לאחר הפעלת המיקרוסקופ הקונפוקלי המצויד במטרות טבילה בשמן 40x ו- 63x, הניחו את השקופית על במת המיקרוסקופ. כדי לדמיין את אבות השרירים הקשורים לדיסק הכנף ואת שרירי הטיסה העקיפה או IFMs, הגדר DAPI עם עירור של 405 ופליטה של 450 ננומטר. לאחר מכן בחר Alexa Fluor 488 עם עירור של 496 ופליטה של 519 ננומטר, וקוואזר 670 עבור בדיקות smFISH עם עירור של 647 ופליטה של 670 ננומטר.
אתר את הדגימה באמצעות אות DAPI ומנורת UV. שמור את התמונות שצולמו כקובצי TIFF. כדי לדמיין את תאי הגזע של השריר הבוגר, הגדר את אורכי גל העירור והפליטה עבור DAPI ו- Alexa Fluor 488 כפי שהודגם קודם לכן.
לאחר מכן הגדר את אורכי הגל עבור Alexa Fluor 555 ו- Quasar 670 עבור בדיקות smFISH. אתר את הדגימה ושמור את התמונות שצולמו כ- TIFF. הפעל את תמונה J ונווט לתפריט התוספים.
בחר פקודות מאקרו ולאחר מכן ערוך כדי לפתוח את קוד המקור של פקודות המאקרו. כדי לכמת כתמי Mef2 smFISH בזחלים, הגדר את רדיוס היומן לשלושה ואת איכות היומן ל- 20. לאחר מכן פלח גרעינים חיוביים Mef2 עם טשטוש של שניים, פרמטר קנה מידה גרעין של 30, סף גרעין של מינוס שמונה, וגודל גרעין של 300.
הפעל את המאקרו על-ידי ביצוע הפקודה הפעלה. המאקרו יטען אוטומטית את כל התמונות מהתיקייה המיועדת ויכמת אותן ברצף. בסיבי שריר, הגדר את רדיוס היומן ל- 2.5, איכות היומן ל- 60, טשטוש לשניים, פרמטר קנה המידה של הגרעין ל- 100, סף הגרעין לאפס וגודל הגרעין ל- 300.
הפעל את המאקרו על-ידי ביצוע הפקודה הפעלה. המאקרו יטען אוטומטית את כל התמונות מהתיקייה המיועדת ויכמת אותן ברצף. לאחר הניתוח, בדוק את התוצאות המוצגות בתוצאות קובץ FISH ובתוצאות גרעיני קבצים.
תעתיקי Mef2 ו-Zfh1 זוהו באופן אחיד באוכלוסיית AMP ועברו לוקליזציה משותפת עם חלבוני Mef2 ו-Zfh1 בהתאמה. הגדלה גבוהה יותר של AMPs הבחינה בין מוקדי אתרי שעתוק לבין mRNA בוגר המפוזר בציטופלסמה. באופן דומה, אתר השעתוק והתפוצה של Mef2 ו-Zfh1 mRNA נבדקו ב-IFMs בוגרים ממוינים ובתאי גזע קשורים.
תמונת המאקרו J שנבנתה בתוך החברה זיהתה ופילחה ביעילות כתמי Mef2 וגרעיני שריר. הניתוח הכמותי של Mef2 mRNA לגרעינים ב-IFMs בוגרים וב-AMPs לא היה שונה באופן משמעותי. כימות התפלגות הנקודות Mef2 הראה כי 92% מ-Mef2 mRNA נמצא בציטופלסמה, ו-8% קשורים לגרעיני שריר.
