השראת מושבות קטנות בקנדידה מבריקה באמצעות טיפול פוטודינמי בתיווך בנגל

Summary

המשמעות של מושבות קטנות בקנדידה spp. עמידות לתרופות לא נחקרה במלואה. טיפול פוטודינמי אנטי-מיקרוביאלי (aPDT) מציע אסטרטגיה מבטיחה נגד זיהומים פטרייתיים עמידים לתרופות. מחקר זה מדגים כי aPDT בתיווך בנגל ורד מבטל ביעילות קנדידה גלברטה וגורם למושבות קטנות, ומציג הליך ייחודי.

Abstract

מול שיעור תמותה של 40% בחולי קנדידמיה, קנדידה עמידה לתרופות והמוטציות הקטנות שלהם נותרו אתגר טיפולי גדול. טיפול פוטודינמי אנטי-מיקרוביאלי (aPDT) מכוון למבנים פטרייתיים מרובים, בניגוד לאנטיביוטיקה/אנטי-פטרייתיות, מה שעלול לסכל עמידות. שיטות מסורתיות לגרימת מושבות קטנות מסתמכות על אתידיום ברומיד או פלוקונזול, שיכולים להשפיע על רגישות לתרופות ותגובות לחץ. מחקר זה בדק את היישום של אור ירוק (שיא 520 ננומטר) ופוטונסיטייזר ורד בנגלי (RB) כדי להילחם במבודד קנדידה גלברטה עמיד לתרופות. הממצאים הראו כי טיפול ב- aPDT עיכב באופן משמעותי את צמיחת התאים (הפחתה של ≥99.9%) וגרם ביעילות להיווצרות מושבות קטנות, כפי שמעידה הקטנת גודל ואובדן צביעת מחוון חיזור מיטוכונדריאלי. מחקר זה מספק ראיות ראשוניות לכך ש-aPDT יכול לגרום למושבות קטנות בזן C. glabrata עמיד לתרופות במבחנה, ומציע גישה בעלת פוטנציאל טרנספורמטיבי למאבק בזיהומים פטרייתיים עמידים.

Introduction

זיהומים פטרייתיים, במיוחד אלה הנגרמים על ידי קנדידה אלביקנס וקנדידה גלברטה עמידה יותר ויותר לתרופות, מהווים איום עולמי רציני¹. זיהומים אלה יכולים להיות קטלניים, במיוחד עבור חולים מאושפזים ואלה עם מערכת חיסונית מוחלשת. עלייה בעמידות האנטי פטרייתית מאיימת על השליטה בקנדידה פולשנית, זיהום פטרייתי חמור עם תמותה גבוהה, במיוחד מקנדידה אלביקנס². זנים עמידים מעכבים טיפול יעיל, מה שעלול להגדיל הן את המורכבות והן את שיעורי התמותה. במחוז אלאמדה, קליפורניה, ארה"ב, C. glabrata הפך למין הפולש הנפוץ ביותר³. שינוי זה בשכיחות ובתפוצה של מיני קנדידה עשוי להיות מושפע משיטות בריאות....

Protocol

1. טיפוח של C. glabrata

הערה: C. glabrata עמיד לתרופות מרובות (C2-1000907) העמיד לרוב הסוכנים האנטי פטרייתיים, כולל fluconazole, משמש לניסויים. ייתכן שיהיה צורך להתאים את תנאי הניסוי לזן הספציפי, שכן ייתכנו שינויים בין זנים שונים. כל הניסויים השתמשו בקנדידה לוג-פאזה שגדלה ב-25 מעלות צלזיוס (מחקה זיהום טבעי) לעקביות. חוסר הקורים של C. glabrata מפשט את הכימות בהשוואה ל - C. albicans, היוצר קורים ב- 37 ° C¹⁰.

1. כדי להכין תרבית לוג-פאזה של C. glabrata, בחרו מושבה בודדת מצלחת אגר והעבירו אותה למבחנה מזכוכית עם 3 מ"ל של שמרים סטריליים פפטון דקסטרוז (YPD)....

תוצאות

הנתונים מוצגים כממוצע עם שגיאת תקן ± והתקבלו משלושה ניסויים בלתי תלויים, עם לפחות טריפליקטים בכל קבוצה. נתונים ניסיוניים, כולל ספירת מושבות, מדידות OD₆₀₀ ותוצאות צביעת TTC, עברו גרפים ונותחו סטטיסטית באמצעות גרפים ותוכנות סטטיסטיות (ראה טבלת חומרים). ANOVA חד-כיווני או מבחן t ?.......

Discussion

מחקר זה חושף את PDT כשיטה המדווחת הראשונה לגרימת היווצרות מושבות קטנות בקנדידה, העולה על ההשפעות המבוססות של אתידיום ברומיד ופלוקונזול. תצפית חדשנית זו מחייבת חקירה נוספת כדי לפענח את השלכותיה הן על מיגור פטריות על ידי הפחתת האלימות והן על הופעתם של מנגנוני התנגדות.

PDT בתיוו?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.22 μm filter	Merck, Taipei, Taiwan	Millex, SLGVR33RS
1.5 mL microfuge tube	Neptune, San Diego, USA	#3745
20% Triphenyltetrazolium chloride (TTC)	Sigma-Aldrich, MO, USA	T8877
5 mL polypropylene round bottom tube	Corning, AZ, USA	352059
5 mL round-bottom tube with cell strainer cap	Corning, AZ, USA	Falcon, #352235
96-well plate	Alpha plus, Taoyuan Hsien, Taiwan	#16196
Agar	BRS, Tainan, Taiwan	AG012
Blank disk	Advantec, Tokyo, Japan	49005040
Centrifuge	Eppendorf, UK	5415R
Ethidium bromide solution	Sigma-Aldrich, MO, USA	E1510
Fluconazole, 2 mg/mL	Pfizer, NY, USA	BC18790248
GraphPad Prism	GraphPad Software	Version 7.0
Green light emitting diode (LED) strip	Nanyi electronics Co.,Ltd, Tainan, Taiwan	5050	Excitation wave: 500~550 nm
Low Temperature. shake Incubators	Yihder, Taipei, Taiwan	LM-570D (R)
Mouth care cotton swabs	Good Verita Enterprise, Taipei, Taiwan	161357
Muller Hinton II agar	BD biosciences, California, USA	211438
Multimode microplate reader	Molecular Devices	SpectraMax i3x
OD600 spectrophotometer	Biochrom, London, UK	Ultrospec 10
Rose Bengal	Sigma-Aldrich, USA	330000	stock concentration 40 mg/mL = 4%, prepare in PBS, stored at 4 °C
Sterilized glass tube	Sunmei, Tainan, Taiwan	AK45048-16100
Yeast Extract Peptone Dextrose Medium	HIMEDIA, India	M1363