A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
כאן, אנו מציגים פרוטוקול לביסוס מודל עכבר הזרקת זרע תוך ציטופלזמית (ICSI)-העברת עוברים (ET), המאפשר לנו לצפות בשינויים הקשורים לגיל במטבוליזם של גלוקוז שניתן לייחס ל- ICSI, ומספקים תובנות לגבי ההשפעות ארוכות הטווח הפוטנציאליות שלו על ההתפתחות האנושית.
תוחלת החיים האנושית ארוכה במידה ניכרת, בעוד שמודלים של עכברים יכולים לדמות את כל תוחלת החיים האנושית בתקופה קצרה יחסית, כאשר שנה אחת של חיי עכבר שווה בערך ל-40 שנות אדם. הזרקת זרע תוך ציטופלזמית (ICSI) היא טכנולוגיית רבייה נפוצה בסיוע בפרקטיקה קלינית. עם זאת, בהתחשב בהופעתה האחרונה יחסית לפני כ -30 שנה, ההשפעות ארוכות הטווח של טכניקה זו על ההתפתחות האנושית עדיין לא ברורות. במחקר זה ביססנו את שיטת ICSI בשילוב עם החזרת עוברים (ET) באמצעות מודל עכבר. התוצאות הראו כי זרע עכבר תקין, לאחר שעבר תרבית חוץ גופית ולאחר מכן ICSI, הציג שיעור הפריה של 89.57% ושיעור שני תאים של 87.38%. לאחר ET, שיעור הילודה של צאצאים היה כ 42.50%. יתר על כן, ככל שהעכברים הזדקנו, נצפו תנודות ברמות חילוף החומרים של גלוקוז, אשר עשויות להיות קשורות ליישום טכניקת ICSI. ממצאים אלה מצביעים על כך שטכניקת ICSI-ET של העכבר מספקת פלטפורמה רבת ערך להערכת ההשפעה של הפרעות זרע על התפתחות העובר והשפעותיהן ארוכות הטווח על בריאות הצאצאים, במיוחד בנוגע למטבוליזם של גלוקוז. מחקר זה מספק תובנות חשובות למחקר נוסף על ההשפעות האפשריות של טכניקת ICSI על התפתחות האדם, תוך הדגשת הצורך בחקירה מעמיקה של ההשלכות ארוכות הטווח של טכנולוגיה זו.
בעיות פוריות התגלו כמוקד עיקרי של דאגה רפואית וסוציולוגית, במיוחד בחברה המודרנית שבה שיעורי הפריון היורדים, והחומרה הגוברת של שכיחות וחומרת אי פוריות עלו לגדולה. טכנולוגיית רבייה מסייעת (ART) מספקת מגוון רחב של אפשרויות להתמודד עם אתגרים אלה, עם הזרקת זרע תוך ציטופלזמית (ICSI) המשמשת בדרך כלל כהתערבות טיפולית.
מאז שפלרמו דיווחה על ההריון המוצלח הראשון שהושג באמצעות הזרקת זרע תוך ציטופלזמית (ICSI) בשנת 1992, ICSI הפכה לטכניקה מרכזית בטכנולוגיות רבייה מסייעות (ART)1. עם זאת, בהתחשב בכך ש- ICSI נמצא בשימוש במסגרות קליניות במשך 30 שנה בלבד, תקופה קצרה יחסית לתוחלת ה....
הפרוטוקול של ICSI-ET המתואר להלן עוקב אחר ההנחיות ואושר על ידי הסקירה האתית של בעלי חיים של מכון שנגחאי לחקר הורות מתוכננת. נהלי בטיחות: יש ללבוש תמיד ציוד מגן אישי (PPE) מתאים בעת טיפול בכימיקלים או בחומרים ביולוגיים. שימוש במנדפים: בצע את כל ההליכים הכוללים כימיקלים נדיפים או ייצור תרסיסים בתוך מכסה אדים מאושר או ארון בטיחות ביולוגית. השתמש עכברים נקבה (6-8 שבועות בן 6-8 שבועות B6D2F1 זן) עבור הליך superovulation.
1. ICSI בעכברים
במעבדה שלנו, השגנו שיעור הפריה של 89.57% ושיעור 2 תאים של 87.38% באמצעות ICSI עם זרע קאודלי אפידידימלי בעכברים. שיעור הילודה של צאצאים לאחר ET הוא כ 42.50%. למרבה הפלא, כל שיעורי ההפריה, שיעורי 2 התאים ושיעורי הילודה של צאצאים דומים לרמות שהושגו באמנות אנושית, מה שמאפשר סימולציה מקיפה ?.......
מחקר זה שילב הזרקת זרע תוך ציטופלזמית של עכבר (ICSI) וטכניקות העברת עוברים (ET) כדי לשחזר באופן מקיף טכנולוגיית רבייה בסיוע אנושי (ART) ולבחון את ההשפעה של ICSI בשילוב עם ET על התפתחות צאצאים. היישום של טכניקת ICSI עם זרע עכבר רגיל הניב הפריה גבוהה (86.76%) ושיעורי 2 תאים (88.48%). לאחר ET, שיע?.......
למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.
עבודה זו נתמכה על ידי תוכנית הפרויקט העיקרי של קרן הפיתוח המיוחדת לאזור הדגמת החדשנות העצמאית הלאומית של שנחאי ג'אנג-ג'יאנג (ZJ2022-ZD-006), פרויקט מימון ממוקד של ועדת המדע והטכנולוגיה העירונית של שנחאי (22DX1900400), תוכנית הנוער של ועדת הבריאות העירונית של שנחאי (20204Y0276). הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (32070849).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
1.25% avertin (2,2,2-tribromoethanol) | Nanjing Aibei | M2960 | for anesthetization |
Bacteriological Petri Dishes 35 x 10 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile | BD | 353001 | |
Bacteriological Petri Dishes 50 x 9 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile | BD | 351006 | |
Biosafety Cabinet | ESCO | class ![]() | Aseptic operations, making culture dishes, aliquoting reagents, etc. |
CO2 Incubator | Thermo | 8000DH | Embryo culture |
Dissection Microscope | Olympus | SZX16 | Use in mouse embryo transfer |
Fluorinert Fc-770 | SIGMA | F3556 | Fluorinert FC-770 is a thermally stable fully fluorinated liquid with high dielectric strength and resistivity, used as operating fluid |
handheld glucometer | Roche | AccuChek performa | Blood glucose measurement |
HTF | Merck | MR-070-D | The EmbryoMax Human Tubal Fluid (HTF) (1x), liquid designed for use with Mouse IVF is available in a 50 mL format and has been optimized and validated for Embryo Culture. |
Hydraulic Microinjector | Eppendorf | CellTram 4r Oil, 5196000030 | For sperm injection |
Inverted Microscope | Nikon | TI2-U | Micromanipulation observation host |
KSOM | Merck | MR-020P-D | (1x), Powder, w/o Phenol Red, 5 x 10 mL |
M2 | Merck | MR-015-D | EmbryoMax M2 Medium (1x), Liquid, with Phenol Red |
Micromanipulator | NARISHIGE | NTX-N4 | Micromanipulation arm |
mineral oil | SIGMA | M8410 | Mineral oil is suitable for use as a cover layer to control evaporation and cross-contamination in various molecular biology applications. |
Needle Cutter | Nanjing Aibei | Sutter MF-800 | Use for fabricating micromanipulation needles |
Needle Puller | Nanjing Aibei | Sutter model p-100 | Use for making micromanipulation needles |
Piezo Drill Trip Mouce ICSI | Eppendorf | 5195000.087 | Application of ICSI injection needle. |
Piezoelectric Micromanipulator (Membrane Breaker) | Eppendorf | Eppendorf PiezoXpert | Use of micro-pulses to break the zona pellucida and oolemma of the oocyte |
Pneumatic Microinjector | Eppendorf | CellTram 4r Air, 5196000013 | For fixing the oocyte |
Ready-to-use Human Chorionic Gonadotropin (Hcg) | Nanjing Aibei | M2520 | Sterilization reagent, intraperitoneal injection. 50 IU/mL |
Ready-to-use Pregnant Mare's Serum Gonadotropin (PMSG) | Nanjing Aibei | M2620 | Sterilization reagent, intraperitoneal injection. 50 IU/mL |
Stereomicroscope | Olympus | SZX7 | Oocyte retrieval and observation of embryo development |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved