הכנת מדיה מותנית של תאי קרום המוח האנושיים (HMC) ואיסוף נוזל מוחי שדרתי לתרבית תאי גידול במחזור הדם

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

47 Views

•

01:51 min

•

March 29th, 2024

DOI :

10.3791/201628-v

March 29th, 2024

•

Vincent Law¹^,², Inna Smalley³, Brittany R. Evernden², Margaret Baldwin⁴, Keiran S. M. Smalley¹, Peter A. Forsyth¹^,²

¹Department of Tumor Biology, University of South Florida, H. Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute, ²Department of Neuro-Oncology, University of South Florida, H. Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute, ³Department of Cancer Physiology, University of South Florida, H. Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute, ⁴Department of Comparative Medicine, University of South Florida, H. Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute

Transcript

בתור התחלה, צפו מראש בקבוק T175 בפולי-ל-ליזין. מניחים את הבקבוק באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס למשך שעה אחת. כעת השתמשו בפיפט סרולוגי סטרילי כדי לשאוף את תמיסת הליזין.

פיפטה 30 מיליליטר להשלים מדיום תרבית קרום המוח המכיל תאי קרום המוח האנושיים לתוך הצלוחית. לדגור על התאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס תחת תוספת של 5% פחמן דו חמצני. כאשר התאים מגיעים למפגש של 75% עד 80%, אספו ושמרו את המדיה התרבית של HMC בצינור חרוטי של 50 מיליליטר.

לאחר מכן יש להוסיף מדיום שלם של תרבית קרום המוח לצינור ביחס של אחד לאחד. לבסוף, פיזרמו את גורמי הגדילה לתוך הצינור כדי ליצור את המדיה המותנית של HMC. כדי לעבד את נוזל עמוד השדרה המוחי, הניחו אותו תחילה בצינור חרוטי של 15 מיליליטר על קרח כדי לקרר אותו.

צנטריפוגה את הנוזל בצנטריפוגה מקוררת מראש ב 257 G במשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס. פיפטה החוצה את supernatant מבלי להפריע את גלולת התא ולעשות aliquots ממנו צינורות שונים. כעת הוסף מיליליטר אחד של PBS לגלולת התא כדי להשעות אותו.

צנטריפוגה את התאים ב 1, 500 גרם במשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס. שאפו את הסופרנאטנט PBS תוך השארת כ-50 מיקרוליטר ממנו בתחתית הצינור. בצע ספירת תאים עם תרחיף התאים לפני תרבית התאים.

מספר גורמי גדילה היו upregulated בתקשורת תרבית עם תאי קרום המוח האנושיים.

Explore More Videos

Human Meningeal Cells

HMC Conditioned Media

Cerebrospinal Fluid

T175 Flask Preparation