ניתוח תפקוד מיטוכונדריאלי בטיפול פוטודינמי אנטי פטרייתי המושרה מושבות קטנות של קנדידה גלברטה

כדי להתחיל, מקם את תרבות קנדידה גלברטה ואת מדיום YPD על פלטפורמת עבודה. התאם את הצפיפות האופטית של תרחיף תאי שמרים ב-600 ננומטר ל-0.65 עם תווך YPD. מערבבים מיליליטר אחד של תרחיף שמרים עם 111 מיקרוליטר של 2% רוז בנגל בצינור עגול.

דוגרים על התערובת ב-25 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות, מסתובבים בזווית של 45 מעלות ב-155 סל"ד. לאחר הדגירה, להעביר את התערובת צינור 1.5 מיליליטר, צנטריפוגה ב 16, 100 גרם במשך 2.5 דקות. השליכו את הסופרנאטנט וגרדו בעדינות את הצינור חמש פעמים כדי להשהות מחדש את הכדור.

שטפו את המתלה עם PBS ארבע פעמים כדי להסיר את כל הוורד בנגל. לאחר השטיפה הסופית, העבירו 200 מיקרוליטר של תרחיף שמרים טעון רוז בנגל לכל אחת משלוש הבארות בצלחת באר 96. מקמו את הצלחת על מערכת התאורה הפוטודינמית עם נורות לד המאירות אור ירוק מלמטה.

הפעל את מערכת תאורת ה- LED כדי לספק את מינון הטיפול הפוטודינמי של 4.38 ג'אול לסנטימטרים רבועים במשך שתי דקות. לאחר ההקרנה להוסיף 20 מיקרוליטר של שמרים תרחיף לבאר המכילה 180 מיקרוליטר של PBS, יצירת דילול פי עשרה. עבור כל גורם דילול, צלחת 20 מיקרוליטר לרביע על לוחות אוגר YPD.

הופכים את הצלחת ודגרים למשך הלילה בחום של 37 מעלות צלזיוס. למחרת, ספרו את מספר המושבות בכל רביע. באמצעות הנוסחה הנתונה, חשב את יחידות יצירת המושבה למיליליטר.

הוסיפו 20 מיקרוליטר של 20% טריפניל טטרזוליום כלוריד ישירות למרכז כל מושבה ודגרו בחום של 37 מעלות צלזיוס למשך 30 עד 40 דקות. סרוק לוחות ב- 1, 200 DPI באמצעות סורק אופטי בצבע מלא של 48 סיביות. לאחר הכנת תרחיף שמרים TZero בשלב צמיחת הפיגור, חשפו אותם ל-4.38 ג'אול לסמ"ר של אור ירוק בנוכחות 0.2% רוז בנגל.

ציין את הפטריות ששרדו כ- T-1. חשוף את הפטריות ששרדו לאותו מינון PDT. מוטנטים קטנים של C-Glabrata הציגו צמיחה איטית יותר בהשוואה לפטריות הוריות לא מטופלות בגודל רגיל.

טיפול פוטודינמי אנטי-מיקרוביאלי יחיד עיכב באופן משמעותי את צמיחת C-Glabrata בשלוש פיגורים בהשוואה לקבוצת הביקורת. C-Glabrata, 24 שעות לאחר טיפול פוטודינמי מיקרוביאלי הטיפול הציג התפלגות גודל מושבה בימודאלית עם מושבות קטנות גדולות וקטנות. המושבות הקטנות ששמרו על צבע לבן הפגינו תפקוד לקוי של המיטוכונדריה, בעוד שכמה מושבות קטנות יותר בצבע אדום ומושבות בגודל רגיל שמרו על תפקוד מיטוכונדריאלי תקין.