Multicolor Immunostaining of Nasal Mucosal Tissues of Rats with Allergic Rhinitis

כדי להתחיל, הניחו את קטעי רקמת רירית האף המוכתמת בהמטוקסילין ואוזין על שלב מיקרוסקופ. התאימו את מיקוד המיקרוסקופ עד שהתמונה נראית בבירור. צלם את תמונת הרקמה ב- 40X.

מחממים את מאגר ציטראט פוספט עד שהוא רותח. לאחר מכן הוסף את המגלשות למיכל לאחר הסרתו מהחום. לאחר חימום של שמונה דקות עד לרתיחה, מכבים את האש למשך שמונה דקות ולאחר מכן עוברים לחום בינוני נמוך למשך שבע דקות.

לאחר מתן אפשרות למיכל להתקרר באופן טבעי, מעבירים את הפרוסות ל-PBS. השתמשו בשייקר להסרת צבע כדי לנער את הפרוסות במשך חמש דקות. לאחר מכן צייר עיגול סביב הרקמה המיובשת עם עט immunohistochemical.

הוסיפו 3% תמיסת מי חמצן לפרוסות לפני הדגירה. לאחר מכן מעבירים את הפרוסות ל-PBS לשטיפה כמו קודם. כדי לחסום, יש למרוח סרום עיזים 5% בתוך העיגול המסומן.

לאחר הדגירה, הסר בזהירות את פתרון החסימה והוסף מיליליטר אחד עד שני מיליליטר של FOXP3 לפרוסות הרקמה. לאחר מכן מניחים את הפרוסות בתא לח לדגירת לילה. לאחר שטיפת הפרוסות ב-PBS, ייבשו בעדינות את הפרוסות בנייר פילטר.

לאחר מכן מוסיפים מיליליטר עד שני מיליליטר של תמיסת הנוגדנים המשנית לפרוסות. לאחר מכן, דגרו על הפרוסות ב-100 מיקרוליטר של תמיסת עבודה להגברת אות טירמיד למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר בחושך. לאחר הדגירה, שטפו את הפרוסות עם PBS שלוש פעמים במשך חמש דקות כל אחת.

כעת יש למרוח מיליליטר עד שני מיליליטר של תמיסת צביעה DAPI על הפרוסות לפני הדגירה. להרוות את הפלואורסצנטיות האוטומטית על ידי דגירה על הפרוסות במרווה במשך חמש דקות לפני שטיפה של 10 דקות PBS. ואז לאטום אותם עם אנטי פלואורסצנטי מרווה .

צלם את התמונות המיקרוסקופיות של החלקים המוכתמים תחת הגדלה של 20X ו- 40X. צביעת המטוקסילין ואוזין של חולדות הביקורת הראתה תאי אפיתל וריסונים מסודרים היטב. רירית מחיצת האף נפגעה והתנתקה בקבוצת המחלה עם חדירת נויטרופילים בולטת.

צביעה אימונופלואורסצנטית רבה גילתה כי הביטויים של ROR Gamma T ו- TCAM1 היו מוגברים בקבוצת המחלה. עם זאת, FOXP3 היה תחת ביטוי.