מודל חולדה של עיצוב לב ימני והפרעות קצב באמצעות רצועות עורק ריאתי

Summary

אי ספיקת לב ימנית (RHF) מאופיינת בהתרחבות לב בצד ימין והיפרטרופיה, מה שמוביל לתקלה בחדרים ובפרוזדורים. מחלות לב-ריאה הקשורות ל-RHF מלוות בסיכון מוגבר להפרעות קצב לב. מאמר זה מתאר מודל סטנדרטי של RHF המושרה על ידי רצועות עורק ריאתי הקשור להפרעות קצב חדריות ופרוזדוריות משופרות.

Abstract

מצבים קליניים, כולל מחלת ריאות חסימתית כרונית או יתר לחץ דם עורקי ריאתי (PAH), עלולים להוביל לעומס לחץ כרוני בחדר ימין ואי ספיקת לב ימנית מתקדמת (RHF). ניתן לזהות RHF על ידי היפרטרופיה לבבית בצד ימין והתרחבות הקשורה לתפקוד שריר הלב חריג המשפיע על RV ואטריום ימין (RA). לאחרונה הדגמנו כי RHF חמור מלווה בסיכון מוגבר לדלקת פרוזדורים, פיברוזיס פרוזדורים ופרפור פרוזדורים (AF), הסוג הנפוץ ביותר של הפרעות קצב לב (CA). מחקרים אחרונים הראו כי דלקת RV ו- RA ממלאת תפקיד חשוב בהפרעות קצב של CA, כולל AF. עם זאת, ההשפעה של דלקת בהתפתחות CA ו- AF ב- RHF מתוארת בצורה גרועה.

מודלים ניסיוניים של RHF נדרשים כדי להבין טוב יותר את הקשר בין דלקת שריר הלב בצד ימין לבין CA. מודל החולדה של יתר לחץ דם ריאתי המושרה על ידי מונוקרוטלין (MCT) מבוסס היטב כדי לעורר RHF. עם זאת, MCT גורם לרעילות פנאומו חמורה ולדלקת ריאות. לפיכך, RHF המושרה על ידי MCT אינו עוזר להבחין אם דלקת שריר הלב הבאה נובעת מ- RHF כשלעצמו או מאותות דלקתיים המופרשים על ידי הריאה הפגועה.

במאמר זה, שיטה מכנית המערבת רצועות גזע עורק ריאתי (PAB) שימשה לעורר הפרעות קצב לב בצד ימין. PAB מורכב ביצוע תפר קבוע של גזע עורק הריאה במשך 3 שבועות. גישה כזו יוצרת עומס יתר מוגבר בצד ימין. ב- D21 post-PAB, התפר גורם ל- RV ו- RA היפרטרופיים, מורחבים ומודלקים. ה-RHF המושרה על-ידי PAB מלווה גם בפגיעות להפרעות קצב חדריות ופרוזדוריות, כולל AF.

Introduction

אי ספיקת לב ימנית (RHF) מאופיינת בהיפרטרופיה והרחבה של החדר הימני (RV) והפרוזדורים (RA), מה שמוביל לתקלה לבבית בצד ימין בתגובה לעומס לחץ RV כרוני עקב התכווצות עורקי הריאה (PA)¹. לפיכך, תנאים המעוררים את היצרות הרשות הפלסטינית יכולים להיות אחראים לסיכון מוגבר של RHF 1,2,3,4. נתונים קליניים הראו כי RHF הוא הגורם העיקרי לאשפוז (56%) בחולים עם יתר לחץ דם PA (PAH)². מחקרים קליניים הראו כי ללא תלות בגורם ל- PAH, כולל יתר לחץ דם ריאתי טרומבואמבולי (PH) ו- PAH אידיופתי, חולים מושפעים לעתים קרובות מ- RHF והם רגישים יותר ב -20% לפתח הפרעות קצב לב כולל טכיאריתמיות על-חדריות ופרפור פרוזדורים (AF)^2,5,6.

כדי להבין טוב יותר את הקשר בין PAH ל-RHF, מחקרים בבעלי חיים, כולל המודל של מנה אחת של מונוקרוטלין (MCT), שימשו כדי לעורר דלקת ריאות חמורה ו-RHF ^7,8. לאחרונה ראינו כי RHF המושרה על-ידי MCT נקשר לדלקת RA ול-AF⁹. עם זאת, בשל החשיבות של דלקת ריאות הנגרמת על ידי MCT וציטוקינים במחזור, היה קשה לתאר אם דלקת RA הנגרמת על ידי MCT היא תוצאה של RHF^{רק 9}. לפיכך, נדרש מודל חדש של הפרעות קצב לב המושרות על ידי RHF כדי לחקור את המצב הדלקתי של RA.

המודל הניסיוני PAB (ראשי תיבות של PA trunk banding) שימש במינים שונים של בעלי חיים כדי לחקות מחלות חסימתיות של הרשות הפלסטינית וכדי לחקור את העיצוב מחדש הפתולוגי הקשור ללב המשפיע על הצד הימני של הלב¹⁰. PAB דווח כשיטה יעילה לגרימת תפקוד לקוי וכישלון של RV ימין במחקרים שונים המחקים עומס יתר של RV 10,11,12,13,14,15,16. מבחינה טכנית, PAB הוא מיקום של תפר קבוע על תא המטען של הרשות הפלסטינית, מה שגורם להפחתה מכנית של קוטר תא המטען של הרשות הפלסטינית¹⁰. PAB יוצר עומס יתר מוגבר על RV¹⁰. ראשית, כהסתגלות מפצה לעלייה הפתאומית בעומס הלוואי של הקרוואנים, חלל הקרוואן מורחב, מה שמוביל להיפרטרופיה כרונית של RV^10,13. התרחבות RV והיפרטרופיה משפיעות על השסתומים הטריקוספידים, שהופכים לדליפה¹³. ליתר דיוק, ההתרחבות הבולטת של ה- RV בשילוב עם עומס לוואי גבוה של RV משפיעה על מתיחה של טבעת המסתם הטריקוספיד הממוקם בין ה- RV לבין ה- RA^13,17. בשל חסימה חלקית של השסתום, חלק מהדם הנפלט מה- RV במהלך הסיסטולה יופנה לכיוון חלל RA¹⁷. דליפה של המסתם הטריקוספיד ניתן לראות באמצעות אקוקרדיוגרפיה והוא נקרא tricuspid regurgitation¹⁷. לאחר מכן, RA מקבל לחץ דם גבוה באופן בלתי הולם, תורם התרחבות מוגברת RA היפרטרופיה¹³. השיפוץ הכרוני של RV ו-RA מלווה בתגובות דלקתיות מקומיות של שריר הלב המובילות לפיברוזיס RV ו-RA ולאובדן תפקוד ^9,13. פיברוזיס לבבי מאופיין בהתפתחות אזורי מתח נמוך שהם פחות מכווצים ורגישים יותר לחסימת הולכה מעוררת ומעגלי כניסה חוזרת המעורבים בהתפתחות הפרעות קצב לב, כולל פרפור חדרים ו- AF^18,19.

המקוריות של מאמר זה טמונה בשימוש בשיטה סטנדרטית של עיצוב מחדש של לב צד ימין המושרה על ידי PAB כדי לעורר ולחקור השראת הפרעות קצב לב תוך 3 שבועות לאחר PAB. היתרונות העיקריים של גישה כירורגית זו הם: i) שליטה ישירה על הקטנת קוטר תא המטען של הרשות הפלסטינית ו-ii) הימנעות מדלקת ריאות כדי להתמקד בדלקת שריר הלב הנגרמת על ידי RHF לחקר הפרעות קצב לב, כולל AF.

הגישה המתוארת כאן כוללת הליך מיקרוכירורגי מדויק ליצירת PAB, הערכה של עומס יתר מוגבר של קרוואנים, אקוקרדיוגרפיה לצפייה בתכנון מחדש מבני ותפקודי של שריר הלב הנגרם על ידי PAB, ומחקר אלקטרופיזיולוגי להערכת פגיעות להפרעות קצב לב, כולל AF.

Protocol

כל ההליכים המתוארים להלן אושרו על ידי ועדת האתיקה של מכון הלב של מונטריאול (מספרי פרוטוקולים: 2021-2938-2021-47-01 ו-2024-3412-2024-48-01) ועקבו בקפדנות אחר הנחיות המועצה הקנדית לטיפול בבעלי חיים (CCAC). חולדות וויסטאר זכרים (225-275 גרם) בגילאי 6-8 שבועות שימשו להליכים. כל בעלי החיים שוכנו במתקן לטיפול בבעלי חיים של מכון הלב של מונטריאול, עם גישה חופשית למים ולמזון.

1. הכנה טרום ניתוחית

1. יש לעקר את כל המכשירים והחומרים הכירורגיים לפני הניתוח באמצעות אוטוקלאבה של קיטור רווי בלחץ גבוה בטמפרטורות שבין 121°C ל-134°C תחת 15-30 psi למשך 30-40 דקות ולאחר מכן מחזור ייבוש של 25 דקות.
2. הכינו את כל כמויות התרופות הדרושות לניתוח. השתמש בגישה משככת כאבים רב-מודאלית הכוללת buprenorphine (0.05 מ"ג / ק"ג) ו ketoprofen (5 מ"ג / ק"ג) מוזרק תת עורית 30 דקות לפני הניתוח וחוזר על עצמו ב 6 שעות (buprenorphine) ו 24 שעות לאחר הניתוח (buprenorphine ו ketoprofen). בנוסף, לבצע שיכוך כאבים מקומי באתר החתך (לידוקאין 5 מ"ג / מ"ל).
3. בצע אקוקרדיוגרפיה טרנס-חזה בסיסית לפני הניתוח (ראה הליך מפורט לאקוקרדיוגרפיה טרנס-חזה בשלבים 6.1-6.13.) כדי לקבוע את קוטר הרשות הפלסטינית ולבחור את מחט המד המתאימה שתשמש כקצה חוט ליצירת הפחתה צפויה של 60% בקוטר הרשות הפלסטינית במהלך PAB.
   הערה: במאמר זה נעשה שימוש בחולדות ויסטאר זכריות של 225-275 גרם, והשימוש במחט של 19 גרם היה מתאים כדי ליצור הפחתה כזו של 60% בקוטר הרשות הפלסטינית.
4. הכינו מחט של 19 גרם (או הקליבר המתאים כפי שנקבע בשלב 1.3) שתשמש כעופרת (ראו להלן: שלבים 4.18 ו-4.19) כדי להשיג התכווצות אופטימלית של תא המטען של הרשות הפלסטינית, מה שיגרום לשיפוץ חמור של לב החולדה. בעזרת מלקחיים, כופפו את 19 G ל-90-110° (איור 1A).
   הערה: כיפוף 19 G מקל א) על המיקום ליד תא המטען של הרשות הפלסטינית ו-ב) יישום הקשירה במהלך ההליך. ה-19 גרם משמש כעופרת שסביבה יותקן התפר להקטנת קוטר הרשות הפלסטינית ל-1.0 מ"מ (הפחתה של 60% לחולדות השוקלות 225-275 גרם), מה שגורם לעומס יתר משמעותי בלחץ הקרוואנים האחראי לשיפוץ קרוואנים חמור תוך 3 שבועות.

2. השראת הרדמה והכנת בעלי חיים

הערה: הניתוחים בוצעו על חולדות Wistar זכרים (225-275 גרם) בגילאי 6-8 שבועות. השתמש בכרית חימום במהלך כל השלבים של ההליכים הבאים כדי לשמור על טמפרטורת הגוף של בעל החיים סביב 37 ° C. החל בדיקה רקטלית כדי לפקח על טמפרטורת הגוף.

1. מרדימים את בעל החיים עם איזופלורן בשאיפה רציפה 3% ו-100% חמצן 2-3 ליטר/דקה.
2. יש למרוח ג'ל סיכה לעיניים כדי להגן על הקרנית מפני התייבשות.
3. ודא את רמת ההרדמה באמצעות רפלקס צביטת הבוהן.

3. אינטובציה

הערה: אינטובציה בוצעה כמתואר²⁰.

1. העבירו את בעל החיים לתחנת אינטובציה משופעת במצב שכיבה. החזיקו את החולדה על ידי החותכות העליונות באמצעות לולאה של חוט כדי לשמור על הגוף במצב תלוי ב 45 ° כדי לקבל הדמיה טובה יותר של הגרון.
2. כוונו מקור אור גמיש למשטח הצוואר כדי להאיר דרך אזור הלוע.
3. האריכו את הלשון באמצעות צמר גפן וייצבו אותה על המקסילה בעזרת מרית שקילה מעוקלת כמדכא לשון.
4. דמיינו את קנה הנשימה ואת מיתרי הקול.
5. השתמש באנגיוקטטר 16 G כדי לבצע את האינטובציה. השתמש בצנתר כצינור קנה הנשימה, והקהה את המחט המשופעת כדי להשתמש בה כמציג.
6. הקדמו את הצינור האנדוטרכאלי (16 G angiocatheter) המורכב על המחט המשופעת לתוך קנה הנשימה, ולאחר מיקומו, הסירו את הצינור (איור 1B).
7. אשרו את המיקום הנכון של הצינור על ידי התבוננות בדפוס נשימה רגיל (כ-80 נשימות לדקה עבור חולדות במשקל 225 גרם וכ-70 נשימות לדקה עבור חולדות במשקל 275 גרם) ונוכחות ערפל על פני מרית המתכת (או המראה הקטנה) כאשר הונחו באוגן של רכזת הקנולה.
8. לאחר אינטובציה נכונה, להעביר במהירות את החיה לתחנת הניתוח שכיבה מעל כרית חימום הומאורמית.
9. התאימו את נפח וקצב הגאות של מכונת ההנשמה בהתאם למשקל הגוף של החולדה. חולדות בסביבות 225-275 גרם מקבלות נפח גאות של 2.0-2.5 מ"ל ו-70-80 נשימות לדקה עם מכונת ההנשמה.
10. חבר את הצינור האנדוטרכאלי למכונת ההנשמה כדי להתחיל אוורור מכני. הניחו את קצה הזרימה של מכונת ההנשמה לתוך גליל מים. בועות האוויר היוצאות מהזרם לאחר כל נשימה מעידות על אינטובציה מוצלחת.
11. לאחר קביעת נשימה יציבה, אבטח את הצינור האנדוטרכאלי באמצעות סרט כירורגי וקבע את הבדיקה הרקטלית לאורך הזנב כדי לפקח על טמפרטורת הגוף.

איור 1: מכשירים מרכזיים הדרושים להכנת ההליך המיקרוכירורגי של PAB. (A) מחט 19 G שונה המשמשת כעופרת לקבלת קוטר 1 מ"מ של תא המטען של הרשות הפלסטינית לאחר PAB. (B) כלים אנדוטרכאליים המשמשים או אינטובציה מוצלחת של חולדות. 1. המרית משמשת כמדכא לשון על חולדות מורדמות כדי לחשוף את קנה הנשימה. 2. צנתר 16G פועל כצינור אנדוטרכאלי לאחר הקהות קצה החרט שלו. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

4. ניתוח PAB (איור 2)

הערה: כל ההליכים חייבים להתבצע על פי טכניקות ניתוח אספטיות קפדניות.

1. יש לגלח את הצד השמאלי של בית החזה באמצעות קוצץ וקרם מסיר שיער ולהכין את העור עם מריחה של 2% כלורהקסידין ואחריו פילינג 70% אלכוהול (חוזר על עצמו שלוש פעמים).
2. לשתק את הגפיים הקדמיות במצב פתוח עם סרט רפואי, תוך הקפדה לא להאריך יתר על המידה את הגפיים כדי למנוע השפעה על הנשימה.
3. משוך את הגפה האחורית הימנית מעט כלפי מטה וקבע אותה לאורך הזנב.
4. האריכו וקשרו את הגפה האחורית השמאלית וקיבעו אותה לצד ימין של החיה כדי ליצור תנוחה צדדית ימנית קלה, תוך חשיפת הצד השמאלי של החזה.
5. השתמש בכפפות סטריליות בשלב זה בחלק הנותר של הניתוח.
6. מקמו וילון סטרילי מעל בעל החיים ובצעו חתך עור של 2-3 ס"מ בצד שמאל של בית החזה, החל מכ-2 ס"מ מעל תהליך הקסיפואיד ובכיוון אלכסוני לכיוון בסיס הגפה הקדמית השמאלית של החולדה.
7. מתחת לעור, להפריד את שרירי החזה לאחר מכן (pectoralis minor ו major) ולהזיז אותם הצידה על ידי דיסקציה קהה באמצעות מספריים עגולים. השתמש retractors מגנטיים להחזיק את השרירים, כדי לאפשר הדמיה נכונה של כלוב הצלעות הממוקם מתחת.
8. נטרל את ניפוח הריאות על ידי הסרת צינור הזרימה (המחובר למכונת ההנשמה) מגליל המים (ראה שלב 3.10). הסרת צינור היציאה מהמים מורידה את הלחץ לריאות, מה שיוצר את דה-ניפוח של האונות.
9. בצע כריתת בית החזה בצד שמאל עם מלקחיים מנתחים מעוקלים. חורר חור קטן בקו האמצעי-קלאוויקולרי של השריר הממוקם בין הצלעות^{ה-3 וה-4} .
10. הכניסו את המלקחיים המעוקלים לפתח והחליקו אותו לאורך הקיר הפנימי השמאלי של השריר בין שתי הצלעות כדי להרים מעט את דופן בית החזה השמאלי ולהימנע מלגעת בריאות בזמן חיתוך השריר.
11. השתמש במלקחיים שהוכנסו כמדריך ובצע חתך אורכי לצלעות על כ 1 ס"מ עם מספריים הקשתית. שמרו על דופן בית החזה השמאלית מורמת והפעילו את המספריים בזהירות כדי למנוע פגיעה באונות הריאה השמאלית ישירות מתחת.
12. הרחב את החתך intercostal ל 1-2 ס"מ משמאל לחיה באמצעות מספריים עגול קצה.
13. מקם מחדש את המחזירים מתחת לצלעות כדי לשמור על הפצע פתוח.
14. שימו לב לחלק התחתון של בלוטת התימוס ולחלק מהאונה השמאלית של הריאה.
15. דחקו הצידה את בלוטת התימוס והריאות ברמה זו, בהתחשב במקום המשמעותי שתפוס על ידי איברים אלה. יש להפריד את אונות בלוטת התימוס באמצעות דיסקציה קהה בעזרת מלקחיים ולהחזיק את הריאה בצד שמאל באמצעות גזה רטובה. לאחר מכן, לחשוף את החלק העליון של הלב, אטריום שמאל (LA), כמו גם את תא המטען הריאתי, ואת קשת אבי העורקים.
16. יש לנתח בזהירות את השכבה הדקה של קרום הלב המכסה את הלב באזור זה, יחד עם כל רקמת שומן מחוברת, כדי לסייע באיתור החלק שבו אבי העורקים וגזע הריאה עדיין מחוברים. לנתח באופן מינימלי את קרום הלב ולהימנע מלגעת בקרום pleural.
17. הכניסו את המלקחיים המעוקלים במצב סגור ברווח שבין התוספתן של LA לבין תא המטען הריאתי, באמצע החלק הנראה של כלי השיט, כדי להגיע לצד השני של כלי הדם (איור 2A).
    אזהרה: הימנע מעבודה קרוב מדי לשורש אבי העורקים של הלב כדי למנוע את הסיכון של קרע כלי דם ודימום.
18. דמיינו את קצה המלקחיים דרך קרום הלחמית באופן גולגולתי אל תא המטען הריאתי. השתמשו במלקחיים השנייה כדי לנתח את הקצה ונקבו בזהירות את הממברנה כדי ליצור פתח קטן. לאחר מכן פותחים מעט את המלקחיים המעוקלים הממוקמים מתחת לגזע הריאתי על מנת לתפוס חוט משי 5-0. משכו את המלקחיים כדי להעביר את החוט מצד אחד לצד השני של גזע הריאה (איור 2B, C).
19. בצע את התכווצות של תא המטען הריאתי. ראשית, תרגלו קשר כפול רופף של משי 5-0 קרוב לעורק. הכנס את מחט 19 G לאורך כלי הדם ומתחת לחוט. הדקו את הקשר הראשון הזה ועקבו אותו עם קשר שני פשוט לפני שתסירו את 19 הגרם (איור 2D).
    זהירות: יש לפעול במהירות ובזהירות כדי למזער את משך החסימה המוחלטת של תא המטען הריאתי.
20. בצעו קשר פשוט אחרון וחתכו את חוט המשי הנותר 5-0 במרחק של כ-0.5-1 ס"מ מהקשר (איור 2D).
21. מקמו מחדש את אונות בלוטת התימוס והסירו את מסירי החזה.
22. לנפח מחדש את הריאות על ידי צביטה של זרימת ההנשמה במשך 2 שניות.
23. סגור את כלוב הצלעות על ידי ביצוע תבנית תפר צולב עם חוט תפר סינתטי נספג 5-0.
24. יש למרוח כמה טיפות של 0.9% מי מלח על אזור הפצע ולדחוס כל צד של דופן בית החזה כדי להסיר בועות אוויר ולבסס מחדש את הלחץ השלילי של בית החזה.
25. מקם מחדש את שרירי החזה ונגב את המלח הנותר עם גזה סטרילית.
26. השתמש מזרק כדי להחיל גוש התזה של לידוקאין על פני השטח ואת האזור שמסביב של הפצע.
27. סגור את העור באמצעות חוט תפר סינתטי נספג 5-0 עם מחט בתבנית תת עורית רציפה.
    הערה: חולדות דאם מקבלות את אותו הליך ללא שלבים 4.18 ו-4.19.

איור 2: הליך PAB ותיקוף של תפר משי 5.0 לעומת אטבי מתכת. צילום של הבידוד והקשירה שלב אחר שלב של גזע הרשות הפלסטינית, המראה (א) את האקספוזיציה והבידוד של תא המטען של הרשות הפלסטינית, (ב) את מיקום התפר (משי 5.0) סביב תא המטען של הרשות הפלסטינית, (ג) את הקשירה של PAB (שימוש במחט 19 G כעופרת); (D) אימות תנועת הלב ועומס יתר של שורש PA ו-RV בעקבות PAB; (E) השוואה של PAB המבוצע עם תפר משי לעומת אטב מתכת; ו-(F) אימות הבחירה בתפר משי עבור PAB ליצירת קוטר ניתן לשחזור יותר של 1 מ"מ סביב תא המטען של הרשות הפלסטינית. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

5. התאוששות לאחר הניתוח

1. הסר את האיזופלורן תוך שמירה על החולדה תחת אוורור מכני עם זרימת חמצן בלבד. סובבו את החולדה על צדה הימני או הגחוני כדי להקל על הנשימה.
2. הזריקו נפח של 0.9% מלוחים תת עורית לאזור הצוואר הגבי כדי לקדם התאוששות נוזלים (מחושב כ-10 מ"ל/ק"ג/שעה של הרדמה).
3. לאחר אישור נשימה אוטונומית, להסיר בצורה חלקה את הצינור האנדוטרכאלי.
4. שימו לב מתי החולדה מתחילה לנוע מעצמה והעבירו את החיה מכרית החימום לכלוב סטרילי חדש להתאוששות. לספק מים ומזון רטוב ad libitum.
5. במהלך התקופה שלאחר הניתוח (4-6 שעות), הניחו את הכלוב מעל כרית חימום (מחצית הכלוב) כדי לסייע בשמירה על טמפרטורת הגוף ולעקוב מקרוב אחר החיה.
6. טפל מיד בכל סימן של כאב, קשיי נשימה או התנהגות חריגה.
7. בטיפול שלאחר הניתוח, 6 שעות לאחר הניתוח, להזריק מנה שנייה של 0.05 מ"ג / ק"ג buprenorphine. למחרת, 24 שעות לאחר הניתוח, להזריק מנה שלישית של 0.05 מ"ג / ק"ג buprenorphine ומנה שנייה של 5 מ"ג / ק"ג ketoprofen.
8. עקוב אחר החולדות עד להחלמה הבריאותית המלאה שלהן.

6. אקוקרדיוגרפיה טרנס-חזה

הערה: מאמר זה מציג נתונים שהתקבלו ביום ה -21 לאחר הניתוח, כאשר החולדות היו נתונות לאקוקרדיוגרפיה טרנס-חזה. עם זאת, בהתאם למטרות המחקר ולדרישות תכנון המחקר, החוקרים יכולים להגדיר נקודות זמן אחרות עבור אקוקרדיוגרפיה טרנס-חזה לפני ואחרי PAB.

1. בצע אקוקרדיוגרפיה טרנס-חזה בסיסית לפני הניתוח כדי לקבוע את קוטר הרשות הפלסטינית ולבחור את מחט המד המתאימה המשמשת כעופרת כדי ליצור את ההפחתה הצפויה של 60% בקוטר הרשות הפלסטינית במהלך PAB.
   הערה: במחקר זה נעשה שימוש בחולדות Wistar זכרים של 225-275 גרם והשימוש במחט של 19 גרם היה מתאים כדי ליצור הפחתה כזו של 60% בקוטר הרשות הפלסטינית.
2. לשקול ולהרדים את החולדות עם איזופלורן בשאיפה רציפה (3% ו-2 ליטר/דקה O₂).
3. בצע אקוקרדיוגרפיה טרנס-חזה על כל בעל חיים באמצעות סקטור 12S / בדיקה מרובת אלמנטים (4.5-11.5 MHz) ומערכת רכישת תמונה.
4. השתמש במיפוי צבע בתצוגה דו-ממדית (2D) של ציר קצר על-ידי מיקום הגשושית 12S ברמה של שסתום אבי העורקים. לחץ על כפתור Color Doppler במכשיר ההד כדי לדמיין את דפוס זרימת הדם החוצה את אזור רצועת עורק הריאה (PAB) בגזע הריאתי.
5. בצע דופלר גל רציף (CW) על ידי חציית PAB מונחה על ידי מיפוי צבע בתצוגת הציר הקצר הפארסטרנלי הדו-ממדי כדי לרשום את תכונות זרימת הדם החוצה את אזור ה- PAB, כולל מהירות השיא (cm/s) ושיפוע הלחץ הממוצע (mmHg). כדי לקבל את עקומות דופלר, להתאים את נפח הדגימה ברמה של פסים עורק ריאתי.
6. החל תצוגה אפית דו-ממדית בת 4 חדרים על ידי מיקום בדיקת 12S ברמת קודקוד הלב כדי להדגים את הגדלת ה- RA וה- RV לאחר הניתוח ולקבוע את הממד האופקי RA בקצה סיסטולת הלב (RADs) המבוטאת במילימטרים (מ"מ).
7. החל מיפוי צבע בתצוגה דו-ממדית אפית בת 4 תאים כדי לחשוף רגורגיטציה טריקוספידית עקב PAB על ידי רכישת לולאות cine במכונת ההד.
8. בצע אקוקרדיוגרפיה M-Mode במבט אפיקלי 4 חדרים על ידי חציית החיבור של הטבעת הטריקוספידית והקיר הצידי RV כדי לחקור את הטיול הסיסטולי של מישור הטבעת הטריקוספידית (TAPSE) המתבטא במ"מ.
9. השתמש ב - Tissue Doppler Imaging (TDI) בתצוגה אפית בת 4 חדרים ברמת הצמידות של טבעת הטריקוספיד והקיר הצידי RV למדידת התכווצות סיסטולית של דופן RV צידית (Sr) המבוטאת בסנטימטרים לשנייה (cm/s) כדי להעריך את הביצועים הסיסטוליים של RV.
10. הקלט זרימה טרנס-טריקוספידית דיאסטולית (TTF) באמצעות דופלר גל פועם במבט אפיקלי בן 4 תאים כדי לחקור תכונות דיאסטוליות של RV, כולל מהירות שיא בגל המילוי המוקדם (E), גל מילוי פרוזדורים (A) והיחס בין E/A ב- TTF.
11. בצע אקוקרדיוגרפיה M-Mode במבט על הציר הארוך הפארסטרנלי ברמת המסתם האאורטלי כדי למדוד את מערכת זרימת ה- RV בקצה דיאסטולת הלב (RVOT, מבוטא במילימטרים) ואת ממד האטריום השמאלי בקצה סיסטולת הלב (LADs, מבוטא במילימטרים).
12. ביצוע אקוקרדיוגרפיה דו-ממדית M-Mode במבט פרסטרנלי קצר ציר ברמה של שרירים פפילריים כדי להעריך את ממדי LV בקצה הסיסטולה והדיאסטולה (LVDs ו- LVDd); ועובי הדופן הקדמית של LV בקצה הדיאסטולה (LVAWd), כולם באים לידי ביטוי במילימטרים.
13. בצע מצב M דו-ממדי בתצוגה פרסטרנלית של ציר קצר כדי לקבוע קיצור שבר LV (LVFS, מבוטא באחוזים) ומקטע פליטת LV (LVEF, מבוטא באחוזים).

7. מחקר אלקטרופיזיולוגי (איור 3)

1. שמור על החולדות תחת הרדמה לאחר אקוקרדיוגרפיה in vivo עבור מחקר אלקטרופיזיולוגי transesophageal in vivo (EPS).
2. הכניסו את אלקטרודות האק"ג מתחת לעור של החולדות (1 ליד הגפה הקדמית השמאלית, 1 ליד הגפה האחורית הימנית ו-1 ליד הגפה האחורית השמאלית).
3. הכניסו בעדינות צנתר 4F-Quadripolar עם מרחק בין-קוטבי של 5 מ"מ לתוך הוושט (איור 3A).
4. התאימו את מיקום הצנתר הטרנס-וושט קרוב ל-RA על-ידי קביעה מדויקת מתי גל P, המייצג התכווצויות פרוזדורים באק"ג פני השטח, תואם לגל P המתקבל עם האק"ג של הצנתר הטרנס-וושט (איור 3A, B).
5. קבע את סף הגירוי עבור כל חיה. סף זה הוא המתח המינימלי שבו הממריץ משפיע ישירות על קצב הלב.
6. הערך את פגיעות המיקוד האוטומטי על-ידי החלת פרץ מתח שווה ערך לפי 4 ממתח הסף בהתאם לפרוטוקול של 3 סטים של 12 פרצי גירוי, שכל אחד מהם נמשך 3 שניות ב-50 הרץ, ולאחר מכן 2 שניות מנוחה (דקה אחת לסט). בין כל סט, לחולדות הייתה תקופת מנוחה של דקה^{אחת 9,13,21}.
7. לזהות ולכמת, לאחר כל פרץ, את התרחשות של טכיאריתמיות לב, כולל AF או רפרוף פרוזדורים.
   הערה: מיקוד אוטומטי מוגדר כפעימות פרוזדורים לא סדירות ואולטרה-מהירות (>800 פעימות לדקה). רפרוף פרוזדורים מוגדר כמקצב פרוזדורים סדיר אך מהיר הקשור להיעדר גל P או לנוכחות תבנית סדירה של גלי P מרובים בין מרווחי R-R רצופים באופן קבוע. רק אפיזודות הפרעות קצב הנמשכות יותר מ 1 s נחשבים.
8. הימנע מהפרעה לאפיזודות מתמשכות של מיקוד אוטומטי או רפרוף פרוזדורים על ידי עצירת קבוצת הגירויים הבאה אם קצב הסינוס אינו מתאושש מעצמו במהלך תקופת המנוחה בין שני גירויים רצופים.

איור 3: איור של פעימות לב במנוחה והמיקום המתאים של צנתר טרנס-ושט למחקר אלקטרופיזיולוגי in vivo . (A) אק"ג מייצג של שתי פעימות לב רצופות במנוחה המציג את גל P, מרווח יחסי הציבור, קומפלקס QRS, מרווח QT ומרווח R-R. (B) סכמטי של קטע אורכי של הלב (1) והוושט (2) שבו מחדירים קטטר מרובע (3) כדי לעורר ולרכוש אק"ג פרוזדורי. (C) אותות א.ק.ג. מייצגים המראים את המיקום המועדף של הצנתר הטרנס-וושט כאשר אות הפרוזדורים (הקו האדום) מפני השטח אק"ג (עקבות עליונות) חופף לאות הפרוזדורים של הצנתר אק"ג (עקבות תחתונות). אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

8. ניתוח א.ק.ג.

הערה: הרישומים והגירויים של האק"ג בוצעו באמצעות תוכנה לרכישת אק"ג. הניתוחים בוצעו באמצעות תוכנה לניתוח אק"ג (איור 3A).

1. מדוד את משך גל P המתאים להתכווצות פרוזדורים המבוטאת באלפיות שנייה (ms).
2. קבע את מרווח יחסי הציבור (מבוטא באלפיות השנייה) המתאים למשך ההולכה החשמלית דרך הצומת האטריובנטריקולרי (AV).
3. דווח על משך קומפלקס QRS (מבוטא באלפיות השנייה) המתאים לדפולריזציה חדרית.
4. הערכת מרווח QT (מבוטא באלפיות השנייה) המשקף את משך הזמן הכולל של דפולריזציה חדרית ורפולריזציה.
5. כמת את מרווח RR (מבוטא באלפיות השנייה) המציין את משך הזמן בין שתי פעימות לב רצופות וקובע את קצב הלב.

9. ניתוחים היסטולוגיים

1. הרדימו את החולדות על ידי הרדמה תחת הרדמה איזופלורנית (5%, 2 ליטר/דקה O₂) ביום ה-21 שלאחר PAB.
2. בודד את RA ו- LA כדי לנתח את remodeling היסטולוגי פרוזדורים הקשורים או לא עם RHF והפרעות קצב לב.
3. בצע חתך רוחבי של הלבבות שזה עתה נכרתו, 5 מ"מ מהקודקוד, כדי להעריך את שיפוץ החדרים הקשורים או לא עם RHF והפרעות קצב לב.
4. תקן את דגימות שריר הלב בפורמלין והכתים את המגלשות ההיסטולוגיות עם תמיסת טריכרום²² של מאסון לכימות עובי והרחבת דופן החדר ופיברוזיס פרוזדורים ב- D21 post-PAB.

10. ניתוחים סטטיסטיים

1. להעריך את נורמליות ההתפלגויות על ידי מבחן שפירא-וילק. השווה את הנתונים המופצים בדרך כלל באמצעות מבחן t של תלמיד.
2. אם הנתונים הם התפלגות לא פרמטרית, בצע מבחן מאן-ויטני. נתח משתנים קטגוריאליים כמו AF-inducibility באמצעות המבחן המדויק של פישר.
3. בטא את התוצאות כממוצע ± שגיאת תקן לממוצע (S.E.M). שקול הבדלים מובהקים סטטיסטית בערכי P דו-זנביים < 0.05.

תוצאות

אישור חזותי על קשירה מתאימה של גזע הרשות הפלסטינית במהלך הניתוח
במהלך הליך PAB, אינדיקציה למיקום טוב של התפר היא העלאה מיידית של לחץ הדם והתרחבות מהירה של RV ושורש תא המטען של PA בצומת עם RV. אסור לתפר לזוז כדי להבטיח עומס לחץ קבוע וקבוע במשך 3 שבועות. במחקר זה, השימו?...

Discussion

הביצועים המוצלחים של PAB הם החלק המכריע ביותר בפרוטוקול זה. חשוב להבחין כראוי בין אבי העורקים לבין תא המטען של הרשות הפלסטינית. בידודה של הרשות הפלסטינית חייב להתבצע בקפדנות כדי למנוע קריעה, דימום ומוות במהלך ההליך. יישום התפר סביב עופרת 19G חייב להתבצע במהירות ולאחר מכן הס...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.9% Sodium Chlorine Injection USB (100 ml)	Baxter	JB1302P	Solution used for drugs (analgesic and anti-inflammatory) dilution and for preparing saline water syringes dedicated to rehydrating the animal after the surgery
19 G x 1 1/2 PrecisionGlide Needle	BD	305187	Needle modified (bent and blunted) to be used as a spacer during for the partial constriction of the pulmonary trunk
2" x 2" Non Woven Non-Sterile Ritmed Gauze Sponge, 4-Ply	AMD-Ritmed	A2101-CH	Gauze sponges used to absorb blood from the wound or to gently push organs (ex: thymus) aside.
4" x 4" Non Woven Non-Sterile Ritmed Gauze Sponge, 4-Ply (x200)	AMD-Ritmed	A2100-CH	Gauze sponges used to absorb blood from the wound or to gently push organs (ex: thymus) aside.
5-0 Vicryl Violet Suture RB-1 1/2 Circle Needle 17mm 27"	Ethicon	J303H	Synthetic absorbable sterile surgical suture with a taperpoint needle used for muscle and skin wounds closure.
Anafen (100 mg/mL)	Merial Canada, Inc.	1938126	Diluted injectable solution of ketoprofen administered as a nonsteroidal anti-inflammatory, analgesic and antipyretic drug.
AutoClip System	FST	12020-00	Can be used to close the skin wound. Includes a clip applier, wound clips (9 mm) and a clip remover.
Dumont #5/45 Forceps	FST	11251-35	Dumoxel forceps with tips angled at 45°. Used to tighten the knots around the spacer placed on the pulmonary trunk.
Fine Scissors - Sharp	FST	14060-10	Stainless steel iris scissors dedicated to intercostal muscles incision and suture cutting.
Forane (Isoflurane) 100 mL	Baxter Canada	BAXCA2L9100	Inhalation anesthetic used for rodents during their PAB surgery.
IV Catheter 16 G x 1.77 " (Straight)	BD Insyte	381257	Catheter used as an endotracheal tube with its metal stylet blunted.
Light  LED 130 F - DrMach	Eickemeyer	M130300	LED wall mounted light.
Magnetic Fixator Retraction System: Base plate	FST	18200-50	Metal plate on which the associated fixtures are installed. It is placed around the heating plate.
Magnetic Fixator Retraction System: Elastomer (2 m Roll)	FST	18200-07	Used to attach the retractors to the fixators.
Magnetic Fixator Retraction System: Fixators	FST	18200-02	Movable anchors that can be placed on the base plate.
Magnetic Fixator Retraction System: Retractors	FST	18200-11	Retractors allowing to maintain the surgical wound with the desired opening
Metzenbaum Scissors (Curved)	FST	14017-14	Stainless steel blunt scissors used for blunt dissection of the skin and muscles.
Micro-Adson Forceps	FST	11018-12	Stainless steel serrated forceps used to grasp skin and other tissues.
Oster Golden A5 2-Speed Clipper	Oster Professional	34264416949	Pet grooming clipper used to prepare the surgical field. Since it's meant to be used with large animals, the user needs to be careful with rats.
Rodent heating plate or warming system	Custom made	N/A	Plate connected to a unit equipped with a LED screen displaying the temperature detected by the rectal probe as well as the target temperature.
Rodent Ventilator Model 683	Harvard Apparatus	74240-2	Mechanical ventilator used for small laboratory animals (max 5 kg).
Semken Forceps with Serrations (Curved)	FST	11009-13	Stainless steel forceps used for tissue dissection.
Semken Forceps with Serrations (Straight)	FST	11008-13	Stainless steel forceps used for tissue dissection.
Silky Fresh Hair removal Cream	Veet	62200825036	Hair removal product used to prepare the surgical site after shaving.
Soluprep	3M	103.26	Bottled antiseptic solution tinted with 2% chlorhexidine and 70 % alcohol 225 mL.
Stainless steel spatula 195 mm	Heathrow Scientific	HS15907	Spatula used as a tongue depressor during rat intubation.
Stereomicroscope System SZ61TR	Olympus	88-126	Microscope equipped with binoculars and a built-in camera allowing for video filming.
Sterile Sodium Chloride 0.9% Irrigation Bottle (60 mL)	Saline H2O	25-6048SA-L	Solution used to keep the wound moist throughout the surgery.
Surgical Scissors - Sharp-Blunt (Straight)	FST	14001-12	Stainless steel scissors used to make the initial skin incision.
Suture 5-0 Silk No Needle	Henry Schein	102-6344	Silk thread used to do the constriction of the pulmonary trunk
Systane Ointment	Alcon	2444062	Eyes lubricant providing a temporary relief of burning and irritation caused by the dryness of the eyes during surgery.
SZ2-STU2 stereomicroscope stand	Olympus	N1198900	The arm attached to the base provides a great freedom of movement to the microscope head.
Tissue forceps - 1X2 Teeth	FST	11021-15	Stainless steel forceps allowing to grasp, hold and manipulate tissues (skin and muscles).
Transpore Surgical Tape	3M	1527-1	Medical tape used to immobilized the rats' forelimbs and hindlimbs.
Vetbond Tissue Adhesive (3 mL)	3M	1469SB	Surgical glue that can be applied in small amounts on the skin It can be used as a complement to subcutaneous sutures.
Vetergesic Multidose (0.3 mg/mL) 10 mL	Ceva Canada	2342510	Diluted injectable solution of buprenorphine administered as an analgesic drug.
Veterinary anesthesia evaporator Tec 4	Dispomed	34001 Iso	Enables vaporization of isoflurane and concentration at 0–5%.