דגימת דם של ורידים תת-קלאביים בחולדות מודעות

Summary

כאן אנו מציגים שילוב של הגבלת חולדות יעילה ושיטות ניקור ורידים תת-קרקעיות המאפשרות איסוף דם מהיר, בטוח וחוזר בחולדות ללא הרדמה.

Abstract

ישנן מספר שיטות מבוססות לקבלת דגימות דם חוזרות מחולדות, כאשר השיטות הנפוצות ביותר הן דגימת ורידים צידיים בזנב ללא הרדמה ודגימת ורידים ג'וגולריים בהרדמה. עם זאת, רוב השיטות הללו דורשות סיוע וציוד הרדמה ולעיתים מציבות קשיים מבחינת איסוף הדם או האיכות הירודה של דגימות הדם. בנוסף, שיטות איסוף דם אלה גוזלות זמן ומשאבי אנוש משמעותיים כאשר נדרשת דגימת דם חוזרת למספר רב של חולדות. מחקר זה מציג טכניקה לדגימת דם חוזרת בחולדות לא מורדמות על ידי אדם מיומן יחיד. דגימות דם משביעות רצון מאוד ניתן להשיג על ידי ניקוב הווריד subclavian. השיטה הדגימה שיעור הצלחה כולל מרשים של 95%, עם זמן חציוני של 2 דקות בלבד מריסון החולדות ועד להשלמת איסוף הדם. יתר על כן, ביצוע איסוף דם רצוף בטווח המיועד אינו גורם נזק לחולדות. שיטה זו שווה לקדם לאיסוף הדם, במיוחד במחקרים פרמקוקינטיים בקנה מידה גדול.

Introduction

חולדות הן אחת מחיות הניסוי הנפוצות ביותר, וישנן דרכים רבות להשיג דגימות דם. עבור ניסויים הכוללים איסוף דם יחיד בשלב הסיום, כמות מספקת של דם ניתן להשיג באמצעות ניקוב לב או איסוף דם אבי העורקים הבטני¹. עם זאת, מחקרים מסוימים דורשים איסוף דם חוזר מחולדות לצורך בדיקת דם שגרתית או ביוכימית, במיוחד במחקרי פרמקוקינטיקה וטוקסיקולוגיה, שבהם נדרשת איסוף דם חוזר כדי לקבוע את הספיגה, ההפצה והמטבוליזם של תרופות².

כיום, למרות שאיסוף דם וורידי זנב היא השיטה הנפוצה ביותר לדגימת דם מחולדות, למרות שאינה דורשת הרדמה, שיטה זו יכולה להיות מאתגרת לאיסוף חוזר, ונפח הדם שנאסף קטן יחסית ^3,....

Protocol

מחקר זה דבק בהנחיות המפורטות במהדורה השמינית של המדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה¹³. המחקר קיבל אישור מוועדת האתיקה של בית החולים השני של אוניברסיטת לאנז'ו ותועד בהתאם להנחיות ARRIVE 2.0¹⁴. 12-16 חולדות וויסטאר בריאות (שישה זכרים במשקל 290-330 גרם ושש נקבות במשקל 250-280 גרם) בגילאי 12-16 שבועות שוכנו במעבדת בעלי החיים GLP באוניברסיטת לאנז'ו במשך 3 ימים לפני הניסוי בפועל. כלובי החולדות בהם נעשה שימוש היו מסוג R5, בגודל 545 מ"מ x 395 מ"מ x 200 מ"מ, וצוידו בחומר מצע אוטוקלאבי. לכל החולדות ניתנה גישה בלתי מוגבלת הן למזון והן למים. המעבדה שמרה על לחות ממוצעת של 25%, טמפרטורה ממוצעת של 24 מעלות צלזיוס ומחזור אור לסירוגין בין ה....

תוצאות

דגימות פלזמה באיכות גבוהה מציגות גוון, בהירות ושקיפות בצבע צהוב-בהיר, ללא כל גוון אדום או קרישה, כפי שמתואר באיור 2A. איור 2B מראה המוליזה (צד שמאל) או קרישה (צד ימין) כתוצאה מפרוצדורות לא נאותות, בהתאמה. במהלך 96 מפגשי איסוף דם בתוך 4 ימים, זמני איסוף הדם היחידים ה.......

Discussion

למרות שאיסוף דם של ורידים בזנב הוא השיטה הנפוצה ביותר לדגימת דם חוזרת בחולדות, הוא עשוי להיות מושפע מתרופות הרדמה, ובשל גודלו הקטן של וריד הזנב, כמות הדם שניתן לאסוף במקרה אחד מוגבלת, מה שמוביל למשך איסוף דם ארוך יותר ^4,5. למרות שמערכות ספקטרומטריית מסה דו-צדד?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.75% normal saline	Gansu Fuzheng Pharmaceutical Technology Co., Ltd.	——	Prepared heparin sodium solution
1 mL Pasteur pipette	Biosharp	BS-XG-01-NS	Blood collection
1 mL syringe (26 G, 0.45 mm x 12 mm)	Shinva Medical Instrument Co.,Ltd.	0.45*12RWLB	Blood collection
1.5 mL Eppendorf tube	Biosharp	BS-15-M	Blood storage and collection
75% medical alcohol	Shandong Lircon Medical Technology Co., Ltd.	——	Disinfection of rat blood collection site
Centrifuge tube holder	Biosharp	BS-05/15-SM60	——
Electronic scale	Shanghai PUCHUN Measure Instrument Co., Ltd.	JE1002	Weigh
Heparin sodium injection	Hebei Changshan Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd.	——	Rinse the syringe and EP tube; dilute with normal saline to 25 U/mL
Low temperature centrifuge	HuNan Xiang Yi Centrifuge Instrument  Co., Ltd.	H1750R	Separation of serum