Intramuscular Adipose Tissue (IMAT) Visualization with Oil Red O Staining

הכן את תמיסת ORO על ידי המסת 0.5 גרם אבקת ORO ב -100 מיליליטר של איזופרופנול כדי ליצור תמיסת מלאי. הכן את פתרון העבודה לכל השרירים על ידי שילוב תמיסת מלאי ORO ומים נטולי יונים, ביחס של 60 עד 40. כסו את פתרון העבודה במשך 10 דקות כדי לאפשר לחלקיקים לשקוע.

מסננים אותו דרך רשת של 40 מיקרומטר, ואחריה מסנן מזרק של 0.22 מיקרומטר. לאחר מכן, להסיר את הפתרון פורמלין מן השרירים decellularized בצלחת באר לשטוף את השרירים שלוש פעמים עם נפח שווה של PBS. לאחר מכן, החליפו את PBS בתמיסת איזופרופנול בנפח שווה של 60% איזופרופנול ודגרו עליה על שייקר הנדנדה למשך חמש דקות.

לאחר שתסיים, החלף את תמיסת 60% איזופרופנול בתמיסת עבודה ORO לפני 10 דקות של דגירה על שייקר הנדנדה. לאחר מכן, החלף את פתרון העבודה ORO בנפח שווה של 1% SDS ובדוק את פתרון SDS מעת לעת. ברגע שהפתרון הופך ורוד באופן ניכר, החלף את פתרון SDS ב- 1% SDS טרי.

כאשר הפתרון נשאר ברור למשך 24 שעות, החלף את 1% SDS ב- PBS. תחת מיקרוסקופ סטריאו בהגדלה של פי ארבעה, הסירו כל לכלוך או חלקיק ברור שנדבק לחלק החיצוני של השריר המוכתם. אם הצביעה משביעת רצון, המראה את הכדורים האדומים הבוהקים הצפים במטריצה שקופה, רכשו את תמונות הצביעה באמצעות מצלמה המחוברת למיקרוסקופ הסטריאו.

שרירים שעברו דה-צלולרי תקין היו לבנים ושקופים למחצה. כאשר שרירים דה-צלולריים הוכתמו ב-ORO כדי לדמיין רקמת שומן תוך-שרירית, או IMAT, טיפות שומנים של IMAT ניכרו בתוך מבני השרירים השקופים ככדורים אדומים. שרירי הגפיים האחוריות של עכבר בריאים הראו מעט IMAT טבעי שבא לידי ביטוי במעט שומנים אדומים או חיוביים בהשוואה לשרירי הגפיים האחוריות שהוזרקו עם רעלן אירובי או גליצרול.

דה-צלולריזציה חלקית זוהתה מיד לאחר הטיפול הראשוני ב-SDS או לאחר שטיפת צביעת ה-ORO כסיבים חצי אטומים בצבע ורוד בהיר. פינוי ORO חלקי זוהה בעקבות שטיפת ORO כרקע אחיד ורוד או אדום ולא קווי סיבים ברורים.