הערכת קטלניות ורעילות עצבית-שרירית של כימיקלים בעוברים של דגי זברה באמצעות בדיקת בהלת רטט

כדי להתחיל, לאסוף את העובר דג זברה ולגדל אותם עד 72 שעות לאחר ההפריה באינקובטור ב 28.5 מעלות צלזיוס. בו זמנית להכין את הכימיקלים להיבדק בריכוז הרצוי. בדקו את העוברים 72 שעות לאחר ההפריה.

הסר עוברים מתים או שלא בקעו. מניחים 10 עוברים בכל צלחת תרבית רקמה של שישה סנטימטרים עם תשעה מיליליטר של מדיום E3. אלה נקראים לוחות חשיפה.

תייגו כל לוחית חשיפה בשם התרכובת, ריכוז חשיפה ושכפלו את המספר. הוסיפו מיליליטר אחד של תמיסת חשיפה לכל צלחת, החל מהריכוז הנמוך ביותר וערבלו בעדינות את הצלחת. עבור תרכובות עם מסיסות נמוכה, החלף את כל 10 מיליליטר של המדיום בתמיסת החשיפה.

תיעדו את הרצף שבו התמיסות המורכבות נוספו לעוברים, ואז דגרו על הלוחות בתא הלח בתוך אינקובטור בטמפרטורה של 28.5 מעלות צלזיוס במשך 48 שעות. כדי להתחיל את בדיקת בהלת הרטט, הפעל את המחשב ואת התקן הרטט. צור גיליון אלקטרוני עבור קובץ התצורה.

כלול נתוני חשיפה לכל אחד מחמשת מיקומי הלוחות, תוך ציון תרכובת, ריכוז ושכפול. פתח את ממשק המשתמש הכללי, או תוכנית ממשק המשתמש הגרפי, עבור ערכת בדיקת הבהלה של הרטט. בחר מיקומים שונים בתוכנית ממשק המשתמש הגרפי כדי לבדוק את תנועת המצלמה ולצפות בתגובת המצלמה.

הסר את צלחת הדגימה מהאינקובטור. הניחו אותם בחמש התנוחות המיועדות והניחו לעוברים להסתפק במספר דקות. בתוכנית ממשק המשתמש הגרפי, לחץ על הקלט והחלון החדש יופיע.

בחלון זה, בחר את קובץ התצורה שהוכן קודם לכן. ודא שתיאור הדוגמה תואם לדוגמאות בכל מיקום. שימו לב שנורית ה-LED נדלקת כאשר דופק הקול מופעל על ידי התוכנית.

לאחר ההקלטה, המצלמה תחזור למצב הראשון, והתוכנה מתחילה לדחוס את הקבצים. החלף את הדגימות שנמדדו בקבוצה הבאה והמשך לריצה הבאה כפי שהודגם . לאחר מכן אספו את תמיסות החשיפה מכל הלוחות שנמדדו, באמצעות מסננת כדי לשמור בו זמנית על העוברים.

כדי להתחיל את ניתוח הנתונים, פתח את נתוני הווידאו באמצעות דיבוב וירטואלי או תוכנת צפייה אחרת. ניקוד חזותי של מספר העוברים המגיבים לדופק הקול. רשום את שם התרכובת, השכפול, ריכוז התרכובת ואחוז העוברים התנועתיים בגיליון האלקטרוני.

בצע את ניתוח ריכוז הביצועים באמצעות זרימת עבודה של KNIME עם סקריפטים מוטבעים R. הערכה של חוסר תנועתיות בעוברים מסוג בר שלא טופלו הראתה חוסר תנועתיות ממוצע של 14.33% כאשר היו נתונים לגירוי רטט, עם שינויים בין מצמדים שונים. חישובי ריכוז הייחוס של השפעות טריקאין על תנועתיות הראו ירידה בתנועתיות בריכוז של 1%, הפסקת פעילות מעל 2.5% עם ריכוז בנצ'מרק 50 של 164.9 מיקרוטוחן.

דוגמה לבדיקה תת-אופטימלית הראתה חוסר עקביות בתגובות העובר, מה שמרמז על בעיות התפתחותיות המשפיעות על חוסנה של תגובת הבהלה.