התחילו בטחינת 10 מיליגרם של Mycobacterium paratuberculosis מיובש בהקפאה לאבקה דקה באמצעות מכתש ומזיק. הוסף חמישה מיליליטר של האדג'ובנט של פרוינד לא שלם לקבלת תמיסת מלאי של 10 מיליגרם למיליליטר. אחסנו את המלאי במינוס ארבע מעלות צלזיוס.
לפני החיסון, לדלל את פתרון המלאי. לאחר מכן, לדלל את MOG 35-55 פפטיד לשני מיליגרם למיליליטר ולאחסן אותו במינוס 20 מעלות צלזיוס. מערבבים כמויות שוות של MOG 35-55 עם האדג'ובנט בצינור חמישה מיליליטר עם הומוגנייזר עד שנוצר תחליב עבה.
לאחר כל 10 שניות של ערבוב, הניחו את התמיסה על קרח למשך 20 שניות וסובבו את הצינור כדי לשחזר את כל התמיסה. מעבירים את התחליב למזרק של מיליליטר אחד, ומבטיחים שהוא נקי מבועות אוויר. לאחר מכן, התאימו אותו למחט של 27 מד.
תת עורית, להזריק 200 מיקרוליטר של תחליב לתוך הגב התחתון של עכבר מורדם. לאחר מכן, תוך צפקית להזריק מנה של רעלן שעלת ביום אפס ושניים לאחר החיסון. כל העכברים הפגינו מחלה מונופאזית חריפה, המאופיינת בשיא נכות יחיד שנצפה לאחר 14 עד 17 ימים, ואחריו התאוששות חלקית של הסימפטומים במהלך 10 הימים הבאים.
עכברים שחוסנו ב- M.paratuberculosis הראו התפרצות מוקדמת יותר לאחר החיסון וחומרה רבה יותר בשלב החריף. שתי הקבוצות הפגינו משקל גוף דומה. בדיקת התפשטות עם שילוב תימידין טיטראטי שבוצעה על תאי הטחול של עכברי EAE הראתה תגובה שגשוגית חזקה לפפטיד MOG 35-55, אך לא לאובלבומין.
ניתוח ציטופולורומטרי הראה עלייה בלימפוציטים מסוג T, תאים דנדריטיים ומונוציטים בטחול של עכברי EAE שחוסנו נגד M.paratuberculosis בהשוואה לעכברים שחוסנו ב-CFA. בדיקת רקמות המטוקסילין ואוזין חשפה הסננה דלקתית חד-גרעינית טיפוסית של כלי דם וקרום המוח במוח ובחוט השדרה.
