ניתוח החזרת עוברים באמצעות לפרוטומיה בגילטים

Summary

פרוטוקול זה מתאר את היישום של הטכניקה הכירורגית המשמשת להעברת עוברי חזירים משובטים באמצעות laparotomy בזהבים.

Abstract

פרוטוקול זה נועד להדגים את הטכניקה הכירורגית להעברת עוברי חזירים משובטים לאובידוקט, שיטה הנמצאת בשימוש נרחב בייצור חזירים מהונדסים גנטית למחקר ביו-רפואי. תשעה זהובים עברו סנכרון הורמונלי ולפרוטומיה להחזרת עוברים משובטים המיוצרים על ידי העברה גרעינית של תאים סומטיים (SCNT) בשלבים של עד 4 תאים ביום השני לאובידוקט. אבחון ההריון בוצע באמצעות בדיקת אולטרסאונד 30 יום לאחר ניתוח ההעברה. שישה מתוך תשעת הזימים שנותחו הראו סימני הריון בבדיקת אולטרסאונד. עם זאת, מכיוון שלא הייתה התקדמות בהתפתחות העובר כפי שהוערכה על ידי האכוגרפיה, הזימים עברו נקרופסיה בגיל 60 יום לאיסוף החומר הביולוגי והערכת מערכת הרבייה. הידבקויות נצפו בקרני הרחם, בשחלות ובביציות. מלומן הרחם של שניים מהזהובים המורדמים, התקבלו מבנה עוברי אחד וארבעה עם גילאי הריון הנעים בין 12 ל -20 יום. למרות היעדרם של חזירונים חיים, המיוחס ככל הנראה ליעילות נמוכה של החזרת עוברי חזירים משובטים, המושפעת מגורמים שונים, כולל מספר ואיכות העוברים המוחזרים, הטכניקה הכירורגית שהוצגה הוכחה כמהירה ובטוחה.

Introduction

חזירים הם מודל ניסיוני מצוין למחקר ביו-רפואי בשל הדמיון האנטומי, הפיזיולוגי והגנטי שלהם לבני אדם¹. בעלי חיים אלה שימשו לעתים קרובות במחקר הקשור להשתלת קסנו, מתוך כוונה לייצר איברים, תאים או רקמות המקדמים סיכון נמוך לדחייה כאשר הם מושתלים בבני אדם. מחקר ההשתלות נועד להגדיל את אספקת האיברים להשתלה אנושית, ובכך לצמצם את רשימת ההמתנה של חולים².

ייצור חזירים להשתלת קסנו כרוך במספר שלבים, כולל ייצור שיבוטים מתאי חזירים ערוכים גנטית. לאחר ייצור במבחנה של עוברים משובטים מהונדסים גנטית, העוברים מועברים למערכת הרבייה של זרע עם מחזור ייחום ....

Protocol

מחקר זה אושר על ידי ועדת האתיקה לשימוש בבעלי חיים במחקר של המכללה לרפואה וטרינרית ומדעי בעלי חיים של אוניברסיטת סאו פאולו, פרוטוקול מספר 6088030523. תשעה זהובים בני שבעה חודשים מגרעין החזירים Água Branca, הממוקם בעיר איטו, מדינת סאו פאולו, ברזיל, שימשו מיד לאחר גילוי הייחום השני⁹. פרטי הריאגנטים והציוד ששימש במחקר מפורטים בטבלת החומרים.

1. הכנת בעלי חיים

1. מהר את בעלי החיים במשך 12 שעות והגביל את הגישה למים במשך 4 שעות לפני ההליך הכירורגי.
2. באמצעות מחט 40 מ"מ x 12 מ"מ, לצייר 10 מ"ג / ק"ג של קטמין ו 0.2 מ"ג / ק"ג של midazolam באותו מז....

תוצאות

מאמר זה נועד להדגים את ניתוח הלפרטומיה להחזרת עוברים משובטים לאובידוקט של זהבים. כל בעלי החיים נשארו במישור הרדמה מתאים, ללא אירועים תוך ניתוחיים או סיבוכים במהלך ההתאוששות מההרדמה. לזהובים נדרשו, בממוצע, 2-3 שעות לעמוד לאחר סיום הניתוח.

כל ההליכים הכירורג?.......

Discussion

השיטה הכירורגית המתוארת בוצעה בעבר על ידי קבוצות מחקר אחרות העובדות עם ייצור חזירים משובטים או חזירים משובטים מהונדסים גנטית, עם דיווחים על לידות לאחר יישום טכניקה זו 15,16,17,18,19,20.^.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.25 mL straw	generic	-	Surgical material
1 mL syringe	Descarpack	341001	Surgical material
10 mL syringe	Descarpack	324601	Surgical material
20 mL syringe	Descarpack	324801	Surgical material
3 mL syringe	Descarpack	324201	Surgical material
5 mL syringe	Descarpack	324401	Surgical material
60 mL syringe	Descarpack	323201	Surgical material
9 mm endotracheal tube	Rusch	112482-000090	Surgical material
Allis forceps	generic	-	Surgical instrument
Amox LA	JA Saúde Animal	MAPA registration: 8.781/2004	Pharmaceutical drug
Bakhaus forceps	generic	-	Surgical instrument
Catheter 20G	Descarpack	362401	Catheter for intravenous access
Cetamin	Agener União	MAPA registration: SP-000292-5.000011	Anesthetic
Conductive clinical gel	RMC	ANVISA registration: 80122200013	Surgical material
Dipyrone D-500	Zoetis	MAPA registration: SP0000728-46	Pharmaceutical drug
Disposable scalpel n. 22	Wiltex	ANVISA registration: 10150470565	Surgical instrument
Disposable sterile sponge-brush	Rioquimica	7.89778E+12	Surgical asepsis
Easy-Scan:Go	IMV	ESCG01	Ultrasound
Endozime AW Plus	Ruhof	34514	Detergent for surgical instruments
Fentanil (Fentanest)	Cristália	ANVISA registration: 1029800810159	Anesthetic
Gosset retractor	generic	-	Surgical instrument
Halstead-mosquito hemostatic forceps	generic	-	Surgical instrument
Healing ointment - Unguento Pearson	Pearson SA	MAPA registration: SP0000094-16	Pharmaceutical drug
hydrogen peroxide solution	Rioquimica	ANVISA registration: 218690015	Surgical material
Isofluorane	Biochimico	ANVISA registration: 100630222	Anesthetic
IV Drip set extensor	generic	-	Fluid therapy
IV Macro drip set	Descarpack	410301	Fluid therapy
Lactofur (ceftiofur)	Ourofino SA	MAPA registration: SP0000051-50	Pharmaceutical drug
Laringoscope	-	-	Surgical instrument
Maxicam 2%	Ourofino SA	MAPA registration: SP0000051-69	Pharmaceutical drug
Micropore adhesive 5 cm x 10 cm	generic	1530	Surgical material
Midazolam	Hipolabor	ANVISA registration: 1134301430035	Anesthetic
Multi-Way IV Infusion Set	Descarpack	413201	Fluid therapy
Needle 40 mm x 1.2 mm	Descarpack	353601	Sterile needle for applying medicines and anesthetics.
Needle 40 mm x 1.6 mm	Wiltex	ANVISA registration: 10150470664	Sterile needle for applying medicines and anesthetics.
Needle holder	generic	-	Surgical instrument
Nylon 2 suture trhead	Shalon Medical	N502CTI40	Surgical material
Ordinary pen	generic	-	Regular pen for taking notes
Physiological solution 0.9% 500 mL bag	JP Farma	MS:1.0491.0070	Fluid therapy
Polyglycolic acid 2 suture thread	Atramat	G4099-75H	Surgical material
Potassium chloride	Samtec	ANVISA registration: 1559200010139	Parenteral drug
Procedure gloves	Descarpack	122401	Personal Protective Equipment (PPE)
Propofol (Provive)	União Química	ANVISA registration: 1049714490057	Anesthetic
Ringer lactate solution 500 mL bag	JP Farma	MS:1.0491.0061	Fluid therapy
Riohex 0.5% clorexidine alcohol solution	Rioquimica	218690356	Surgical asepsis
Riohex 2% clorexidine solution with surfactant	Rioquimica	218690356	Surgical asepsis
Scalp 21 G	Descarpack	421201	Surgical material
Shoe covers	generic	-	Personal Protective Equipment (PPE)
Sterile compresses	Cremer	ANVISA registration: 10071150065	Surgical material
Sterile gauze pad	Procitex	ANVISA registration: 80245210083	Surgical material
Sterile surgical drapes 140 cm x 90 cm	Venkuri	7010003	Surgical material
Sterile surgical drapes 150 cm x 190 cm	PolarFix	F00208	Surgical material
Sterile surgical gloves	Mucambo	CA: 39.317	Personal Protective Equipment (PPE)
Stethoscope	generic	-	Surgical equipment
Surgical cap	Descarpack	93201	Personal Protective Equipment (PPE)
Surgical gown	Descarpack	231101	Personal Protective Equipment (PPE)
Surgical mask	Descarpack	110701	Personal Protective Equipment (PPE)
Surgical scissors blunt-blunt	generic	-	Surgical instrument
Surgical scissors sharp-sharp	generic	-	Surgical instrument
Surgical stapler	Tradevet	-	Surgical material
Tekbond super glue	Tek Bond	78072720030	Surgical material
Thermometer	generic	-	Surgical equipment
Three Way Stopcock	Solidor	374	Surgical material
Tramadol hydrocloride	Agener União	MAPA registration: SP-000292-5.000002	Anesthetic
Transparent film dressing	Skinupper	ANVISA registration: 82307460014	Surgical material
Waterproof adhesive 10 cm x 4.5 cm	generic	364828	Surgical material