בידוד תאים חד-גרעיניים מדם שלם להשגת תאים דמויי מיקרוגליה מושרים לחקר המוח

כדי להתחיל, לשים 15 מיליליטר של מדיום שיפוע צפיפות בצינור צנטריפוגה 15 מיליליטר ולסובב אותו ב 1, 000 G במשך דקה אחת ב 20 מעלות צלזיוס. הפכו את הצינורית המכילה דם אנושי שנאסף בהפרין, ובעזרת פינצטה מעוקרת אש, הסירו את המכסה מצינורית איסוף הדם. יש לפזר כ-10 עד 15 מיליליטר דם למדיום שיפוע הצפיפות בצינור.

הגדר את רמת ההאטה של הצנטריפוגה לאחד וצנטריפוגה את הצינור עם דם ב 1, 000 G במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. הסירו את השכבה העליונה של הפלזמה עד סנטימטר אחד מעל הפרווה הבאפי. דקנט את יתרת הסופרנאטנט מצינור הצנטריפוגה לצינור צנטריפוגה אחר המכיל 10 מיליליטר PBS.

אפסו את רמת ההאטה של הצנטריפוגה לשלוש וצנטריפוגו את הצינור עם PBS וסופרנטנט. שאפו את הסופרנאטנט וטפחו בעדינות על הצינור כדי לשחרר את הכדור. לאחר מכן, שלבו 13 מיליליטר של אמצעי בידוד בצינור הצנטריפוגה ושטפו את הדופן הפנימית כדי לאסוף את התאים כראוי.

באמצעות פינצטה מעוקרת אש, מקם מסננת תאים של 100 מיקרומטר על צינור חרוטי 15 מיליליטר. לאחר מכן סנן את תרחיף התא דרך מסננת התא לתוך צינור חרוטי 15 מיליליטר. יש לפזר כמויות שוות של תרחיף תאים לשני צינורות חרוטיים בקוטר 15 מיליליטר.

ספרו את התאים כדי לחשב את הריכוז המתאים של מאגר הבידוד. גלולה את התאים ב 250 גרם במשך 10 דקות בארבע מעלות צלזיוס. לאחר הסרת הסופרנטנט, מוסיפים את הכמות המתאימה של חיץ בידוד ופיפטה בערך 20 פעמים כדי לשחרר את הכדורית.