אימות הזהות של תאי MPNST במעבר מוקדם ו- Allograft של תאי גידול במעבר מוקדם כדי להדגים גידוליות

כדי להתחיל, הניחו כיסויים סטריליים בבארות של כלי תרבית רקמה של שש בארות ושפכו נפח מספיק של פולי-ל-ליזין ותמיסת למינציה לתוך הבארות כדי לכסות את הכיסוי. לאחר מכן, אטמו את הצלחת בניילון נצמד כדי למנוע אידוי, ודגרו בארבע מעלות צלזיוס למשך הלילה. למחרת בבוקר, שטפו את הכיסויים שלוש פעמים עם PBS סטרילי.

הוסף שני מיליליטר של תרחיף תאים ומדיה צמיחה צלחת 10, 000 תאים לכל באר המכילה את הכיסוי. לאחר שטיפת הכיסויים עם PBS, תקן את התאים עם תמיסת 4% paraformaldehyde ו- PBS במשך 18 דקות. שטפו את הכיסויים שלוש פעמים עם PBS במשך חמש דקות לפני הכתמת החיסון.

לדגור על הכיסויים המוכתמים והשטופים של החיסון באחד עד חמישה מיקרוגרם של צבע Hoechst למשך 10 דקות. לאחר מכן שטפו את הכיסויים עם PBS במשך חמש דקות נוספות. הרכיבו את השקופיות באמצעות יחס שווה של תערובת PBS וגליצרול ולכדו את התמונות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

טפלו בתאים בתמיסת דיסוציאציה לא אנזימטית של תאים למשך 30 שניות עד דקה. לאחר מכן הוסף חמישה מיליליטר DMEM עבור כל מיליליטר אחד של מגיב דיסוציאציה של תאים שאינם אנזימטיים. ספירת תאים באמצעות המוציטומטר.

צנטריפוגו את התאים ב-5G למשך חמש דקות. להשעות מחדש את התאים בריכוז של אחד עד פעמיים 10 של התאים השישיים לכל 100 מיקרוליטר של DMEM. מניחים את החיה על בטנה ומעקרים את אתר ההזרקה עם 70% אתנול.

יש להזריק אחת עד פעמיים 10 מהתאים השישיים באופן תת-עורי באגף הימני. הניחו את העכבר לבדו בכלוב ללא מצעים ואפשרו לו להתאושש. כדי למנוע היפותרמיה, הניחו חלק מהכלוב על כרית החימום.

מוצגות תמונות בעוצמה נמוכה וגבוהה של תאי בטא 3 MPNST במעבר מוקדם P0 GGF. התאים נמצאו גידוליים, ויצרו מושבות באגר רך ושתלים בעכברים מדוכאי חיסון.