד התאים החדשני שלנו עולה על הגישה הנוכחית, ויוצר פער עקבי ויציב יותר ללא תאים. ניסויים ביולוגיים חוזרים ונשנים מגלים כי המרווח נטול התאים שנוצר על ידי מגרד התא מציג קצוות ישרים יותר וגודל וצורה אחידים בהשוואה לטכניקה מבוססת קצה (p < 0.05). מבחינת עיצוב המוצר, מגרד התאים מתהדר בערכת צבעים מעודנת המתאימה לסביבות מעבדה, המשפרת את ניטור תוצאות הניסויים, ומאפשרת עיקור באמצעות אוטוקלאבינג לשימוש חוזר. יש לציין כי לאחר הטיפול, מגרד התאים מדגים השפעה זניחה על כדאיות התא והתפשטותו (97.31% ו-24.41%, בהתאמה). לעומת זאת, השיטה מבוססת הקצה מניבה כדאיות תאים נמוכה יותר (91.37%) והתפשטות (18.79%). מחקר זה מציג את מגרד התאים כמכשיר חדשני לשימוש חוזר המסוגל ליצור מרווחים נטולי תאים הניתנים לשחזור תוך שמירה על הכדאיות התאית, ובכך להגביר את האמינות של בדיקות ריפוי פצעים בהשוואה לטכניקות קיימות.

Introduction

גידולים מאופיינים בסימני היכר מובהקים כגון יתרונות גדילה סלקטיבית, חיווט מחדש מטבולי ומודולציה חיסונית, שכולם תורמים באופן מסקרן לנדידת תאים מוגברת, התנהגות ממאירה קריטית של תאי הגידול. תכונה זו משפיעה ישירות על גרורות מרוחקות של הגידול הראשוני, ופוגעת בהישרדות ארוכת הטווח של חולים 1,2,3. יתרונות גדילה סלקטיבית מאפשרים לתאים סרטניים להתחרות בתאים נורמליים, בעוד שחיווט מחדש מטבולי תומך בהתרבות מהירה זו על ידי שינוי מסלולי אנרגיה. במקביל, אפנון חיסוני מאפשר לגידולים לחמוק מהגנות הגוף. מחקרים מדגישים את חומרת הבעיה, ומראים כי גרורות ריאה, לעתים קרובות תוצאה של נדידת תאים מוגברת, היא אירוע סופני המוביל למוות של חולים עם סוגי סרטן שונים4. לדוגמה, סרטן השד5, קרצינומה של צוואר הרחם4 ואוסטאוסרקומה6 מהווים 20%, 9% ו-30% מהמקרים הללו, בהתאמה. לכן, הערכת נדידת תאי הגידול הפכה לחלק בלתי נפרד מהמחקר האונקולוגי הנוכחי, ומדגישה עוד יותר את האופי הרב-גוני של התקדמות הגידול.

בדיקת ריפוי פצעי תאים היא שיטה קלה לשימוש למדידת נדידת תאים במבחנה , המשמשת לעתים קרובות במחקרים אונקולוגיים7. רוב הנסיינים משתמשים בקצוות פיפטה כדי ליצור פצעים בתאים באופן ידני8. למרות ששיטה כזו יכולה ליצור פצעים בתאים במהירות ובנוחות, עדיין יש לה מגבלות רבות המשפיעות על יכולת השחזור והדיוק להערכת נדידת תאים. ראשית, שימוש בקצוות פיפטה ליצירת שריטות באופן ידני מושפע מאוד מזווית ההפעלה, הכוח והמהירות של המפעיל, ומשפיע על יכולת החזרה של השיטה8. שנית, פגמים בתאים שנוצרו על ידי קצה בדרך כלל יש קצוות משוננים ולא קצוות ישרים כי קצוות פיפטה הם מוצרי פלסטיק עם גמישות מסוימת9. מחקרים מסוימים יוצרים פצעים על ידי הנחת תוספות תרבית טרומיות ישירות לתוך צלחת תרבית התא כדי להגביל את טווח התפשטות התאים10. גישה זו עוקפת את המגבלה של השיטה מבוססת הטיפים, כגון קצוות משוננים ויכולת שחזור. עם זאת, אפילו עם חומרים תואמים ביולוגית, הדו-קיום ארוך הטווח של ההטבעה עם התאים עדיין משפיע על צמיחת התאים11. יתר על כן, ההטבעה עלולה לגרום גם לשינויים אפיגנטיים תאיים באזור השוליים עקב הגבלת מגע12. כמו כן, החדרת מגע המיוצרת מחומרים תואמים ביולוגית היא יקרה וקשה לשימוש חוזר, מה שמגביל את היתכנותם13. לכן, יש צורך בכלי חדשני, ניתן לשחזור ומעשי כדי לכמת בקלות נדידת תאים במבחנה .

המטרה העיקרית של שיטה זו היא להציג כלי חדשני לכימות נדידת תאים במבחנה במחקרים אונקולוגיים, תוך התייחסות למגבלות הטכניקות הקיימות ושיפור יכולת השחזור והדיוק בהערכת נדידת תאים.

הרציונל מאחורי פיתוח טכניקה זו טמון בחשיבות הקריטית של הערכת נדידת תאי הגידול באונקולוגיה. גידולים מציגים סימני היכר ייחודיים, כולל יתרונות גדילה סלקטיבית, חיווט מחדש מטבולי ומודולציה חיסונית, כולם תורמים לנדידת תאים מוגברת, היבט בסיסי של ממאירות סרטן. שיטה זו נועדה לספק אמצעי אמין יותר לחקר נדידת תאים, ולתרום להבנה עמוקה יותר של התנהגות הגידול.

שיטה זו מציעה יתרונות משמעותיים על פני טכניקות קיימות. בדיקות גירוד ידניות עלולות לסבול מהפרעות תלויות מפעיל, בעוד שתוספות תרבית עשויות להשפיע על גדילת התאים וביטוי גנים. לעומת זאת, שיטה זו מציעה חזרתיות, דיוק ומעשיות משופרים, ומציגה פתרון חסכוני למדידת נדידת תאים במבחנה במחקר אונקולוגי. הוא עונה על צורך חיוני בכלי אמין ונגיש לחקר נדידת תאים בסוגי סרטן שונים, מה שהופך אותו לתוספת רבת ערך לתחום.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

הסכמה מלאה מדעת בכתב ניתנה על ידי כל המשתתפים. אישור האתיקה לא היה ישים מכיוון שלא נכללו דגימות רקמות של בעלי חיים או בני אדם במחקר הנוכחי.

1. חקירת הדרישות של קהילת המשתמשים

  1. העבירו שאלונים לביולוגים/נסיינים העובדים על מבחני ריפוי פצעים בתאים. אסוף את השאלונים המלאים והשתמש בהם למחקר. לצורך מחקר זה, בין התאריכים 12 באוקטובר 2021 עד 3 בפברואר 2022, הועברו 100 שאלונים ל-100 ביולוגים. אחוז ההיענות עמד על 97%.
  2. בקשו מהמשיבים לענות על שאלות כמו, איזה מניסויי גירוד התאים הכי הפריע לכם? ואיזה כלי שימש לביצוע גירוד התא? עקוב אחר שאלות אלה עם שאלות משנה כדי לעקוב אחר הסיבות.
  3. לחקור את תפיסותיהם של הנסיינים לגבי כלים כגון קצוות פיפטה ותוספות תרבית תאים בניסויים לריפוי פצעי תאים. להבין ולאסוף את הסיבות שלהם לבחירת כלי אחד על פני אחר, באמצעות תיאוריית שרשרת הקצה של אמצעים המבוססת על טכניקות סולם בשאלונים סעיף14,15.
    הערה: שיטת הסולם נחלקת לשני סוגים: שיטת הסולם הרך עם ראיונות עומק ושיטת הסולם הקשיח עם שאלונים או חידוני נייר ועיפרון16. שיטת הסולם הקשה הייתה הטכניקה העיקרית בה נעשה שימוש במחקר זה. תיאוריית שרשרת הקצה מציעה כי הידע המפורש המוחזק על ידי משתמשי היעד הוא שטחי וקונקרטי, בעוד הידע שבשתיקה הוא עמוק ומופשט 17,18,19.

2. עיצוב ומידול תלת מימדי

  1. ציירו סקיצה מהתובנות שנאספו מסקר השאלונים הקודם והתחילו את תהליך העיצוב. השתמש בשרטוט ראשוני זה כתוכנית היסוד.
    1. פרט את הממדים והפריסה של כל רכיב על-ידי החלת הפונקציות Dim, DimRadius ו- DimDiameter בתוכנת המידול.
    2. בצע מדידות על ידי קליפר ורנייר בדיוק של 0.02 מ"מ על לוחות 6 בארות בפועל כדי לוודא את הממדים הסופיים של מגרד התא. אשרו שאורכם 42.1 מ"מ, רוחבם 42.1 מ"מ וגובהם 18.5 מ"מ. שימו לב לפרטים בשלב התכנון, במיוחד גובה המוצר והכושר בבאר, כדי לאפשר הרכבה חלקה יותר.
  2. לבנות מודל תלת מימדי ולעבד אותו.
    1. התחל עיצוב תלת מימד בתוכנה על ידי יצירת מודל בסיסי. לחץ על כפתורים כמו ExtrudeCrv למתיחה ולופט לעיצוב העיצוב. לטש את הדגם ולאחר מכן ללחוץ על FilletEdge לקבלת קצוות חלקים.
      הערה: לחצני פונקציה אחרים בשימוש כוללים, קווים - כדי לצייר קטעי קו ישר, Polylines - ליצירת קווים רציפים המורכבים ממקטעים מרובים, מלבנים - לצייר צורות מלבניות, עיגולים - לצייר צורות מעגליות, קשתות - לצייר צורות קשת או אליפטיות, נקודות - כדי למקם סמנים נקודתיים בודדים, טקסט - כדי להוסיף תוויות טקסט, מידות - כדי להוסיף מידות מדודות למודלים, מערך - ליצירת תבניות מועתקות של אובייקטים, סובב - כדי לסובב אובייקטים לזוויות רצויות, הזזה - כדי להעביר אובייקטים למיקומים חדשים, קנה מידה - כדי לשנות גודל של עצמים גדולים או קטנים יותר, חתוך/הרחב - כדי לחתוך או להרחיב אובייקטים כדי לעמוד בגיאומטריה אחרת, איחוד בוליאני/הפרש/הצטלבות - כדי לשלב, להחסיר או למצוא את ההצטלבות של אובייקטים, שכבות - כדי לארגן אובייקטים בשכבות שונות, רינדור - ליצירת תצוגות מעובדות עם חומרים ותאורה וייצוא - לייצוא גיאומטריית מודל לתבניות קובץ אחרות.
    2. ייבא את המודל לתוכנת עיבוד תלת-ממדית. החל חומרים כולל פלסטיק, ספוג ופלדה, ולאחר מכן התאם את התאורה לעיבוד מציאותי.
      הערה: רשימה כללית של לחצני פונקציות כוללת, גרור ושחרר - כדי להחיל חומרים ישירות על חלקים או דגמים על-ידי גרירת חומר מהספרייה ושחרורו על הרכיב הרצוי בתצוגה בזמן אמת, לחץ באמצעות לחצן העכבר הימני - בעת לחיצה ימנית על חומר בספריה, בדרך כלל תראה אפשרויות: החל על בחירה - החל את החומר על חלק נבחר בתצוגה בזמן אמת. עריכת חומר - התאמת תכונות החומר. תכונות חומר (לאחר בחירת חומר) - לגשת ולשנות תכונות ספציפיות של החומר, כגון צבע, חספוס, מקדם שבירה ותכונות אחרות. סרגל החיפוש - כדי למצוא במהירות חומר בספרייה על ידי הקלדת שמו או מילות מפתח משויכות. קטגוריות/תיקיות - כדי לנווט בין קטגוריות או תיקיות שונות של חומרים כמו מתכות, פלסטיק, זכוכית וכו'. הוסף למועדפים - כדי לסמן חומרים מסוימים כמועדפים לגישה קלה במהלך הפעלות עתידיות. מקשים ישירים - ניתן לגשת לפעולות מסוימות באמצעות מקשי קיצור. לדוגמה, M הוא בדרך כלל מקש הקיצור כדי להעלות במהירות את תכונות החומר של חלק נבחר.
    3. לבסוף, שפר את הניגודיות של התמונה (+56) ואת הרוויה (Vibrance +19, רוויה +7) בתוכנת צילום ועיצוב, והוסף רכיבי רקע (מידע טקסט וצבע מרקע הדרגתי לבן לאפור בהיר) להקשר כדי להבטיח ייצוג מוצר איכותי ומציאותי.
      1. השתמשו ב'התאמות > תמונה', 'בהירות/ניגודיות' להתאמת הניגודיות של תמונה. השתמשו בתמונה > גוון/רוויה לשינוי רמת הרוויה של התמונה. השתמש בכלי טקסט (סמל T) להוספת נתוני טקסט לתמונה .
        הערה: רשימה כללית של לחצני פונקציות כוללת את הכלי אליפסה (U) - כדי לצייר נקודות/עיגולים. הגדר את הכלי לציור צורה, בחר את צבע המילוי הרצוי ולאחר מכן לחץ וגרור (החזק את מקש Shift לשמירה על עיגול מושלם) ליצירת נקודה. הכלי קו (U) - כדי לצייר קווים ישרים על התמונה. בחר בכלי, הגדר את רוחב הקו הרצוי ולאחר מכן לחץ וגרור כדי לצייר קו. הכלי מברשת (B) - דרך חלופית לצייר נקודות וקווים. בחרו את גודל המברשת והצורה, ואחר כך לחצו (לנקודות) או לחצו וגררו (לקווים).
  3. לאחר השלמת המודל התלת מימדי, המשך לייצר את מגרד התא באמצעות שיטת השחזה והרכבה 20,21,22.

3. הפקה

  1. השתמש בתיאוריית הצבע, החומרים, הגימור (CMF) במחקר הנוכחי כדי לתכנן את אבות הטיפוס של מגרד התא. תורת CMF משמשת כמתודולוגיית תכנון במחקר מדעי. זה משפר את שימושיות המוצר, מעצב את תפיסת המשתמש, ומכוון את הבחירה של חומרים 23,24,25.
    1. בחר את הצבעים שישמשו במגרד התא ממערכת צבעים סטנדרטית, כולל שחור 6 C, אפור קריר 6 C ו- 11-0601TPG26,27.
    2. כדי לבנות את מגרד התאים העומד בתקני המעבדה, בחר חומרים מתאימים כולל פוליפרופילן (PP), ספוג ופלדה עתירת פחמן. לייצור אבי טיפוס פיזיים, התחל על ידי שימוש במדפסת תלת ממד כדי לייצר את המסגרת המבנית. לאחר מכן, השתמש במחברים או חומרי דבק כדי להשלים את הרכבת המגרט.
      הערה: כדי להכין את המוצר הפיזי של מגרד התא, לטחון ולהרכיב את החומרים הדרושים. יש להקפיד על פרוטוקולי בטיחות לאורך כל התהליך כדי להבטיח מוצר סופי בטוח ויעיל.
    3. עברו לתהליך הגימור, שעשוי לכלול חיתוך, השחזה, ליטוש, הטבעה או טכניקות אחרות. התחילו בשיוף הדגם באמצעות נייר זכוכית בעל חריץ בינוני של 120 גריט כדי להסיר קצוות גסים.
    4. לאחר מכן יש להשתמש בנייר זכוכית דק במשקל 220 חצץ לקבלת משטח חלק.
    5. לאחר שיוף כדי להחליק את המשטחים, להבטיח התאמה נכונה של התוסף או המחברים המובנים.
    6. חבר את שקופיות I ו- II בבטחה באמצעות המחברים (מוטות קבועים) כדי להבטיח הרכבה חזקה ועמידה של מגרד התא. השג את הצורה הסופית הקבועה של מגרד התא באמצעות שילוב של הידוק מכני והדבקה. השתמש במחברים, במיוחד מבנה מורטיס וטנון, כדי לאבטח חלקים יחד באמצעות כוח מכני. בנוסף, כדי לשפר את חוזק ההרכבה, יש למרוח דבק (דבק) כדי לחבר את הרכיבים עוד יותר.
    7. בצע Autoclave המגרד ב 121.3 ° C במשך 30 דקות כדי להבטיח שהוא שומר על צורתו המקורית ואת המאפיינים הפיזיים שלו.

4. תרבית תאים

  1. לגדל תאי HOS במדיום חיוני מינימלי בתוספת 10% סרום בקר עוברי (FBS) ו-1% פניצילין-סטרפטומיצין. תרבית אותם ב 37 ° C עם 5% CO2.
  2. שנה את מדיום התרבות כל יומיים.
  3. כאשר צמיחת התאים עולה על 80% מפגש, להוסיף 1 מ"ל של טריפסין עם 0.25% EDTA ולעכל במשך 60 שניות. לאחר מכן, צנטריפוגה את התאים ב 300 x גרם במשך 5 דקות עבור תת תרבית. מוציאים supernatant ומוסיפים מדיום תרבית כדי לקבל ריכוז סופי של 5 x 104 תאים לכל באר. השתמש במונה תאים אוטומטי לספירת תאים.

5. הערכת פוטנציאל פציעת התא של מגרד התא ושיטה מבוססת טיפים

  1. להכין את כל החומרים לפציעה ולעקר אותם עם קרינה אולטרה סגולה על ידי חשיפה במשך 30 דקות.
  2. לאחר העיקור, פצעו 100% תאי HOS מתמזגים בצלחות 6 בארות בריכוז של 5 x 104 תאים לכל באר באמצעות שיטת מגרד התאים או השיטה מבוססת הקצות.
    1. לשיטה מבוססת הקצה, השתמש בקצה של 100 μL וגרור אותו לאורך התא המכיל מדיום עם קו אחד בכיוון האופקי והשני בכיוון האנכי.
    2. לשיטת מגרד התא, הניחו את אב הטיפוס של המגרד באחת הבארות ובעזרת הפינצטה לחצו בעדינות פעם אחת. החוליות פצועות. בצע כל ניסוי פציעה במשולש.
  3. נתח את כל פצעי התא באמצעות מערכת מיקרוסקופ דיגיטלית ותוכנת הדמיה.

6. מדידת כדאיות התא והתפשטות התא

  1. בצע את כל בדיקות כדאיות התא בהתאם לפרוטוקול שסופק בערכת CCK-8.
  2. דגור על התאים עם תמיסת CCK-8 במשך שעתיים ב-37°C, ולאחר מכן מדוד את ספיגתם ב-450 ננומטר באמצעות קורא מיקרו-צלחות כדי לכמת את כדאיות התא.
  3. תכנן את בדיקת השילוב 5-ethynyl-20-deoxyuridine (EdU) כדי לכמת במדויק את שכפול ה- DNA ולכמת ישירות את יחס התפשטות התא. לקבוע את ההשפעה של שיטות שונות ליצירת פצעים בתאים על התפשטות תאים באמצעות מבחן EdU, בהתאם לפרוטוקול שתואר בפרסום קודם28.
  4. לצבוע את התאים ולצלם אותם באמצעות מערכת מיקרוסקופ דיגיטלי. ודא שכל ניסוי מתבצע במשולש.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

תוצאות

ניתוח דרישות המשתמשים לכלים ליצירת פצעים בתאים
השיטה הניסיונית הנוכחית ליצירת פצעים בתאים דורשת שיפור נוסף כדי לטפל בבעיות רבות הפוגעות ביכולת השחזור הביולוגי, החוסן, הצריכה הכלכלית וחוויית המשתמש של בדיקת ריפוי פצעי תאים. השתמשנו בשיטת הסולם הקשיח כדי לנתח...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

המחקר הנוכחי נועד לפתח כלי ממוכן אוטומטי לבדיקת ריפוי פצעים בתאים. למיטב ידיעתנו, הוא מייצג את הניסיון הראשון ליישם מבנה מונע ממוכן כדי ליצור פצעים בתאים באופן אוטומטי בקליק אחד. באמצעות זה, אנו שואפים לטפל בחסרונות של השיטה המסורתית המבוססת על טיפים, כגון יכולת שחזור נמ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

המחברים מצהירים כי אין להם ניגוד עניינים.

Acknowledgements

מחקר זה נתמך על ידי המענק של הקרן הלאומית למדעי החברה (22FYSB023), קרן המחקר של מרכז העיצוב התעשייתי חוביי (08hqt201412046), והקרן למדעי הרוח והחברה של מחלקת החינוך המחוזית של חוביי (15Y054).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
CCK-8 KitBeyotime Company, ChinaC0037
digital microscope systemOlympusIX81
fetal bovine serumGibco, USA16000044
HOS Procell Life Science & Technology Co., LtdCL-0360
Image-Pro PlusMedia Cyberneticsversion 6.0
KeyShotLuxionversion 11.03D rendering software
microplate readerBioTek, GermanELX808
Minimum Essential MediumGibco, USA11095080
Pantone matching systemPantonecommercial color matching
penicillin-streptomycinBeyotime Company, ChinaST488
PhotoshopAdobephoto and design software
Rhinoceros 3DRobert McNeel & Associatesversion 7.03D design software
TC20 Automated Cell CounterBio-RadTC20
TrypsinCytiva HyClone, United StateSH30042.01

References

  1. Trepat, X., Chen, Z., Jacobson, K. Cell migration. Compr Physiol. 2 (4), 2369-2392 (2012).
  2. Moncharmont, C., et al. Radiation-enhanced cell migration/invasion process: a review. Crit Rev Oncol Hematol. 92 (2), 133-142 (2014).
  3. Verbeek, B. S., Adriaansen-Slot, S. S., Vroom, T. M., Beckers, T., Rijksen, G. J. F. I. Overexpression of EGFR and c-erbB2 causes enhanced cell migration in human breast cancer cells and NIH3T3 fibroblasts. FEBS Lett. 425 (1), 145-150 (1998).
  4. Vaideeswar, P., Aswani, Y., Damani, S., Singaravel, S. Pulmonary microvascular metastases in cervical carcinoma: A case series. J Postgrad Med. 66 (3), 155-158 (2020).
  5. Liang, Y., Zhang, H., Song, X., Yang, Q. Metastatic heterogeneity of breast cancer: Molecular mechanism and potential therapeutic targets. Semin Cancer Biol. 60, 14-27 (2020).
  6. Sasaki, R., Osaki, M., Okada, F. MicroRNA-based diagnosis and treatment of metastatic human osteosarcoma. Cancers (Basel). 11 (4), 553(2019).
  7. Spaeth, E., Klopp, A., Dembinski, J., Andreeff, M., Marini, F. Inflammation and tumor microenvironments: defining the migratory itinerary of mesenchymal stem cells. Gene Ther. 15 (10), 730-738 (2008).
  8. Zhang, M., Li, H., Ma, H., Qin, J. A simple microfluidic strategy for cell migration assay in an in vitro wound-healing model. Wound Repair Regen. 21 (6), 897-903 (2013).
  9. Yue, P. Y., Leung, E. P., Mak, N., Wong, R. N. A simplified method for quantifying cell migration/wound healing in 96-well plates. J Biomol Screen. 15 (4), 427-433 (2010).
  10. Roch, T., et al. Immunological evaluation of polystyrene and poly (ether imide) cell culture inserts with different roughness. Clin Hemorheol Microcirc. 52 (2-4), 375-389 (2012).
  11. Jonkman, J. E., et al. An introduction to the wound healing assay using live-cell microscopy. Cell Adh Migr. 8 (5), 440-451 (2014).
  12. Freshney, R. I. Culture of animal cells: a manual of basic technique and specialized applications. , John Wiley & Sons, Inc. (2015).
  13. Kato, T., et al. Reuse of cell culture inserts for in vitro human primary airway epithelial cell studies. Am J Respir Cell. 64 (6), 760-764 (2021).
  14. Veludo-de-Oliveira, T. M., Ikeda, A. A., Campomar, M. C. Discussing laddering application by the means-end chain theory. Qualit Rep. 11 (4), 626-642 (2006).
  15. Yang, T., Yang, F., Men, J. Recommendation content matters! Exploring the impact of the recommendation content on consumer decisions from the means-end chain perspective. Int J Info Manage. 68, 102589(2023).
  16. Sadeghlou, S., Emami, A. Residential preferences and satisfaction: a qualitative study using means-end chain theory. J Housing Built Env. 38, 1711-1734 (2023).
  17. Pieters, R., Baumgartner, H., Allen, D. A means-end chain approach to consumer goal structures. Int J Res Market. 12 (3), 227-244 (1995).
  18. Valette-Florence, P., Rapacchi, B. J. J. Improvements in means-end chain analysis: using graph theory and correspondence analysis. J Advert Res. 31, 30-45 (1991).
  19. Nunkoo, R., Ramkissoon, H. Applying the means-end chain theory and the laddering technique to the study of host attitudes to tourism. J Sustain Tourism. 17 (3), 337-355 (2009).
  20. Development of an automatic mold polishing system. Tsai, M. J., Chang, J. L., Haung, J. F. IEEE Int Conf Robot Auto, 3, 3517-3522 (2005).
  21. Altan, T., et al. Advanced techniques for die and mold manufacturing. CIRP Annals. 42 (2), 707-716 (1993).
  22. Kalt, E., Monfared, R., Jackson, M. Towards an automated polishing system: Capturing manual polishing operations. Int J Res Eng Tech. 5 (7), 182-192 (2016).
  23. Becerra, L. CMF design: the fundamental principles of colour, material and finish design. , Frame Publishers, UK. (2016).
  24. Pan, C., et al. Next-generation immuno-oncology agents: current momentum shifts in cancer immunotherapy. J Hematol Oncol. 13 (1), 29(2020).
  25. Kim, S., Nah, K. The development direction of emotional materials by increasing sensorial experiences-Focusing on the case study of CMF design. Arch Des Res. 27 (2), 121-135 (2014).
  26. Eiseman, L. The complete color harmony, pantone edition: expert color information for professional results. , Rockport Publishers. (2017).
  27. Eiseman, L., Recker, K. Pantone: The twentieth century in color:(coffee table books, design books, best books about color). , Chronicle Books. (2011).
  28. Deng, P., Jin, W., Liu, Z., Gao, M., Zhou, J. Novel multifunctional adenine-modified chitosan dressings for promoting wound healing. Carbohydr Polym. 260, 117767(2021).
  29. Ares, G., Giménez, A., Gámbaro, A. Understanding consumers' perception of conventional and functional yogurts using word association and hard laddering. Food Quality Prefer. 19 (7), 636-643 (2008).
  30. Lee, W. J. A study on word cloud techniques for analysis of unstructured text data. J Converg Culture Tech. 6 (4), 715-720 (2020).
  31. Word Cloud Explorer: Text Analytics Based on Word Clouds. Heimerl, F., Lohmann, S., Lange, S., Ertl, T. 47th Hawaii international conference on system sciences, , IEEE. (2014).
  32. Kulevicz, R. A., et al. Influence of sustainability reports on social and environmental issues: bibliometric analysis and the word cloud approach. Env Rev. 28 (4), 380-386 (2020).
  33. Rubbo, S. D., Gardner, J. F. A review of sterilization and disinfection. Lloyd-Luke. , (1965).
  34. Kelsey, J. C. Sterilization by ethylene oxide. J Clin Pathol. 14 (1), 59-61 (1961).
  35. Shintani, H. Ethylene oxide gas sterilization of medical devices. Biocontrol Sci. 22 (1), 1-16 (2017).
  36. Rutala, W. A., Gergen, M. F., Weber, D. J. Comparative evaluation of the sporicidal activity of new low-temperature sterilization technologies: ethylene oxide, 2 plasma sterilization systems, and liquid peracetic acid. Am J Infect Control. 26 (4), 393-398 (1998).
  37. Dion, M., Parker, W. Steam sterilization principles. Pharm Eng. 33 (6), 1-8 (2013).
  38. Környei, Z., et al. Cell sorting in a Petri dish controlled by computer vision. Sci Rep. 3, 1088(2013).
  39. Hsu, J. T., et al. Chronic wound assessment and infection detection method. BMC Med Inform Decis Mak. 19 (1), 99(2019).
  40. Katoh, M. Test-retest reliability of isometric ankle plantar flexion strength measurement performed by a hand-held dynamometer considering fixation: examination of healthy young participants. J Phys Ther Sci. 34 (6), 463-466 (2022).
  41. Li, X., Zhao, J., Ma, G., Huang, S. Experimental study on the traditional timber mortise-tenon joints. Adv Str Eng. 18 (12), 2089-2102 (2016).
  42. Cottle, R. W. The principal pivoting method revisited. Mathematical Prog. 48, 369-385 (1990).
  43. Cross, N. Engineering design methods: strategies for product design. , John Wiley & Sons. (2021).
  44. Otto, K., Wood, K. Product design: techniques in reverse engineering and new product development. , Pearson. (2001).
  45. Tariq, M., et al. Gefitinib inhibits M2-like polarization of tumor-associated macrophages in Lewis lung cancer by targeting the STAT6 signaling pathway. Acta Pharmacol Sin. 38 (11), 1501-1511 (2017).
  46. Rahimi, S., et al. CRISPR/Cas9-mediated knockout of Lcn2 effectively enhanced CDDP-induced apoptosis and reduced cell migration capacity of PC3 cells. Life Sci. 231, 116586(2019).
  47. Cormier, N., Yeo, A., Fiorentino, E., Paxson, J. Optimization of the wound scratch assay to detect changes in murine mesenchymal stromal cell migration after damage by soluble cigarette smoke extract. J Vis Exp. (106), e53414(2015).
  48. Pinto, B. I., Cruz, N. D., Lujan, O. R., Propper, C. R., Kellar, R. S. In vitro scratch assay to demonstrate effects of arsenic on skin cell migration. J Vis Exp. (144), e58838(2019).
  49. Rodriguez, L. G., Wu, X., Guan, J. L. Wound healing assay. Methods Mol Biol. 294, 23-29 (2005).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved