A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לביסוס מודל עכבר הזרקת זרע תוך ציטופלזמית (ICSI)-העברת עוברים (ET), המאפשר לנו לצפות בשינויים הקשורים לגיל במטבוליזם של גלוקוז שניתן לייחס ל- ICSI, ומספקים תובנות לגבי ההשפעות ארוכות הטווח הפוטנציאליות שלו על ההתפתחות האנושית.

Abstract

תוחלת החיים האנושית ארוכה במידה ניכרת, בעוד שמודלים של עכברים יכולים לדמות את כל תוחלת החיים האנושית בתקופה קצרה יחסית, כאשר שנה אחת של חיי עכבר שווה בערך ל-40 שנות אדם. הזרקת זרע תוך ציטופלזמית (ICSI) היא טכנולוגיית רבייה נפוצה בסיוע בפרקטיקה קלינית. עם זאת, בהתחשב בהופעתה האחרונה יחסית לפני כ -30 שנה, ההשפעות ארוכות הטווח של טכניקה זו על ההתפתחות האנושית עדיין לא ברורות. במחקר זה ביססנו את שיטת ICSI בשילוב עם החזרת עוברים (ET) באמצעות מודל עכבר. התוצאות הראו כי זרע עכבר תקין, לאחר שעבר תרבית חוץ גופית ולאחר מכן ICSI, הציג שיעור הפריה של 89.57% ושיעור שני תאים של 87.38%. לאחר ET, שיעור הילודה של צאצאים היה כ 42.50%. יתר על כן, ככל שהעכברים הזדקנו, נצפו תנודות ברמות חילוף החומרים של גלוקוז, אשר עשויות להיות קשורות ליישום טכניקת ICSI. ממצאים אלה מצביעים על כך שטכניקת ICSI-ET של העכבר מספקת פלטפורמה רבת ערך להערכת ההשפעה של הפרעות זרע על התפתחות העובר והשפעותיהן ארוכות הטווח על בריאות הצאצאים, במיוחד בנוגע למטבוליזם של גלוקוז. מחקר זה מספק תובנות חשובות למחקר נוסף על ההשפעות האפשריות של טכניקת ICSI על התפתחות האדם, תוך הדגשת הצורך בחקירה מעמיקה של ההשלכות ארוכות הטווח של טכנולוגיה זו.

Introduction

בעיות פוריות התגלו כמוקד עיקרי של דאגה רפואית וסוציולוגית, במיוחד בחברה המודרנית שבה שיעורי הפריון היורדים, והחומרה הגוברת של שכיחות וחומרת אי פוריות עלו לגדולה. טכנולוגיית רבייה מסייעת (ART) מספקת מגוון רחב של אפשרויות להתמודד עם אתגרים אלה, עם הזרקת זרע תוך ציטופלזמית (ICSI) המשמשת בדרך כלל כהתערבות טיפולית.

מאז שפלרמו דיווחה על ההריון המוצלח הראשון שהושג באמצעות הזרקת זרע תוך ציטופלזמית (ICSI) בשנת 1992, ICSI הפכה לטכניקה מרכזית בטכנולוגיות רבייה מסייעות (ART)1. עם זאת, בהתחשב בכך ש- ICSI נמצא בשימוש במסגרות קליניות במשך 30 שנה בלבד, תקופה קצרה יחסית לתוחלת ה....

Protocol

הפרוטוקול של ICSI-ET המתואר להלן עוקב אחר ההנחיות ואושר על ידי הסקירה האתית של בעלי חיים של מכון שנגחאי לחקר הורות מתוכננת. נהלי בטיחות: יש ללבוש תמיד ציוד מגן אישי (PPE) מתאים בעת טיפול בכימיקלים או בחומרים ביולוגיים. שימוש במנדפים: בצע את כל ההליכים הכוללים כימיקלים נדיפים או ייצור תרסיסים בתוך מכסה אדים מאושר או ארון בטיחות ביולוגית. השתמש עכברים נקבה (6-8 שבועות בן 6-8 שבועות B6D2F1 זן) עבור הליך superovulation.

1. ICSI בעכברים

  1. ביוץ יתר של עכברים
    1. יש לבצע זריקה תוך-צפקית של גונדוטרופין בסרום סוסה בהריון (PMSG) במינון של 7.5 IU לעכבר בסביבות השעה 20:00 ביום הראשון.
    2. ....

תוצאות

במעבדה שלנו, השגנו שיעור הפריה של 89.57% ושיעור 2 תאים של 87.38% באמצעות ICSI עם זרע קאודלי אפידידימלי בעכברים. שיעור הילודה של צאצאים לאחר ET הוא כ 42.50%. למרבה הפלא, כל שיעורי ההפריה, שיעורי 2 התאים ושיעורי הילודה של צאצאים דומים לרמות שהושגו באמנות אנושית, מה שמאפשר סימולציה מקיפה ?.......

Discussion

מחקר זה שילב הזרקת זרע תוך ציטופלזמית של עכבר (ICSI) וטכניקות העברת עוברים (ET) כדי לשחזר באופן מקיף טכנולוגיית רבייה בסיוע אנושי (ART) ולבחון את ההשפעה של ICSI בשילוב עם ET על התפתחות צאצאים. היישום של טכניקת ICSI עם זרע עכבר רגיל הניב הפריה גבוהה (86.76%) ושיעורי 2 תאים (88.48%). לאחר ET, שיע?.......

Disclosures

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה על ידי תוכנית הפרויקט העיקרי של קרן הפיתוח המיוחדת לאזור הדגמת החדשנות העצמאית הלאומית של שנחאי ג'אנג-ג'יאנג (ZJ2022-ZD-006), פרויקט מימון ממוקד של ועדת המדע והטכנולוגיה העירונית של שנחאי (22DX1900400), תוכנית הנוער של ועדת הבריאות העירונית של שנחאי (20204Y0276). הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (32070849).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
1.25% avertin (2,2,2-tribromoethanol)Nanjing AibeiM2960for anesthetization
Bacteriological Petri Dishes 35 x 10 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterileBD353001
Bacteriological Petri Dishes 50 x 9 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterileBD351006
Biosafety CabinetESCOclass figure-materials-658 BSCAseptic operations, making culture dishes, aliquoting reagents, etc.
CO2 IncubatorThermo8000DHEmbryo culture
Dissection MicroscopeOlympusSZX16Use in mouse embryo transfer
Fluorinert Fc-770SIGMAF3556Fluorinert FC-770 is a thermally stable fully fluorinated liquid with high dielectric strength and resistivity, used as operating fluid
handheld glucometerRocheAccuChek performaBlood glucose measurement
HTFMerckMR-070-DThe EmbryoMax Human Tubal Fluid (HTF) (1x), liquid designed for use with Mouse IVF is available in a 50 mL format and has been optimized and validated for Embryo Culture.
Hydraulic MicroinjectorEppendorfCellTram 4r Oil, 5196000030For sperm injection
Inverted MicroscopeNikonTI2-UMicromanipulation observation host
KSOMMerckMR-020P-D(1x), Powder, w/o Phenol Red, 5 x 10 mL
M2MerckMR-015-DEmbryoMax M2 Medium (1x), Liquid, with Phenol Red
MicromanipulatorNARISHIGENTX-N4Micromanipulation arm
mineral oil SIGMAM8410Mineral oil is suitable for use as a cover layer to control evaporation and cross-contamination in various molecular biology applications.
Needle CutterNanjing AibeiSutter MF-800Use for fabricating micromanipulation needles
Needle PullerNanjing AibeiSutter model p-100Use for making micromanipulation needles
Piezo Drill Trip Mouce ICSIEppendorf5195000.087Application of ICSI injection needle.
Piezoelectric Micromanipulator (Membrane Breaker)EppendorfEppendorf PiezoXpertUse of micro-pulses to break the zona pellucida and oolemma of the oocyte
Pneumatic MicroinjectorEppendorfCellTram 4r Air, 5196000013For fixing the oocyte
Ready-to-use Human Chorionic Gonadotropin (Hcg)Nanjing AibeiM2520Sterilization reagent, intraperitoneal injection. 50 IU/mL
Ready-to-use Pregnant Mare's Serum Gonadotropin (PMSG)Nanjing AibeiM2620Sterilization reagent, intraperitoneal injection. 50 IU/mL
StereomicroscopeOlympusSZX7Oocyte retrieval and observation of embryo development

References

  1. Palermo, G., Joris, H., Devroey, P., Van Steirteghem, A. C. Pregnancies after intracytoplasmic injection of single spermatozoon into an oocyte. Lancet. 340 (8810), 17-18 (1992).
  2. Flurkey, K. M., Currer, J., Harrison, D. E., Fox, J. G., et al.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

ICSIET

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved