תרבית תאים תלת ממדית של תאי גזע שמקורם בשומן בהידרוג'לים להגדלת גדילה

כדי להתחיל להעביר 44 מיליליטר של מדיום בסיסי לתוך צינור צנטריפוגה 50 מיליליטר. הוסף 5 מיליליטר של 10% FBS למדיה. ואז פיפטה 0.5 מיליליטר כל אחד של פניצילין סטרפטומיצין ו amphotericin B פתרונות אנטיביוטיים.

צנטריפוגה בקבוקון המכיל תמיסת Dexstran מהירה ב-1000G למשך 30 שניות ב-20 מעלות צלזיוס. הוסף 175 מיקרוליטר מים לבקבוקון כדי לקבל ריכוז סופי של 30 מילימולים לליטר. מערבלים את הצינור למשך 30 שניות במהירות בינונית עד להמסה מלאה של החומר.

דוגרים על החומר המומס על קרח במשך חמש דקות. צנטריפוגו את הצינור לפני ערבול תכולתו שוב. לאחר מכן הניחו את הצינור על קרח עד לשימוש נוסף.

לאחר מכן, צנטריפוגה את crosslinker כדי לרכז את החומר. פיפטה 188 מיקרוליטר מים לבקבוקון הקרוסלינקר כדי להשיג ריכוז סופי של 20 מילימולים לליטר של קבוצות תיול. מערבלים את תמיסת הקרוסלינקר עד שכל החומר מומס.

צנטריפוגה הצינור לאחר הדגירה. לאחר מכן מערבלים לזמן קצר לפני הצבתו בטמפרטורת החדר עד לשימוש נוסף. לאחר מכן, הכינו את תרחיף תאי הגזע שמקורו בשומן עבור 10 מיקרוליטר הידרוג'ל כפי שניתן בטבלה כדי ליצור תערובת מאסטר.

מעבירים תשעה מיקרוליטרים של תערובת המאסטר לבאר בצלחת רצועה 96. לאחר שלוש דקות, מוסיפים מיקרוליטר אחד של הקרוסלינקר המתכלה לתערובת כדי למצק את הג'ל. פיפטה. 170 מיקרוליטר של תרבית שלמה שחוממה מראש מעל ההידרוג'לים.

החלף את מדיום התרבית לאחר הדגירה.