התחילו בחיסון מושבת חיידקים בודדת ל-200 מיליליטר מרק לוריא מעוקר בצלוחית ארלנמאייר של 500 מיליליטר. תרבית את החיידקים למשך הלילה באינקובטור שייקר שנקבע על 37 מעלות. לאחר 14 שעות של תרבית, בדקו את הצפיפות האופטית של החיידק ב-600 ננומטר.
יש להכניס את החיידקים לצינורות חרוטיים בקוטר 50 מיליליטר ולאחסן אותם בארבע מעלות צלזיוס לשימוש נוסף. באמצעות פיפטה סרולוגית, מעבירים 50 מיליליטר של תרבית החיידקים לתוך בקבוק חדש של 250 מיליליטר Erlenmeyer מסומן את הצינורות לבקרה חיה או מטופלת דמה. השתמש פיפטה סרולוגית כדי להעביר 50 מיליליטר של החיידקים לצינור חרוטי 50 מיליליטר עבור בקרה מטופלת דמה לפני שטיפה.
במכסה המנוע הכימי, הוסף 781 מיקרוליטר של paraformaldehyde לתרבית החיידקים כדי להשיג ריכוז סופי של 0.5% יש להשליך את החוד המשומש למיכל מסוכן כימי של פסולת מוצקה. לאחר מכן מכסים את הבקבוק בסדין נייר כסף ומניחים אותו באינקובטור שייקר ב 37 מעלות צלזיוס למשך שעה אחת. לאחר השלמת הדגירה, לשטוף את החיידקים כדי להסיר כל שאריות paraformaldehyde.
להסרת שאריות הפרפורמלדהיד, באמצעות פיפטה סרולוגית, מעבירים את החיידקים המטופלים מבקבוק ארלנמאייר לצינור חרוטי של 50 מיליליטר. לאחר מכן צנטריפוגו את החיידקים המטופלים בכ 3000 גרם למשך 20 דקות. יש להשליך את הסופרנאטנט למיכל מסוכן כימי של פסולת נוזלית בתוך מכסה המנוע הכימי.
כעת הוסיפו 25 מיליליטר של מרק לוריא לכדורי החיידקים המטופלים והנשלטים, ומערבולות כדי להשהות מחדש את כדורי החיידקים. חזור על פעולת הצנטריפוגה ומתלה הכדורים ארבע פעמים. כהכנה לבדיקות שונות, השהה מחדש את הגלולה בנפחים מתאימים.
למבחני תוחלת חיים. זרעו 200 מיקרוליטר של חיידקים מרחפים מחדש במרק לוריא 10 מיליליטר על צלחות 60 מ"מ. אחסנו את החיידקים בארבע מעלות צלזיוס.
כדי לבצע בדיקת איכות של צמיחת החיידקים, פזרו צלחת מרק לוריא עם חיידק מוכן באמצעות קצה פיפטה סטרילי. כדי לוודא זיהום, סטייק מרק לוריא המשמש לשטיפה ותלייה על צלחת נפרדת. לאחר מכן הניחו את הצלחות באינקובטור של 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה.
למחרת, בדוק אם יש גידול חיידקי. הצילו את החיידקים אם הכנת אלדהיד פרפורמית מצליחה והמושבות לא מצליחות לגדול על צלחת ה-LB. כדי לבדוק את הפעילות המטבולית החיידקית עם רספירומטר, תחילה לחות את המחסנית על ידי הוספת 200 מיקרוליטר של כיול לכל הבארות על צלחת 96 בארות.
הניחו את המחסנית בצלחת בעלת 96 הקידוחים ודגרו למשך הלילה בחום של 37 מעלות צלזיוס. הגדר את המכונה לערבוב, משקל, מדידה ולולאה. למחרת, הכנס את המחסנית המיובשת למכונה.
לצלחת חדשה של 96 בארות, הוסיפו 160 מיקרוליטר של M9 לבארות הבדיקה, ואחריו 40 מיקרוליטר של חיידקים מוכנים. הוסף 200 מיקרוליטר של M9 לארבע בארות פינתיות כדי לשמש ריק. לחלק 160 מיקרוליטר של M9 ו 40 מיקרוליטר של מרק לוריא כמו בקרות שליליות.
לבסוף, פיפטה 200 מיקרוליטר של M9 לתוך הבארות הנותרות שאינן בשימוש. לאחר מכן החלף את לוחית הכיול שנפלטה בלוח הבדיקה לפני הפעלת התוכנית. התוצאות יוצגו כקצב צריכת החמצן.
זנים שונים הציגו זמני תגובה שונים להפרפורמלדהיד. לדוגמה, חשיפה של חיידקי HB101 ל-0.25% למשך שעה אחת מספיקה כדי להפוך אותו ללא פעיל מטבולית. Enterococcus faecalis דרש ריכוז של 1.0% להשפעה עקבית.
תולעי Caenorhabditis elegans הפגינו העדפות דומות כלפי זני OP 50 שטופלו, כמו גם כלפי קבוצת הביקורת המדומה. עם זאת, בדיקה זוגית רגישה גילתה העדפה חזקה יותר לבקרה המדומה. לתולעים על OP 50 מטופל יש קצב שאיבה גבוה יותר מאשר תולעים על ביקורת מטופלת דמה.
צריכת חיידקים מטופלים גרמה לעיכוב בזמן ההתפתחות של תולעי בר, כמו גם לירידה ביכולת הטלת הביצים. תוחלת החיים של התולעים לא הייתה שונה באופן משמעותי זו מזו, ללא קשר למקור המזון. עם זאת, החיידקים שטופלו בפרפורמלדהיד הגדילו את תוחלת החיים של התולעת בנוכחות 5-Fluoro-2'deoxyuridine צריכת החיידקים שטופלו בפרפורמלדהיד על ידי זן תולעים ארוך חיים לא שינתה את תוחלת החיים שלו.
