כדי להתחיל, להשיג תרבית תאים PANC-1 ולשטוף את התאים עם תשעה מיליליטר של תמיסת מלח מאוזנת של האנק במרווחים של שלושה מיליליטר. לדגור את התאים עם שני מיליליטר של טריפסין במשך כ 10 דקות. כדי לנטרל את המתלים, הוסף שלושה מיליליטר של DMEM בתוספת 10% FBS.
לאחר שטיפת התאים שבע פעמים במרווחים של מיליליטר מדיה, יש לאסוף כל אליקוט מנוטרל בצינור של 15 מיליליטר. באופן דומה, להשיג תאי סטלט לבלב אנושיים טריפסיניים, או HPaSteC, באמצעות תמיסת נטרול טריפסין ומדיה תאית סטלט. ערבבו את הכמות הנדרשת של שני מתלי התאים ב-11 מיליליטר DMEM עם 10% FBS תוך הימנעות מהיווצרות קצף.
יש לפזר בעדינות 100 מיקרוליטר של תערובת תרחיף תאים לתוך צלחת התרבית ולדגור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני. ביום השלישי, הוסף 50 מיקרוליטר DMEM עם 10% FBS לכל באר לאורך הצד של הבאר. ביום 10 או 11, שאפו את המדיה המשומשת מבלי להפריע לתמיסה ליד ההילה והוסיפו 100 מיקרוליטר של מדיה טרייה לאורך הצד של כל באר.
ביום ה-14 או ה-17, באמצעות פיפטה של מיליליטר אחד, מוציאים את המדיה מכל באר עד שמגיעים להילה. יישרו את הצלחת על רקע מכסה המנוע כדי לאתר את הספרואידים בתחתית. פיפטה עדינה סביב 50 מיקרוליטר של מדיה ליד הספרואידים כדי להפריע לו לאיגום.
הספרואידים שהתקבלו ביום ה-14 נמצאו גדלים לנפח ממוצע של 0.048 מילימטרים מעוקבים.
