התחל על ידי הכנת מדגם עם קומפלקס ליגנד חלבון. לאחר מכן, באמצעות פיפטה, בזהירות להעביר 0.6 מיליליטר של הפתרון מוכן לתוך צינור NMR חמישה מיליליטר. כדי להגדיר את מכשיר ה- NMR לטמפרטורה הנדרשת, השתמש בפקודה EDT כדי לפתוח את צג בקרת הטמפרטורה ולהתאים את הטמפרטורה הרצויה.
לאחר מכן, מקם את הדגימה במחליף הדגימה. השתמש בדוגם אוטומטי כדי להכניס את הדגימה למגנט ולהפעיל את הפקודה sx, ואחריה את מספר המיקום, N, המתאים למיקום של צינור NMR במגש הדוגם האוטומטי. לאחר מכן, הדגימה נכנסת למגנט NMR.
כדי לנעול את אות הממס, הקלד את פקודת הנעילה ובחר את הממס המתאים מהתפריט. השתמש במודול האוטומטי, atma, או במודול הידני, atmm, כדי להשלים את תהליך הכוונון וההתאמה. כעת, באמצעות פקודת topshim, התחל את השיימינג האוטומטי, ולאחר מכן בצע את פקודת הדופק כדי לקבוע את דופק הפרוטון 90 מעלות.
לאחר מכן, צור ערכת נתונים חדשה והעלה את רצף הדופק STD NMR. הגדר את תדרי התהודה כבויים ומופעלים עבור ניסוי STD NMR תחת הערך FQLIST בחלון ACQUPARS. הגדר את תדר התהודה באזור ללא אותות ליגנד או פרוטונים חלבוניים.
לאחר מכן, בחר תדר תהודה באזור ספקטרלי נטול אותות גליקנים. הגדר את הפולס המעוצב שישמש בזמן הרוויה בפרמטרים ACQUPARS בחלון ASED. לאחר מכן, הגדר את אורך הדופק של הפרוטון 90 מעלות, התאם את זמן הרוויה הכולל ואת עיכוב ההרפיה לשלוש שניות.
הגדר את מספר הסריקות לכפולה של שמונה ואת סריקות הדמה לשמונה. לאחר מכן, הגדר את מספר הנקודות ב- F2 ל- 16K, 32K או 64K, ו- F1 לשתיים. כעת, באמצעות הפקודה האוטומטית rga, הגדר את רווח המקלט כדי למנוע הצפה.
חשב את זמן הניסוי הכולל באמצעות פקודת הניסוי. לבסוף, השתמש בפקודה zg כדי לשלוח את הניסוי לרכישה. לאחר הניסוי, בצע את התמרת פורייה של ה- FID הראשון, ובחר את היעד של הספקטרום המעובד.
לאחר מכן, באמצעות הפקודה lb, התאם את גורם הרחבת הקו. כדי לשלב את הספקטרום באופן ידני, גש לכרטיסיית התהליך ולאחר מכן לתפריט המשנה שלב ההתאמה. לחץ וגרור על הכפתור המתאים כדי לבצע תיקוני אפס וסדר ראשון ולשמור את תוצאות השלבים.
לאחר ביצוע התמרת פורייה עבור הניסוי השני, שמור את הספקטרום המעובד עם קוד אחר. טען את שני הספקטרום המעובד עם הפונקציות המרובות, ובאמצעות לחצן החיסור הזמין בפריטים החזותיים המרובים, החסר אותם. לאחר מכן, פתח את ספקטרום התהודה הכבוי ובצע את הפקודה MD כדי להפעיל את חלון התצוגה המרובים.
לאחר מכן, העלה את ספקטרום מחלות המין. לאחר מכן, בצע ניתוח השוואתי של התדרים והעוצמות של האותות הקיימים בספקטרום STD NMR. בניסוי מחוץ לתהודה, מדדו את עוצמות האות.
נווט בתפריט כדי לבחור תהליך ולאחר מכן שלב. הגדר בקפידה את אזורי העניין ורשום את האינטגרלים בקובץ. באופן דומה, למדוד את העוצמות בניסוי STD NMR, לוודא שנעשה שימוש בפרמטרים זהים, ולתעד אינטגרלים אלה בקובץ נפרד.
לחלופין, ניתן לקבוע ערכי STD על ידי השוואת עוצמות האות בין ספקטרום התהודה החריגה לבין ספקטרום התהודה הכבויה. לחישוב מחלת המין היחסית כאחוזים, הקצו ערך של 100% לפרוטון המציג את עוצמת STD המרבית. ספקטרום הפרוטון STD NMR לאינטראקציה של אמין N-אצטיל לקטוז, עם גלקטין 7 אנושי, הראה אותות NMR STD המעידים על קשירה.
יתר על כן, אותות השייכים לפרוטונים במגע הדוק עם החלבון הופיעו, ואפשרו תיחום של האפיטופ הקושר.
