הזרקת dsRNA זעיר לגלמים Trichogramma dendrolimi וניטור תוצאות התפתחותיות

כדי להתחיל, הפעל את מושך מחט הזכוכית, ואז הגדר את החום ל 280, את המהירות ל 170, את העיכוב ל 250, ואת המוט ל 30. שיפוע קצה מחט הזכוכית הנימית. לאחר מכן באמצעות משאבת מיקרו הזרקה, לטעון כשני מיקרוליטר של פריטין הומולוגיה שרשרת כבדה RNA דו גדילי לתוך מחט ההזרקה.

מעבירים את צלחת האגר המכילה גלמים Trichogramma dendrolimi לשלב המיקרוסקופ המורכב. הכנס בזהירות את מחט ההזרקה לבטנו של גולם בזווית של כ -30 מעלות והזריק בהדרגה חמישה ננוליטרים של פריטין הומולוגיה שרשרת כבדה תמיסת RNA דו-גדילית. יש לדגור על כ-700 גלמים בכל טיפול בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס למשך 24 או 48 שעות.

חלץ תוכן RNA מ-100 גלמים לכל שכפול. מכ-50 גלמים בכל טיפול, צפו בהופעת הצרעות. לבסוף, רשמו את קצב הופעת הצרעות ואת שיעור העיוותים.

גלמים מסוג T.dendrolimi שהוזרקו עם הומולוגיה של שרשרת כבדה פריטין דו-גדילי הציגו שיעור הופעה נמוך משמעותית בהשוואה לאלו שהוזרקו עם GFP דו-גדילי או ללא הזרקה. בצרעות שהופיעו, 51.85% מצרעות T.dendrolimi שהיו נתונות להומולוגיה של שרשרת פריטין כבדה דו-גדילית פיתחו כנפיים קטנות מעוותות. עיוות זה נעדר בצרעות שהוזרקו להן GFP דו-גדילי או בצרעות ללא כל זריקה.

בנוסף, גלמי T.dendrolimi שהוזרקו להם הומולוגיה דו-גדילית של פריטין בשרשרת כבדה הראו מלניזם, המעיד על מטבוליזם חריג של ברזל. המלנין לא נצפה בצרעות שהוזרקו להן GFP דו-גדילי או בצרעות ללא כל הזרקה.