כדי להתחיל, להפשיר במהירות מלאי קפוא של תאי SH-SY5Y ב- FBS. בתוספת 10% DMSO ודלל פי עשרה עם מדיה מחוממת מראש. לאחר מכן צנטריפוגו את התאים והוציאו את הסופרנטנט.
השהה מחדש את גלולת התא בחמישה מיליליטר של מדיה שחוממה מראש ותאי זרעים בצלוחית T25. כדי להכין פתקי כיסוי המצופים ב-PDL, יש למרוח 600 מיקרוליטר של 50 מיקרוגרם למיליליטר תמיסת PDL על כל באר של החלקות כיסוי סטריליות. נפח ה-PDL המתווסף לכל באר משתנה בהתאם לגודל הבאר.
יש לדגור על החלקות הכיסוי, לכוון את טמפרטורת החדר למשך שעה. לאחר הדגירה, יש להסיר את תמיסת ה-PDL ולשטוף את הכיסוי שלוש פעמים ב-1.8 מיליליטר מים מזוקקים. הניחו לתא המצופה להתייבש באוויר למשך שעתיים.
ברגע שתאי SH-SY5Y מגיעים למפגש של 80% עד 90%, נתקו אותם על ידי הוספת תמיסת טריפסין. נטרל את הטריפסין על ידי הוספת מדיום DMEM שחומם מראש. צנטריפוגה את מתלה התא ולהשעות מחדש את הגלולה ב- DMEM.
ספור את התאים במונה תאים אוטומטי. לאחר מכן, זרעו את התאים בצפיפות של 1.5 כפול 10 עד התאים הרביעיים לסנטימטר מרובע על זכוכית כיסוי מצופה PDL. ביום הראשון וביום השלישי, החלף את המדיום עם DMEM בתוספת חמישה או 2% FBS בהתאמה, 1% אנטיביוטי antimycotic, או 10 micromolar RA או 95% אתנול של אותו נפח תוסף לשמש בקרת הרכב עבור בידול.
הכינו מלאי PKMO ב- DMEM חופשי פניל אדום שחומם מראש בתוספת שניים או 10% FBS תלוי במצב בידול, 1% אנטיביוטי אנטיביוטי, ו 20 מילימולרי hepes. ביום השישי, שטפו את התאים פעמיים באמצעי הדמיה ודגרו על התאים בתמיסת PKMO בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני למשך 30 דקות. לאחר הצביעה, יש לשטוף את התאים שלוש פעמים באמצעי הדמיה שחוממו מראש.
לשטיפה הסופית, לדגור על התאים במשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס, ו 5% פחמן דו חמצני. לאחר הדגירה, יש להחליף את השטיפה הסופית באמצעי הדמיה טריים שחוממו מראש המכילים 20 מילימולרי.
