התחל על ידי השעיה מחדש של MOG 35 55 פפטיד במים. יש לדלל את מלאי הפפטיד ל-10 מיקרוגרם למיליליטר במאגר הציפוי לפני הניסוי. עכשיו פיפטה 100 מיקרוליטר של הפתרון הסופי לתוך בארות של צלחת באר 96.
בו זמנית מצפים מספר שווה של בארות עם 100 מיקרוליטר של BSA מומס במאגר ציפוי. אוטמים את הצלחת בסרט הדבקה למניעת אידוי ודגרים על הצלחת למשך הלילה בארבע מעלות צלזיוס. למחרת, לבצע שלוש שטיפות של הצלחת עם 200 מיקרוליטר של PBS בתוספת 0.5% tween 20.
לאחר מכן להוסיף 100 מיקרוליטר לכל באר של פתרון חסימה המורכב 3% BSA ב PBS. דוגרים על הצלחת האטומה במשך שעה בחום של 18 מעלות בתנור הכלאה. לאחר הדגירה, לשטוף את הצלחת שלוש פעמים עם 200 מיקרוליטר לכל באר של PBST.
יש לדלל כל דגימת סרום המתקבלת מדמם של עכברים מחוסנים EAE בתמיסת חסימה ולהוסיף 100 מיקרוליטר לבאר הן לבארות מצופות MOG 35, 55 והן לבארות מצופות BSA. הוסף את אותו נפח של פתרון חסימה לבארות ריקות ייעודיות. דוגרים על הצלחת האטומה במשך שעתיים בטמפרטורת החדר תוך רעידות בלתי פוסקות.
לאחר הדגירה, מוציאים את הצלחת מהאינקובטור ושוטפים את הצלחת שלוש פעמים עם 200 מיקרוליטר לבאר PBST. לדלל את הנוגדן המשני המצומד HRP בתמיסה המורכבת מ-0.2% BSA ב-PBST ולהוסיף 100 מיקרוליטר לכל באר. דוגרים על הצלחת האטומה במשך שעה בטמפרטורת החדר, תוך שמירה על רעידות קבועות.
לשטוף את הצלחת שלוש פעמים עם 200 מיקרוליטר לכל באר של PBST. מוסיפים 100 מיקרוליטר של שלושה, שלושה ראשוניים, חמישה, חמישה מצע טטרמתיל בנזידין ראשוני לכל באר. לדגור בחושך במשך דקה עד חמש דקות מעקב אחר התפתחות של צבע כחול.
הוסף 100 מיקרוליטר של תמיסת עצירה לכל באר. לאחר מכן השתמש בקורא לוחות באורך גל של 450 ננומטר כדי למדוד את הצפיפות האופטית בכל באר. ערכי הצפיפות האופטית של דגימות EAE היו גבוהים משמעותית מדגימות הבקרה המצביעות על תגובת אימונוגלובולין G חזקה כנגד פפטיד MOG.
