כדי להתחיל, להשיג עוברים דגי זברה מוזרקים עם תאי לוקמיה מוכתמים עם CM-Dil. מעבירים את העוברים המורדמים לצינור צנטריפוגה של 1.5 מיליליטר ובאמצעות פיפטה P200 ממיסים את החלמון ב-100 מיקרוליטר של תמיסת רינגר ללא סידן למשך חמש דקות. לדגור על כל דגימה של עוברים חלמונים עם מיליליטר אחד של תמיסת טריפסין collagenase ב 29 מעלות צלזיוס במשך 30 עד 35 דקות.
באמצעות קצה P1000, פיפטה את העוברים מעלה ומטה בתמיסה זו כל חמש דקות עד שמבנה עמוד השדרה אינו נראה עוד. כדי לעצור את התגובה, להוסיף 200 מיקרוליטר של FBS לצינור. מערבבים היטב ודגרים במשך חמש דקות נוספות.
מטילים את תרחיף התא ב-300 גרם למשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס. לאחר השלכת הסופרנאטנט, שטפו את כדורית התא פעמיים ב-PBS מקורר וסננו את התאים דרך מסננת תאים של 70 מיקרומטר. לאחר שטיפת התאים, יש להשהות מחדש את גלולת התא בתווך הצביעה המכיל נוגדן תגובתי לתאים המושתלים.
לדגור על התאים בארבע מעלות צלזיוס במשך 20 דקות. גלול את התאים והשהה אותם מחדש ב 200 מיקרוליטר של מדיום צביעה, המכיל סליל מיקרומולרי אחד P כחול. מעבירים את תערובת התאים לצינור פוליקרבונט תחתון עגול של חמישה מיליליטר ומבצעים ציטומטריית זרימה.
הסימון הכפול איפשר למדוד את ההבדלים בנטל הגידול בין חיסון בולוס טוב לעומת נחות.
