A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
הפרוטוקול מדגים שיטה לאיסוף דם מוורידי פורטל ווריד נבוב נחות מעכברים ברצף כדי להעריך את הייצור והספיגה של מטבוליטים מיקרוביאליים במעי.
ידוע כי תוצרי חיידקי המעי פועלים הן באופן מקומי בתוך המעי והן נספגים במחזור הדם, שם השפעתם יכולה להתרחב למערכות איברים מרוחקות רבות. חומצות שומן קצרות שרשרת (SCFA) הן סוג אחד של מטבוליטים המיוצרים על-ידי חיידקי מעיים במהלך התסיסה של סיבים תזונתיים בלתי ניתנים לעיכול. כיום הם מוכרים כתורמים חשובים להשפעה של מיקרוביום המעי על מערכות איברים חוץ-מעיים דרך המעי-ריאה, המעי-מוח וצירי איברי מעיים אחרים ברחבי המאכסן. SCFAs נספגים מהמעי הגס, דרך רקמת המעי, לתוך הווריד הפורטלי (PV). לאחר מכן הם עוברים דרך הכבד, ונצרכים באיברים שונים כגון המוח, השריר, רקמת השומן והריאות. SCFAs נמדדים בקלות הרבה ביותר בחומר הצואה שגורש, עם זאת, מדידות מדויקות יותר התקבלו מתכולת צואה תוך מעי גס. כאן אנו מציעים כי דגימת PV ופלזמה מערכתית במחזור של נבדק יחיד עשויה להיות עדיפה לחקר רמות הקליטה, ההובלה והמערכת של SCFA בעכברים. אנו מציגים טכניקה חדשה לדגימת דם יעילה מה-PV והווריד הנבוב התחתון (IVC) המאפשרת איסוף כמויות גדולות יחסית של דם ממחזור הדם הפורטלי והמערכתי. זה מושג על ידי קשירת PV, ובכך מאפשר הרחבה או הגדלה של PV כפי שהוא מתמלא בחזרה מן הוורידים mesenteric המתנקזים לתוכו. באמצעות שיטה זו, הצלחנו לשפר את שיעור האיסוף המוצלח, כמו גם את כמות הדם הכוללת שנאספה (עד 0.3 מ"ל מ IVC ו 0.5 מ"ל מ PV).
חומצות שומן קצרות שרשרת (SCFA) הן קבוצה עיקרית של מטבוליטים המיוצרים על-ידי מיקרוביוטת המעי. תפקידם הקריטי באינטראקציה בין מיקרוביום המעי לבין איברים מרוחקים אחרים1 נתמך במחקר המתאר כיצד הם מווסתים דלקת, מאותתים דרך קולטנים ייעודיים ומשמשים כמצעים במטבוליזם תאי 2,3,4,5. מחקר שנערך לאחרונה מהקבוצה שלנו הציע כי SCFAs הם מווסתי דלקת חיוניים in vivo של טונוס חיסוני הריאות in vivo דרך ציר מעי-ריאה 6,7. דיווחים נוס....
כל השלבים בהליך אי-הישרדותי זה אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) באוניברסיטת קליפורניה בסן פרנסיסקו. מין העכבר והזן שבו השתמשו היו עכברי C57BL/6J זכרים (במשקל 25-35 גרם ובגילאי 12-15 שבועות). ניתן להשתמש גם בזני עכבר נקביים ו/או סטנדרטיים אחרים.
1. הרדמה
באמצעות השיטה שתוארה לעיל, אנו יכולים לאסוף דגימות דם מה- IVC וה- PV ברצף באותו עכבר עם שיעור הצלחה של יותר מ -95%. הכמויות הממוצעות של דגימות הדם שנאספו הן 0.25 מ"ל עבור IVC ו 0.35 מ"ל עבור PV.
באמצעות ספקטרומטריית מסה של כרומטוגרפיית גז (GC-MS), מדדנו את ריכוז SCFAs בצואה, בדם.......
מאמר זה מתאר שיטת in vivo חדשנית לאיסוף כמעט סימולטני של דגימות דם ברצף מ- IVC ו- PV באותו עכבר ניסיוני. שיטה זו שימושית למדידת הרמות של תוצרי מיקרוביוטה במעי, כגון SCFAs, העוברים דרך מחזור הדם בפורטל. נפח הדם המקסימלי הממוצע שניתן לאסוף במהלך הליך סופני בעכברים (במשקל 25-30 גרם) .......
המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.
AP ממומנת על ידי פרס R01 מה-NIH/NHLBI (1R01HL146753). DM ממומן על ידי מלגת T32 מה-NIH ועל ידי פרסי טייס מתמחה/צוות ממרכז UCSF בניוף לרפואת מיקרוביום.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
2,2,2 Tribromoethanol, 97% (Avertin) | Sigma Aldrich | T48402-25G | Anesthetic agent |
Buprenorphine Hydrochloride Injection 0.3 mg/mL | PAR Pharmaceutical | NDC 42023-179-05 | Analgesic agent |
Dressing Forceps | Miltex | 6-100 | Dissection |
Graefe Forceps | Roboz | RS-5136 | Dissection |
Hepatin sodium 1000 USP units/mL | Hikma | NDC 0641-0391-12 | Blood sample syringes/tubes heparinization |
Prolene 7-0 | Ethicon | 8696G | Portal vein ligature |
Scissors | F.S.T | 14058-11 | Dissection |
Student Halsted-Mosquito Hemostats | F.S.T | 91308-12 | Dissection |
Surgical tape | 3M Transpore | 1527-1 | Mouse limbs fixation |
U-100 Insulin Syringe 28G1/2 | EXEL | 26027 | Blood sample collection |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved