שינוי רמות של חומצה פולית או כולין בתזונה אימהית כדי לחקור את ההשפעה של חוסרים על תוצאות בריאות הצאצאים

Summary

פרוטוקול זה מתאר את השיטה להפחתת הצריכה התזונתית של חומצה פולית או כולין בנקבות עכברות לפני ההריון במטרה לחקור את ההשפעה של תזונה אימהית על תוצאות בריאותיות של צאצאים.

Abstract

תזונה אימהית במהלך ההריון וההנקה ממלאת תפקיד חשוב בהתפתחות העצבית של הצאצאים. מטבוליזם של פחמן אחד (1C), אשר מתרכז סביב חומצה פולית וכולין, כמו גם ויטמינים אחרים מקבוצת B, ממלא תפקיד מפתח במהלך סגירת הצינור העצבי של העובר המתפתח. עם זאת, ההשפעה של חסרים תזונתיים אימהיים אלה במהלך ההריון על התוצאות הבריאותיות של הצאצאים לאחר הלידה נותרה יחסית לא מוגדרת. יתר על כן, חוסרים תזונתיים אימהיים בחומצה פולית או בכולין עשויים להשפיע על תוצאות בריאותיות אחרות אצל צאצאים - מה שהופך את זה למודל בעל ערך. פרוטוקול זה נועד להתוות את ההליך לגרימת מחסור במטבוליזם של 1C בעכברות נקבות באמצעות שינויים תזונתיים. הנקבות נמצאות בדיאטה בעת הגמילה, עד גיל חודשיים, במשך 4-6 שבועות לפני ההזדווגות ונשארות בדיאטה לאורך כל ההריון וההנקה. צאצאים מנקבות אלה יכולים להיות מוערכים עבור תוצאות בריאותיות. ניתן להשתמש בנקבות מספר פעמים כדי ליצור צאצאים, וניתן לאסוף רקמות מנקבות כדי למדוד מדידות מטבוליטים של 1C. פרוטוקול זה מספק סקירה כללית של האופן שבו ניתן לגרום לחוסרים תזונתיים אימהיים בחומצה פולית או בכולין כדי לחקור את התוצאות הבריאותיות של צאצאים.

Introduction

תזונה אימהית במהלך ההריון וההנקה ממלאת תפקיד חיוני בהתפתחות הצאצאים. מטבוליזם של פחמן אחד (1C) הוא רשת מטבולית מרכזית המשלבת אותות תזונתיים עם ביוסינתזה, הומאוסטזיס חמצון-חיזור ואפיגנטיקה. חומצה פולית וכולין הם מרכיבים מרכזיים של 1C הממלאים תפקיד חשוב בסגירת הצינור העצבי. מומלץ לנשים ליטול תוספים עם חומצה פולית וכולין^{במהלך שנות} הפוריות 1. בעוד התפקיד הקריטי של חומצה פולית בהתפתחות העובר נקבע בבירור, המנגנונים הבסיסיים המעורבים עדיין לא ברורים. נשים של הלידה מומלץ לקחת חומצה פולית לפני הכניסה להריון מאז סגירת הצינור העצבי מתרחשת בתוך השליש הראשון². לאימהות בהריון עם מחסור בחומצה פולית או ברכיבים אחרים של 1C, כמו כולין, יש....

Protocol

פרוטוקול זה אושר, וכל הנבדקים בבעלי חיים שימשו בהתאם להנחיות הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת מידווסטרן (פרוטוקול 2983). נקבות עכברי C57BL/6J, בנות חודשיים (משקל גוף, ~20 גרם), שימשו במחקר זה. באופן כללי, עכברים נקבות בגיל הפוריות ניתן להשתמש¹⁰. כדי להבטיח הימנעות מהשפעות המלטה, יש להשתמש במספר נקבות לכל דיאטה¹¹. פרטי הריאגנטים והציוד ששימש במחקר מפורטים בטבלת החומרים.

1. הכנה ניסיונית

1. להשיג חומצה פולית או דיאטה חסרה כולין מיצרני מזון מכרסמים מסחריים. עיין בטבלה 1 לקבלת רשימה מפורטת של מיקרו-חומרים מזינים ומאקרו,....

תוצאות

המחקר התמקד בחקר ההשפעה של חוסרים תזונתיים אימהיים על חומצה פולית או כולין על התוצאות הבריאותיות של צאצאים. משקלים שבועיים נקבעו כדי לפקח על הבריאות הכללית של נשים שנשמרות על דיאטות עם חומצה פולית או מחסור בכולין. בעבודתנו הקודמת לא נצפו שינויים במשקל הגוף בין קבוצות תזונה אימהיות

Discussion

במהלך יישום פרוטוקול זה במעבדות מחקר, ישנן מספר הערות חשובות שחוקרים צריכים לשקול לפני תחילת הניסויים. ראשית, בייצור דיאטה, יש לתת מספיק זמן אספקה לייצור הדיאטה לפני תחילת המחקר הניסיוני. זמני האספקה יכולים להשתנות מחברה לחברה, וגם משלוח הדיאטה צריך להילקח בחשבון. נקבות עכברים בגיל הפוריו.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
1.5 mL tubes	Eppendorf
C57BL/6 Female Mice	Charles River	27	Mice can be bred in house as well.
Choline Deficient Diet	Envigo	TD.06119
Control Diet	Envigo	TD.190790
EDTA tubes
Folic Acid Deficient Diet	Envigo	TD.01546
GraphPad prism			https://www.graphpad.com/features
Housing for rodents	Lab Products, LLC	One CageVentilated Racks & Cages
Liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS)	SCIEX, Framingham, MA	5500 QTrap
Ultra-performance liquid chromatography (UPLC)	Shimadzu, Columbia, MD, USA	Nexera