Embedding Gastric Biopsy-Derived Single Cells in a Basement Membrane Matrix Dome for Organoid Generation

כדי להתחיל, הסר את מטריצת קרום המרתף המופשרת מהקרח. הוסף את הנפח המחושב של מטריצת קרום המרתף לתאים בודדים הנגזרים מביופסיה קיבה, וערבב בעדינות על ידי פיפטינג למעלה ולמטה במשך כ -10 שניות. לאחר מכן באמצעות פיפטה, להעביר במהירות, 50 מיקרוליטר aliquots של המטריצה, תערובת תאים למרכז בארות בודדות בצלחת תרבית רקמה 24 באר.

מכסים את הצלחת מיד, ובתנועה חלקה אחת, הופכים את הצלחת. הניחו את הצלחת ההפוכה באינקובטור תרבית רקמה של 37 מעלות צלזיוס למשך 35 דקות כדי לאפשר למטריצת קרום המרתף להתפלמר. לאחר מכן הוסף 500 מיקרוליטר של מדיה אורגנואיד קיבה חם מראש לכל באר תוך הבטחת החלק העליון של כל כיפה שקוע לחלוטין במדיה.

אורגנואידים ניתנים בדרך כלל לזיהוי תוך 10 ימים לאחר הזריעה של תאים בודדים. ביום ה-20 הם גדולים, ובדרך כלל צריך לעבור אותם. מספר האורגנואידים בגוף ובאנטראלים מגיע לשיא ביום ה-10 לאחר הזריעה לפני שהוא יורד, אם כי לא באופן משמעותי.

אורגנואידים שנוצרו מרקמת ביופסיית מעטפת הציגו קצב גדילה גדול יותר בהשוואה לאורגנואידים שנוצרו מרקמת ביופסיית הגוף. בקרב חולים שונים, מגוון של מורפולוגיה אורגנואידית נצפה בדרך כלל בכל כיפה בודדת. עם זאת, בממוצע, ספסטיות אורגנואידים הראתה שונות מועטה.