התמיינות של מקרופאגים שמקורם במח עצם בילוד באמצעות סופרנאטנט של תאי L929

בתור התחלה, זרעו 20 מיליון תאי מח עצם של עכבר יילוד לכל בקבוק T75 ב-10 מיליליטר של DMEM מלא המכיל 2.5 מיליליטר של 10%L929 תאים סופרנטנטים. לדגור על בקבוק התרבית בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני במשך חמישה ימים. ביום השלישי של הבידול, הוסיפו שני מיליליטר של מדיה מותנית L929 לצלוחית.

תחת מיקרוסקופ הפוך עם הגדלה של פי 20, התבוננו מדי יום בתאים. כדי לקצור את המקרופאגים ביום החמישי, שאפו את אמצעי ההבחנה מהצלוחית. שטפו את התאים עם חמישה מיליליטר PBS כדי להסיר תאים לא דבקים וחלבונים בסרום.

הוסף חמישה מיליליטר של 0.05% טריפסין EDTA לבקבוק ודגור ב 37 מעלות צלזיוס אינקובטור עם 5% פחמן דו חמצני. לאחר חמש דקות, להוסיף חמישה מיליליטר של DMEM ופיפטה כדי לנתק את התאים. צנטריפוגה את תרחיף התא ב 350 גרם במשך חמש דקות.

נתק את חיך התא במיליליטר אחד של DMEM מלא. ספור את התאים במונה תאים אוטומטי. בנוכחות תא L929 סופרנטנט, תאי מח עצם התמינו למקרופאגים בתוך חמישה ימים.

היווצרות תאים בצורת ציר נצפתה מהיום השני, כאשר כמעט מחצית הציגו מורפולוגיה זו ביום השלישי ורובם ביום החמישי.