כדי להתחיל, מניחים את הזרעים של Brassica napus DH12075 במיקרו-צינורות. כדי להסיר שומנים מהזרעים, הוסיפו מים ו-0.1% חומר ניקוי למיקרו-צינורית ונערו במשך 60 שניות. כעת שטפו את הזרעים במים ולאחר מכן 70% אתנול, כל אחד למשך 60 שניות.
לאחר מכן, מניחים את הזרעים בתמיסת 10% נתרן היפוכלוריט ומנערים במשך 20 דקות. לאחר הסרת האקונומיקה, שטפו את הזרעים ארבע פעמים במים סטריליים למשך 60 שניות כל אחד. מניחים את הזרעים על צלחת פטרי המכילה את מצע נביטת הזרעים.
קר, ריבוד הזרעים בארבע מעלות צלזיוס למשך הלילה לפני העברת התבשיל לחדר טיפוח. לאחר חמישה ימים, מעבירים את השתילים לקופסת תרבית צמחים המכילה מצע גידול צמחים. חיסון Ti פחות agrobacterium tumefaciens C58C1 הנושא פלסמיד שעיר הגורם שורש PRIA 4B בחמישה מיליליטר של LB בינוני.
מגדלים את התרבית בן לילה ב-28 מעלות צלזיוס עד שהיא מגיעה לצפיפות אופטית של 600 ננומטר של 0.9 לאחד. מעבירים את החיסון החיידקי לתוך המזרק. באמצעות מחט 26 מד המורכבת על המזרק, לנקב את hypocotyl של שתיל בן 18 יום בערך סנטימטר אחד מעל מדיום הגידול.
להזריק כ 50 מיקרוליטר של inoculum לתוך הפצע ולגרד את הרקמה על פני השטח של hypocotyl. מחזירים את הצמח לחדר הגידול בטמפרטורה של 21 מעלות למשך שבועיים עד ארבעה שבועות. לאחר מכן, לחתוך את היבלת עם שורשים שעירים יצאו מן hypocotyl.
הניחו את היבלת עם שורשים שעירים על צלחת פטרי המכילה מדיום צמיחת שורשים שעירים ואנטיביוטיקה לדיכוי צמיחה אגרובקטריאלית. אוטמים את התבשיל בסרט חדיר לגז לפני הדגירה על 24 מעלות צלזיוס. לאחר הדגירה, בודדו את השורשים השעירים מהיבלת, והעבירו את השורשים הבודדים למדיום צמיחה של שורשים שעירים.
לחלופין, כדי ליצור צמח מורכב המורכב נבטים מסוג בר ושורשים שעירים טרנסגניים, להסיר את השורשים המקומיים של הצמח. לאחר מכן העבירו את הצמח עם שורשים שעירים לתיבת תרבית המכילה מדיום גידול צמחים ואנטיביוטיקה לדיכוי צמיחה אגרובקטריאלית.
