צביעה, השקיה וחדירה של אורגנואידים קבועים ברשתית להכנת דגימת TEM

כדי להתחיל להכתים את אורגנואידי הרשתית הקבועים, או ROs, עבור מיקרוסקופ אלקטרונים הולכה, השתמש פיפטה כדי להסיר את חומצת אוסמיום שנוספה בעבר לאורגנואידים בצינור מיקרוצנטריפוגה במהלך לאחר קיבוע. לאחר מכן, שטפו את ה-ROs עם PBS טוחנת 0.01 ב-pH 7.4 שלוש פעמים במשך 10 דקות כל אחת, ולאחר מכן שטפו במים נטולי יונים, שלוש פעמים במשך 10 דקות כל אחת. הסר את שטיפת המים האחרונה deionized, להחליף אותו עם כ 150 מיקרוליטר של אצטט אורניום כתמים במשך שעה עד שעתיים בטמפרטורת החדר.

לאחר מכן, במכסה אדים, להסיר את אצטט אורניום ולהחליף אותו עם מיליליטר אחד של 50% אצטון כדי לייבש את הדגימות במשך 10 דקות. לאחר מכן, בצעו התייבשות הדרגתית באמצעות 70%80%90% ופעמיים 100% אצטון ברצף, כל אחת במשך 10 דקות. לאחר התייבשות הדרגתית, להשליך את שאריות אצטון ולהוסיף כ 150 מיקרוליטר של תערובת של אצטון שרף Epon-812.

מכניסים את הצינור לתנור בטמפרטורה של 18 מעלות למשך שעה. לאחר הסרת תערובת שרף האצטון הקודמת, החלף אותה בהרכב אחר של אצטון ותערובת שרף אפון-812. הפעם, לדגור על הצינור ב 37 מעלות צלזיוס במשך הלילה.

לבסוף, העבירו את אורגנואידי הרשתית לצינור חדש המכיל כ-500 מיקרוליטר של שרף אפוקסי טהור, בזהירות. ולדגור ב 45 מעלות צלזיוס במשך שעה אחת לפני שתמשיך עם הטבעה אורגנואידים.