Electroporation של mycobacteria

Summary

אסטרטגיות פתוגניים Mycobacterial להישאר ממעטים להבין. קצב הצמיחה האיטי ביותר של מינים, אופי בלתי חדיר של קיר התא, ואת הסכנות של עבודה עם פתוגנים לעשות mycobacteria קשה ללמוד אחראים במידה רבה להבנת העניים שלנו של אורגניזמים אלה. בסרטון זה נדגים את הטכניקה של electroporation, הכוללת תאים העמדת לדחף קצר חשמלי גבוה על מנת לאפשר את כניסתם של ה-DNA. זוהי השיטה הנפוצה ביותר עבור החדרת דנ"א לתוך תאים mycobacterial.

Abstract

שינוי יעילות גבוהה היא מגבלה עיקרית במחקר של mycobacteria. Mycobacterium הסוג יכול להיות קשה לשנות, זו נגרמת בעיקר על ידי קיר התא עבה דונגי, אך מורכב על ידי העובדה בטכניקות מולקולריות ביותר פותחו זנים בריחוק הקשורים כגון Escherichia coli ו - Bacillus subtilis. למרות המכשולים הללו, פלסמידים mycobacterial זוהו שינוי ה-DNA של מינים רבים mycobacterial עכשיו תוארו. השיטה המוצלחת ביותר עבור החדרת דנ"א לתוך mycobacteria הוא electroporation. פרמטרים רבים לתרום טרנספורמציה מוצלחת; אלה כוללים את המין / זן, טבעו של ה-DNA להפוך, את הסמן לבחירה בשימוש, המדיום הצמיחה, את התנאים הדופק electroporation. שיטות אופטימיזציה עבור הפיכתה של שניהם איטי ואת המגדל מהיר מפורטים כאן. יעילות טרנספורמציה עבור mycobacterial מינים שונים לבחירה עם סמנים שונים מדווחים.