לאחר שיבוט הפפטיד Nucleating Vesicle, או תג רצף VNP, במסוף האמינו של חלבון ההיתוך, תרבית מרק ליזוגני של חמישה מיליליטר, או LB starters, מטרנספורמציות חיידקים טריים ב 37 מעלות צלזיוס לרוויה. לאחר מכן, השתמשו בו כדי לחסן 25 מיליליטר של מרק נהדר, או שחפת, המכיל בחירה אנטיביוטית מתאימה בצלוחית חרוטית של 500 מיליליטר. יש לדגור על הבקבוק באינקובטור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס תוך כדי טלטול במהירות של 200 סיבובים בדקה או יותר משווה ערך לזריקת מסלול של 25 מילימטר עד שהתרבית מגיעה לערך צפיפות אופטית של 600 ננומטר, או OD 600, של 0.8 עד 1.0.
לאחר מכן, גרמו לביטוי חלבון רקומביננטי ממקדם T7 על ידי הוספת IPTG לריכוז סופי של עד 20 מיקרוגרם למיליליטר או 84 מיקרומולרית. לאחר מתן מספיק זמן לאינדוקציה, גלולה את התאים על ידי צנטריפוגה ב 3000 G ב 4 מעלות צלזיוס במשך 20 דקות. העבירו את הסופרנאטנט דרך מסנן PES סטרילי ונטול חומרי ניקוי 0.45 מיקרון כדי לעקר את השלפוחית המכילה מדיה לאחסון לטווח ארוך.
כדי לרכז את השלפוחיות לנפח קטן יותר, העבירו את השלפוחית הסטרילית המכילה מדיה דרך מסנן MCE סטרילי ונטול חומרי ניקוי 0.1 מיקרון. לאחר מכן, שטפו בעדינות את הממברנה עם 0.5 עד 1 מיליליטר של מלח סטרילי חוצץ פוספט, או PBS, והשתמשו במגרד תאים או מפזר פלסטיק כדי להסיר בזהירות שלפוחיות מהממברנה. מעבירים את תרכיז השלפוחית לצינור מיקרו צנטריפוגה טרי באמצעות פיפטה.
שלפוחיות מטוהרות ניתן לאחסן בארבע מעלות צלזיוס. סוניק את החלבון המכיל שלפוחיות במדיה סטרילית באמצעות לוח זמנים מתאים כדי לשבש את קרומי השומנים השלפוחית ולשחרר חלבון. צנטריפוגה את המתלה הסוניק ב 39, 000 G ו 4 מעלות צלזיוס במשך 20 דקות כדי להסיר את פסולת שלפוחית.
BL21DE3 Escherichia coli המכיל את מבנה הביטוי VNp6-mNeongreen הציג פלואורסצנטיות mNeongreen המושרה במהלך הלילה עם IPTG. הפלואורסצנטיות נותרה גלויה בתרבית לאחר הסרת תאי חיידקים על ידי צנטריפוגה. נוכחותו של VNp-mNeongreen בתוך התרבית במדיה תרבית מנוקה אושרה על ידי נתרן דודציל סולפט פוליאקרילאמיד ג'ל אלקטרופורזה.
השלפוחיות המטוהרות המושעות מחדש ב- PBS הציגו גם פלואורסצנטיות.
