איסוף דם רציף מווריד נבוי נחות ואחריו וריד פורטל להערכת מטבוליטים מיקרוביאליים במעיים בעכברים

Summary

הפרוטוקול מדגים שיטה לאיסוף דם מוורידי פורטל ווריד נבוב נחות מעכברים ברצף כדי להעריך את הייצור והספיגה של מטבוליטים מיקרוביאליים במעי.

Abstract

ידוע כי תוצרי חיידקי המעי פועלים הן באופן מקומי בתוך המעי והן נספגים במחזור הדם, שם השפעתם יכולה להתרחב למערכות איברים מרוחקות רבות. חומצות שומן קצרות שרשרת (SCFA) הן סוג אחד של מטבוליטים המיוצרים על-ידי חיידקי מעיים במהלך התסיסה של סיבים תזונתיים בלתי ניתנים לעיכול. כיום הם מוכרים כתורמים חשובים להשפעה של מיקרוביום המעי על מערכות איברים חוץ-מעיים דרך המעי-ריאה, המעי-מוח וצירי איברי מעיים אחרים ברחבי המאכסן. SCFAs נספגים מהמעי הגס, דרך רקמת המעי, לתוך הווריד הפורטלי (PV). לאחר מכן הם עוברים דרך הכבד, ונצרכים באיברים שונים כגון המוח, השריר, רקמת השומן והריאות. SCFAs נמדדים בקלות הרבה ביותר בחומר הצואה שגורש, עם זאת, מדידות מדויקות יותר התקבלו מתכולת צואה תוך מעי גס. כאן אנו מציעים כי דגימת PV ופלזמה מערכתית במחזור של נבדק יחיד עשויה להיות עדיפה לחקר רמות הקליטה, ההובלה והמערכת של SCFA בעכברים. אנו מציגים טכניקה חדשה לדגימת דם יעילה מה-PV והווריד הנבוב התחתון (IVC) המאפשרת איסוף כמויות גדולות יחסית של דם ממחזור הדם הפורטלי והמערכתי. זה מושג על ידי קשירת PV, ובכך מאפשר הרחבה או הגדלה של PV כפי שהוא מתמלא בחזרה מן הוורידים mesenteric המתנקזים לתוכו. באמצעות שיטה זו, הצלחנו לשפר את שיעור האיסוף המוצלח, כמו גם את כמות הדם הכוללת שנאספה (עד 0.3 מ"ל מ IVC ו 0.5 מ"ל מ PV).

Introduction

חומצות שומן קצרות שרשרת (SCFA) הן קבוצה עיקרית של מטבוליטים המיוצרים על-ידי מיקרוביוטת המעי. תפקידם הקריטי באינטראקציה בין מיקרוביום המעי לבין איברים מרוחקים אחרים¹ נתמך במחקר המתאר כיצד הם מווסתים דלקת, מאותתים דרך קולטנים ייעודיים ומשמשים כמצעים במטבוליזם תאי 2,3,4,5. מחקר שנערך לאחרונה מהקבוצה שלנו הציע כי SCFAs הם מווסתי דלקת חיוניים in vivo של טונוס חיסוני הריאות in vivo דרך ציר מעי-ריאה ^6,7. דיווחים נוס....

Protocol

כל השלבים בהליך אי-הישרדותי זה אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) באוניברסיטת קליפורניה בסן פרנסיסקו. מין העכבר והזן שבו השתמשו היו עכברי C57BL/6J זכרים (במשקל 25-35 גרם ובגילאי 12-15 שבועות). ניתן להשתמש גם בזני עכבר נקביים ו/או סטנדרטיים אחרים.

1. הרדמה

1. נגב את החצי התחתון של בטן העכבר עם מקלוני אתנול 70%. ניהול הרדמה על ידי מתן זריקה intraperitoneal של tribromoethanol (250-400 מ"ג / ק"ג). ניתן להשתמש גם בקטמין/קסילזין או בהרדמה איזופלורנית. החל משחה אופתלמית על העיניים כדי למנוע נזק הקרנית.
2. להזריק buprenorphine (0.05-0.1 מ"ג / ק"ג) intraperito....

תוצאות

באמצעות השיטה שתוארה לעיל, אנו יכולים לאסוף דגימות דם מה- IVC וה- PV ברצף באותו עכבר עם שיעור הצלחה של יותר מ -95%. הכמויות הממוצעות של דגימות הדם שנאספו הן 0.25 מ"ל עבור IVC ו 0.35 מ"ל עבור PV.

באמצעות ספקטרומטריית מסה של כרומטוגרפיית גז (GC-MS), מדדנו את ריכוז SCFAs בצואה, בדם.......

Discussion

מאמר זה מתאר שיטת in vivo חדשנית לאיסוף כמעט סימולטני של דגימות דם ברצף מ- IVC ו- PV באותו עכבר ניסיוני. שיטה זו שימושית למדידת הרמות של תוצרי מיקרוביוטה במעי, כגון SCFAs, העוברים דרך מחזור הדם בפורטל. נפח הדם המקסימלי הממוצע שניתן לאסוף במהלך הליך סופני בעכברים (במשקל 25-30 גרם) .......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
2,2,2 Tribromoethanol, 97% (Avertin)	Sigma Aldrich	T48402-25G	Anesthetic agent
Buprenorphine Hydrochloride Injection 0.3 mg/mL	PAR Pharmaceutical	NDC 42023-179-05	Analgesic agent
Dressing Forceps	Miltex	6-100	Dissection
Graefe Forceps	Roboz	RS-5136	Dissection
Hepatin sodium 1000 USP units/mL	Hikma	NDC 0641-0391-12	Blood sample syringes/tubes heparinization
Prolene 7-0	Ethicon	8696G	Portal vein ligature
Scissors	F.S.T	14058-11	Dissection
Student Halsted-Mosquito Hemostats	F.S.T	91308-12	Dissection
Surgical tape	3M Transpore	1527-1	Mouse limbs fixation
U-100 Insulin Syringe 28G1/2	EXEL	26027	Blood sample collection