לאחר הקרבת העכבר, הניחו אותו על משטח קצף ואבטחו את הגפיים הקדמיות בעזרת סרט או סיכות. השתמש מספריים הפעלה לחתוך את שתי הגפיים האחוריות מעל הברכיים. מעבירים כל איבר אחורי לתא דיסקציה נפרד, ומוסיפים תמיסה קרה של טיירוד כדי לכסות את הרקמה.
הצמידו את הגפה האחורית הראשונה לחדר הנתיחה, וודאו שהפנים האחוריות של הרגליים גלויות. תחת הגדלה, להסיר את העור, ולאחר מכן לחשוף ולהסיר את flexor digitorum brevis או שריר FDB. אחסנו את שריר ה-FDB בבקבוקון זכוכית מסומן המכיל מיליליטר אחד של תמיסת טירוד.
באמצעות מספריים עדינים, להפריד את שריר gastrocnemius, ולאחר מכן הבלו שריר soleus. הסר את העור מהפנים הקדמיות של הרגל. לאחר מכן, זהה את הגידים הדיסטליים של שרירי הטיביאליס הקדמיים ואת שרירי extensor digitorum longus או EDL באזור הקרסול.
מוציאים ומשליכים את הטיביאליס. לאחר מכן, לחתוך את הגידים הדיסטליים של EDL ולהמשיך את הדיסקציה כדי להסיר לחלוטין את שריר EDL. לאחר זיהוי שריר extensor hallucis longus או EHL, יש להתחיל את הדיסקציה בעקבות הגיד לספרה הראשונה.
לאחר מכן, לזהות ולעקוב אחר הגיד החיצוני ביותר של peronei לחתוך אותו ולהסיר את שריר peroneus longus או PL. לזהות ולהתחקות אחר הגיד עד הספרה הרביעית. לאחר מכן, לחתוך ולהסיר את peroneus digiti quarti או שריר PDQA.
לאחר ניתוח הגפה האחורית השנייה, אספו שרירים מאותו סוג בבקבוקון זכוכית מסומן המכיל את התמיסה של טירוד. החלף את התמיסה של Tyrode בתא הדיסקציה כדי להסיר פסולת ופרוות עכבר. שפכו את שרירי ה-PL לתוך תא הדיסקציה וודאו את שלמותם והתכווצותם.
ביצוע חתכים אורכיים או אלכסוניים בשריר הסולאוס בעקבות הגיד המרכזי, תוך חיתוך של כ-80% מאורכו. עבור שריר EDL, בצע גיד אחד או שניים וחתך בערך באותו אורך כמו הסוליאוס. מעבירים כל זוג שרירים לבקבוקון זכוכית חדש המכיל שלושה מיליגרם של collagenase type 2 בתמיסת דיסוציאציה, ודגרים עליהם באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס למשך 65 עד 90 דקות עם רעידות עדינות.
לאחר 65 דקות של דגירה, לבדוק את הבקבוקון תחת סטריאוסקופ כל חמש דקות. ברגע שהשריר נראה קרוע ורפוי, והסיבים מתחילים להתנתק, שטפו את השרירים עם Tyrode בטמפרטורת החדר כדי להשבית ולהסיר את הקולגנאז. בעזרת סט פיפטות פסטר מלוטשות אש, מערבבים את התמיסה סביב השריר בעזרת פיפטה בעלת קצה חמישה מילימטר.
לאחר מכן, משכו בעדינות את השרירים פנימה והחוצה מהקצה שלוש עד ארבע פעמים. כאשר השרירים מתחילים לשחרר סיבים והופכים דקים יותר, באמצעות קצה ארבעה מילימטר, חזור על התהליך כדי להפריד סיבים נוספים.
