כדי להתחיל, לארגן את כל החומרים הדרושים להעברת enteroids מעיים אנושיים, או HIEs, על פלטפורמת העבודה. ערבבו את ה-HIEs עם מטריצת תרבית תלת-ממדית מופחתת גורם גדילה. זרעו את התערובת על צלחת של 24 בארות עם שלוש טיפות של 10 מיקרוליטר של מטריצת תרבית תלת ממדית לכל באר ודגרו במשך 20 דקות בחום של 37 מעלות צלזיוס.
לאחר מכן להוסיף 350 מיקרוליטר של מדיום הגידול HIE. לאחר שבעה ימים, לאסוף HIEs מארבע בארות לתוך צינורות 1.5 מיליליטר. צנטריפוגו את ה-HIE ב-2000 גרם למשך 40 שניות כדי לפנות את הפסולת.
באמצעות פיפטה, להסיר את מטריצת תרבית 3D מוגזם מן הצינור. הוסף 0.5 מיליליטר של PBS קר לתוך הצינור. באמצעות מזרק אינסולין של מיליליטר אחד, הפעילו מערבולות פיזיות על ידי מזרק עד 10 פעמים כדי לנתק את ה- HIEs.
צנטריפוגו את ה-HIE המנותק במשקל 2000 גרם למשך 40 שניות והוציאו בעדינות את הסופרנטנט. לאחר מכן מניחים את הצינור על קרח למשך כשלוש דקות. הוסף גורם גדילה מטריצת תרבית תלת ממדית מופחתת לצינור וערבב אותה עם הכדורית.
זרעו את תערובת ה-HIE במטריצת התרבית התלת-ממדית במרכז צלחת עגולה בקוטר 35 מילימטר. לדגור על המנה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 20 דקות כדי לחזק את מטריצת תרבית 3D. לאחר מכן הוסיפו לצלחת שני מיליליטר של מצע גידול אורגנואיד מחומם מראש במעי ודגרו בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני למשך 48 שעות.
ביום השלישי, החליפו את מדיום הגידול בשני מיליליטר של מדיום התמיינות שחומם מראש ודגרו בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני למשך 48 שעות. ביום החמישי, החליפו את מדיום האנטרואידים בשני מיליליטר של מדיום התמיינות שחומם מראש והמשיכו בדגירה במשך 24 שעות.
