כדי לבצע את תגובות המבחנה הדו-שלבית המקבילות של המכלול המודולרי מבוסס הקריספר או CRISPRmass, המשך לבקע את עמוד השדרה הווקטורי הזהה של פלסמידים cDNA/ORF על ידי Cas9 sgRNA בתגובת מבחנה שלב ראשון. לשם כך, סדרו צינורות 0.2 מיליליטר מסומנים כראוי בבלוק קירור אלומיניום על קרח. הכינו את תערובת האב למספר N של תגובות על ידי ערבוב כמויות מתאימות של Cas9, sgRNA, מאגר Cas9 ומים שטופלו ב-DEPC.
לאחר הוספת רכיבי תערובת האב יחד, מערבלים אותו דבר כדי להבטיח ערבוב נכון. לאחר מכן סובבו את התערובת וחברו שני מיקרוליטרים של תערובת האב לכל צינור של 0.2 מיליליטר. לאחר מכן, הוסף 0.4 מיקרוליטר של פלסמיד cDNA/ORF 0.019 מיקרומולרי לכל צינור.
לדגור על תגובות מחשוף ב 37 מעלות צלזיוס במשך שעה אחת. בתגובת המבחנה הבאה, שלב שני, המשך להחדיר מודול UAS ספציפי לווקטור לתוך פלסמידים cDNA/ORF ליניאריים Cas9 המתקבלים. כדי להגדיר את תגובת הצעד הבודד של 1.4 מיקרוליטר עבור כל דגימה, סדרו את צינורות ה-0.2 מיליליטר המסומנים בבלוק קירור אלומיניום על קרח.
הכן את תערובת האב למספר N של תגובות על ידי ערבוב כמויות מתאימות של מודול כטב"ם ותערובת מאסטר להרכבת תגובה חד-שלבית. מערבבים את התערובת היטב לפני שמסובבים אותה. לאחר מכן aliquot 0.77 מיקרוליטר של תערובת האב לכל צינור.
הוסף 0.7 מיקרוליטר של פלסמיד cDNA/ORF ליניארי Cas9 לאליקוט בכל צינור ודגר על תגובות ב 50 מעלות צלזיוס למשך שעה אחת.