כדי להתחיל, להוסיף 1.5 מיליליטר של 70% אתנול ל 30 מיליגרם של חלקיקי טונגסטן 0.7 מיקרומטר במיקרו-צינור. צנטריפוגה את התערובת ב 13, 200G במשך 15 דקות. הוסיפו 1.5 מיליליטר מים סטריליים לחלקיקים, ואז שוב מערבולות וצנטריפוגות.
לאחר השלכת הסופרנטנט, הוסיפו 500 מיקרוליטר של גליצרול סטרילי 50% לחלקיקי הטונגסטן. כדי לצפות את החלקיקים, תחילה הוסיפו חמישה מיקרוגרם של פלסמיד שני מיקרון ו-15 מיקרוגרם של פלסמיד חיידקי המכיל את הרצף המיטוכונדריאלי לתוך מיקרו-צינור המונח על קרח. הוסף 100 מיקרוליטר של תרחיף חלקיקי טונגסטן לצינור ולמערבולת.
לאחר מכן להוסיף ארבעה מיקרוליטרים של זרע טוחנת אחת מערבולת שוב. עכשיו פיפטה 100 מיקרוליטר של 2.5 סידן כלורי קר כקרח לתוך הצינור. לאחר ערבוב קצר של המתלים, דוגרים אותו על קרח במשך 10 דקות.
צנטריפוגה חלקיקי טונגסטן ב 13, 200G במשך 30 שניות בארבע מעלות צלזיוס. לאחר מכן, לשטוף את החלקיקים ב 200 מיקרוליטר של 100% אתנול במינוס 20 מעלות צלזיוס. לבסוף, להשהות מחדש את חלקיקי טונגסטן ב 60 עד 70 מיקרוליטר של טמפרטורת החדר 100% אתנול.
כדי להכין את החומרים הביולוגיים, הניחו שישה מחזיקי מקרו-נשא מעוקרים על צלחת זכוכית סטרילית. השתמש בזוג מלקחיים סטריליים כדי להכניס את נושאי המקרו לכל אחד מששת מחזיקי המקרו-נשאים. פיפטה 10 מיקרוליטר של חלקיקי טונגסטן מקודדי DNA על כל משטח מקרו-נשא ומתפזרת באופן שווה על פני השטח כולו עם קצה הפיפטה.
חסן את זן קולטן השמרים rho zero בשני מיליליטר של תווך YPR. הגדילו את התרבית בן לילה ב-30 מעלות צלזיוס בגלגל מסתובב. למחרת, להעביר 300 מיקרוליטר של התרבית לתוך צינור המכיל 30 מיליליטר של מדיום YPR טרי.
מניחים את התרבית על שייקר סיבובי למשך שני לילות בטמפרטורה של 30 מעלות צלזיוס ו-200 סיבובים לדקה עד שהתרבות רוויה. צנטריפוגו את תאי השמרים ב-600 גרם למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. להשהות מחדש את התאים ב 600 מיקרוליטר של מדיום YPD לאחר השלכת supernatant.
כעת השתמשו בידית זכוכית סטרילית כדי לפזר 100 מיקרוליטר של תרחיף תאי השמרים על צלחת בינונית להפצצה מוצקה. לאחר פיזור כל התרביות, דוגרים על הצלחות בטמפרטורת החדר למשך שעה עד שלוש שעות לפני ההפצצה.
