A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
פרוטוקול זה מתאר את היישום של הטכניקה הכירורגית המשמשת להעברת עוברי חזירים משובטים באמצעות laparotomy בזהבים.
פרוטוקול זה נועד להדגים את הטכניקה הכירורגית להעברת עוברי חזירים משובטים לאובידוקט, שיטה הנמצאת בשימוש נרחב בייצור חזירים מהונדסים גנטית למחקר ביו-רפואי. תשעה זהובים עברו סנכרון הורמונלי ולפרוטומיה להחזרת עוברים משובטים המיוצרים על ידי העברה גרעינית של תאים סומטיים (SCNT) בשלבים של עד 4 תאים ביום השני לאובידוקט. אבחון ההריון בוצע באמצעות בדיקת אולטרסאונד 30 יום לאחר ניתוח ההעברה. שישה מתוך תשעת הזימים שנותחו הראו סימני הריון בבדיקת אולטרסאונד. עם זאת, מכיוון שלא הייתה התקדמות בהתפתחות העובר כפי שהוערכה על ידי האכוגרפיה, הזימים עברו נקרופסיה בגיל 60 יום לאיסוף החומר הביולוגי והערכת מערכת הרבייה. הידבקויות נצפו בקרני הרחם, בשחלות ובביציות. מלומן הרחם של שניים מהזהובים המורדמים, התקבלו מבנה עוברי אחד וארבעה עם גילאי הריון הנעים בין 12 ל -20 יום. למרות היעדרם של חזירונים חיים, המיוחס ככל הנראה ליעילות נמוכה של החזרת עוברי חזירים משובטים, המושפעת מגורמים שונים, כולל מספר ואיכות העוברים המוחזרים, הטכניקה הכירורגית שהוצגה הוכחה כמהירה ובטוחה.
חזירים הם מודל ניסיוני מצוין למחקר ביו-רפואי בשל הדמיון האנטומי, הפיזיולוגי והגנטי שלהם לבני אדם1. בעלי חיים אלה שימשו לעתים קרובות במחקר הקשור להשתלת קסנו, מתוך כוונה לייצר איברים, תאים או רקמות המקדמים סיכון נמוך לדחייה כאשר הם מושתלים בבני אדם. מחקר ההשתלות נועד להגדיל את אספקת האיברים להשתלה אנושית, ובכך לצמצם את רשימת ההמתנה של חולים2.
ייצור חזירים להשתלת קסנו כרוך במספר שלבים, כולל ייצור שיבוטים מתאי חזירים ערוכים גנטית. לאחר ייצור במבחנה של עוברים משובטים מהונדסים גנטית, העוברים מועברים למערכת הרבייה של זרע עם מחזור ייחום ....
מחקר זה אושר על ידי ועדת האתיקה לשימוש בבעלי חיים במחקר של המכללה לרפואה וטרינרית ומדעי בעלי חיים של אוניברסיטת סאו פאולו, פרוטוקול מספר 6088030523. תשעה זהובים בני שבעה חודשים מגרעין החזירים Água Branca, הממוקם בעיר איטו, מדינת סאו פאולו, ברזיל, שימשו מיד לאחר גילוי הייחום השני9. פרטי הריאגנטים והציוד ששימש במחקר מפורטים בטבלת החומרים.
1. הכנת בעלי חיים
מאמר זה נועד להדגים את ניתוח הלפרטומיה להחזרת עוברים משובטים לאובידוקט של זהבים. כל בעלי החיים נשארו במישור הרדמה מתאים, ללא אירועים תוך ניתוחיים או סיבוכים במהלך ההתאוששות מההרדמה. לזהובים נדרשו, בממוצע, 2-3 שעות לעמוד לאחר סיום הניתוח.
כל ההליכים הכירורג?.......
השיטה הכירורגית המתוארת בוצעה בעבר על ידי קבוצות מחקר אחרות העובדות עם ייצור חזירים משובטים או חזירים משובטים מהונדסים גנטית, עם דיווחים על לידות לאחר יישום טכניקה זו 15,16,17,18,19,20........
אף אחד מהכותבים לא חושף ניגוד עניינים כלשהו
ברצוננו להודות לבית החולים הווטרינרי לסוסים ולבית החולים הווטרינרי מעלי גירה של המכללה לרפואה וטרינרית, אוניברסיטת סאו פאולו (FMVZ / USP), סאו פאולו, ברזיל, FAPESP (מענק 2022/11459-3, קרן המחקר של סאו פאולו), EMS Pharma, CNPq (מענק 405254/2022-9), וחקלאות חזירים Água Branca, איטו, סאו פאולו, ברזיל.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.25 mL straw | generic | - | Surgical material |
1 mL syringe | Descarpack | 341001 | Surgical material |
10 mL syringe | Descarpack | 324601 | Surgical material |
20 mL syringe | Descarpack | 324801 | Surgical material |
3 mL syringe | Descarpack | 324201 | Surgical material |
5 mL syringe | Descarpack | 324401 | Surgical material |
60 mL syringe | Descarpack | 323201 | Surgical material |
9 mm endotracheal tube | Rusch | 112482-000090 | Surgical material |
Allis forceps | generic | - | Surgical instrument |
Amox LA | JA Saúde Animal | MAPA registration: 8.781/2004 | Pharmaceutical drug |
Bakhaus forceps | generic | - | Surgical instrument |
Catheter 20G | Descarpack | 362401 | Catheter for intravenous access |
Cetamin | Agener União | MAPA registration: SP-000292-5.000011 | Anesthetic |
Conductive clinical gel | RMC | ANVISA registration: 80122200013 | Surgical material |
Dipyrone D-500 | Zoetis | MAPA registration: SP0000728-46 | Pharmaceutical drug |
Disposable scalpel n. 22 | Wiltex | ANVISA registration: 10150470565 | Surgical instrument |
Disposable sterile sponge-brush | Rioquimica | 7.89778E+12 | Surgical asepsis |
Easy-Scan:Go | IMV | ESCG01 | Ultrasound |
Endozime AW Plus | Ruhof | 34514 | Detergent for surgical instruments |
Fentanil (Fentanest) | Cristália | ANVISA registration: 1029800810159 | Anesthetic |
Gosset retractor | generic | - | Surgical instrument |
Halstead-mosquito hemostatic forceps | generic | - | Surgical instrument |
Healing ointment - Unguento Pearson | Pearson SA | MAPA registration: SP0000094-16 | Pharmaceutical drug |
hydrogen peroxide solution | Rioquimica | ANVISA registration: 218690015 | Surgical material |
Isofluorane | Biochimico | ANVISA registration: 100630222 | Anesthetic |
IV Drip set extensor | generic | - | Fluid therapy |
IV Macro drip set | Descarpack | 410301 | Fluid therapy |
Lactofur (ceftiofur) | Ourofino SA | MAPA registration: SP0000051-50 | Pharmaceutical drug |
Laringoscope | - | - | Surgical instrument |
Maxicam 2% | Ourofino SA | MAPA registration: SP0000051-69 | Pharmaceutical drug |
Micropore adhesive 5 cm x 10 cm | generic | 1530 | Surgical material |
Midazolam | Hipolabor | ANVISA registration: 1134301430035 | Anesthetic |
Multi-Way IV Infusion Set | Descarpack | 413201 | Fluid therapy |
Needle 40 mm x 1.2 mm | Descarpack | 353601 | Sterile needle for applying medicines and anesthetics. |
Needle 40 mm x 1.6 mm | Wiltex | ANVISA registration: 10150470664 | Sterile needle for applying medicines and anesthetics. |
Needle holder | generic | - | Surgical instrument |
Nylon 2 suture trhead | Shalon Medical | N502CTI40 | Surgical material |
Ordinary pen | generic | - | Regular pen for taking notes |
Physiological solution 0.9% 500 mL bag | JP Farma | MS:1.0491.0070 | Fluid therapy |
Polyglycolic acid 2 suture thread | Atramat | G4099-75H | Surgical material |
Potassium chloride | Samtec | ANVISA registration: 1559200010139 | Parenteral drug |
Procedure gloves | Descarpack | 122401 | Personal Protective Equipment (PPE) |
Propofol (Provive) | União Química | ANVISA registration: 1049714490057 | Anesthetic |
Ringer lactate solution 500 mL bag | JP Farma | MS:1.0491.0061 | Fluid therapy |
Riohex 0.5% clorexidine alcohol solution | Rioquimica | 218690356 | Surgical asepsis |
Riohex 2% clorexidine solution with surfactant | Rioquimica | 218690356 | Surgical asepsis |
Scalp 21 G | Descarpack | 421201 | Surgical material |
Shoe covers | generic | - | Personal Protective Equipment (PPE) |
Sterile compresses | Cremer | ANVISA registration: 10071150065 | Surgical material |
Sterile gauze pad | Procitex | ANVISA registration: 80245210083 | Surgical material |
Sterile surgical drapes 140 cm x 90 cm | Venkuri | 7010003 | Surgical material |
Sterile surgical drapes 150 cm x 190 cm | PolarFix | F00208 | Surgical material |
Sterile surgical gloves | Mucambo | CA: 39.317 | Personal Protective Equipment (PPE) |
Stethoscope | generic | - | Surgical equipment |
Surgical cap | Descarpack | 93201 | Personal Protective Equipment (PPE) |
Surgical gown | Descarpack | 231101 | Personal Protective Equipment (PPE) |
Surgical mask | Descarpack | 110701 | Personal Protective Equipment (PPE) |
Surgical scissors blunt-blunt | generic | - | Surgical instrument |
Surgical scissors sharp-sharp | generic | - | Surgical instrument |
Surgical stapler | Tradevet | - | Surgical material |
Tekbond super glue | Tek Bond | 78072720030 | Surgical material |
Thermometer | generic | - | Surgical equipment |
Three Way Stopcock | Solidor | 374 | Surgical material |
Tramadol hydrocloride | Agener União | MAPA registration: SP-000292-5.000002 | Anesthetic |
Transparent film dressing | Skinupper | ANVISA registration: 82307460014 | Surgical material |
Waterproof adhesive 10 cm x 4.5 cm | generic | 364828 | Surgical material |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved