כדי להתחיל, לקחת את עצם הירך, שוקה, האגן, ואת עצמות humerus מבודד עכבר. השתמש אזמל לחתוך דרך לוחות הצמיחה של עצמות ארוכות, הסרת epiphysis. הניחו אותו בכלי של 10 ס"מ עם M199 בינוני ועוד 2% FBS על קרח.
לאחר מכן, השתמש במחט של 28 מד ובמזרק של 10 מיליליטר מלא בתווך M199 בתוספת 2% FBS כדי לשטוף את המח לתוך צינור של 15 מיליליטר על קרח. מניחים את העצם סמוקה בצלחת עם epiphysis. השאירו את צינור ה-15 מיליליטר זקוף על קרח עד שהמח שוקע.
לאחר מכן הסר את מדיום M199 בתוספת 2% FBS הוסף ארבעה מיליליטר של קוקטייל הדיסוציאציה B&M לצינור 15 מיליליטר ודגר באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס. לאחר הדגירה, לאסוף את supernatant ולסנן דרך מסננת תאים 70 מיקרומטר לתוך צינור קר 50 מיליליטר. הוסיפו שני מיליליטר של קוקטייל דיסוציאציה B&M טרי לגלולת מח העצם שנותרה והחזירו אותה לאמבט המים.
באמצעות פיפטה של מיליליטר אחד, פיפטה נמרצת כל חתיכות מח עצם שנותרו. אספו את כל תרחיף התאים באותו צינור כמו קודם. הוסף 20 מיליליטר של M199 בינוני עם 0.5% BSA, ו- EDTA של שני מילימולרים לתרחיף התא.
לאחר מכן, צנטריפוגו את התאים ב 500 G במשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס. השהה מחדש את הגלולה ב 500 מיקרוליטר של PBS עם 0.5% BSA ונוגדנים ביוטין. יש לדגור על שייקר אורביטלי למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר בחושך.
לאחר מכן, מערבלים את החרוזים המגנטיים ביסודיות. מוסיפים 25 מיקרוליטר של החרוזים לצינור ודגרים שוב על השייקר המסלולי. מניחים את הצינור במגנט תואם למשך שתיים עד שלוש דקות ואוספים את הסופרנאטנט בצינור טרי.
שברו את העצמות לחתיכות קטנות יותר בכלי של 10 ס"מ באמצעות קצה המכסה השטוח של צינור 50 מיליליטר. סננו את הסופרנאטנט דרך מסננת תאים של 70 מיקרומטר כדי לבודד שברי עצם. חותכים את שברי העצם במסננת התא עם מספריים.
מניחים את המסנן עם שברי העצם על צינור 50 מיליליטר ופותחים את המסנן עם האזמל. בעזרת פינצטה, מעבירים את חלק העצם לחמישה מיליליטר של תערובת דיסוציאציה B&M מורין. לאחר מכן הניחו את הצינור אופקית באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס עם 120 סל"ד רועד במשך 30 דקות.
לאחר העיכול, להוסיף 25 מיליליטר של M199 בינוני עם 0.5% BSA ושני מילימולרי EDTA. סננו את הסופרנאטנט המכיל תאי סטרומה דרך מסננת תאים של 70 מיקרון לתוך צינור קר של 50 מיליליטר.
