כדי להתחיל, שחררו את העכבר המוזרק בצבע כחול ברומופנול מהמסגרת הסטריאוטקסית. לאחר ההרדמה, אבטחו את העכבר על לוח קצף בעזרת נייר דבק. בצע חתך של מילימטר עד שני מילימטר בתוספתן פרוזדורים ימני.
הכנס מחט עירוי לחדר השמאלי. מועשר 20 מיליליטר של מלוחים מקוררים מראש, ואחריו 20 מיליליטר של תמיסת 4% פרפורמלדהיד קרה. עכשיו לעשות חתך לאורך קו האמצע מן הצוואר אל האף כדי להסיר את העור ולחשוף את הגולגולת.
השתמש במלקחיים או מספריים כדי לנקות שאריות שריר על הגולגולת. מניחים את קצה להב אחד של המספריים העדינים בין הפתח מגנום למוח עם קצה חד מול העצם בקצה הרוסטרלי של התפר האמצעי. מחליקים בעדינות וחותכים את הגולגולת לאורך התפר האמצעי.
השתמש במלקחיים כדי להסיר את הגולגולת, לחשוף את המוח. לאחר הפעלת הקריוסטט הסיבובי של המיקרוטום, הגדר את טמפרטורת החדר למינוס 20 מעלות צלזיוס. יוצקים מעט טמפרטורת חיתוך אופטית, או תרכובת OCT, כדי לכסות את פני השטח של דיסק הדגימה באופן שווה.
הכניסו את דיסק הדגימה לתא ההקפאה ואפשרו ל-OCT להתמצק. חבר את הדיסק לראש הדגימה. לאחר מכן, קרב את הלהב לבלוק וחתוך את בלוק OCT כדי ליצור מישור שטוח מקביל לדיסק.
בעזרת להב גילוח, חותכים את המוח בכיוון העטרה הרחק מאתר ההזרקה, בתבנית פרוסת מוח. הניחו את רקמת המוח המכילה את אתר ההזרקה, עם הצד החתוך כלפי מטה, על המישור השטוח OCT. שפכו OCT על המוח, והכניסו את הדיסק לתא ההקפאה, מה שמאפשר לגוש הדגימה להתמצק.
חתוך את גוש הדגימה עד שאזור המטרה מתקרב, וצור מספר מקטעים מרמת אתר ההזרקה. השתמשו במברשת כתיבה קטנה וצוננת כדי לאסוף את פרוסות המוח העטרה לתוך צלחת בת שש בארות המכילה PBS בטמפרטורת החדר. בעזרת מברשת, הרימו את חלקי המוח מצלחת שש הבארות והניחו אותם על שקופית.
לאחר הייבוש, ויזואלית, התבוננו באזור המוזרק בחלקי המוח.
