ניתוח איכותני וכמותי של דנ"א המופק מדגימות זבובים

כדי להתחיל, לחלץ DNA מדגימות זבוב באמצעות ערכת מיצוי DNA. לאחר מכן השתמש בקורא microplate כדי לקבוע את הערכים של OD260 ו- OD280 כדי להשוות טוהר DNA וריכוז חומצות גרעין. לאחר מכן, הכינו פתרונות סטנדרטיים של פלואורומטר על ידי הוספת 190 מיקרוליטר של פתרון עבודה לשני צינורות צנטריפוגות 0.5 מיליליטר.

לאחר מכן להוסיף 10 מיקרוליטר כל תקן אחד תקן 2 לפתרונות העבודה. יש להרחיק את הצינורות מהאור למשך 15 דקות לפחות. ערבבו שני מיקרוליטרים של דנ"א בדיקה עם 198 מיקרוליטר של תמיסת עבודה בצינור צנטריפוגה של 0.5 מיליליטר ושמרו את התערובת בחושך למשך 15 דקות לפחות.

לאחר 15 דקות, הפעל את הפלואורומטר ובחר את מדידת ריכוז dsDNA, הגדרת טווח ארוך. בדוק תקן אחד ותקן שני כדי לקבל את העקומה הסטנדרטית. לאחר מכן הניחו את הדגימות שייבדקו בבארות הבדיקה.

התאימו את נפח ספייקינג הדנ"א לשני מיקרוליטרים ובצעו את המדידה. כדי לדמיין את הדנ"א, תחילה להגדיר 20 מיקרוליטר של תגובת הגברת PCR. הניחו את הצינורות במחזור תרמי והריצו את מחזורי ה-PCR.

לאחר PCR, יש להעביר את המוצרים לאלקטרופורזה של ג'ל אגרוז 2%. לאחר מכן הניחו את הג'ל על מערכת הדמיה ג'ל לניתוח תמונות. הערכת טוהר הדנ"א שחולץ על ידי קורא Microplate הראתה כי לכל הדגימות הטריות ולדגימה הישנה אחת היו יחסי OD260 עד OD280 מעל שתיים.

לעומת זאת, מדגם שני הישן הציג יחס נמוך יותר. ריכוז הדנ"א שמקורו בקריאות OD260 היה הגבוה ביותר בדגימות טריות, ואחריו דגימה ישנה אחת ונמוכה ביותר בדגימה ישנה שתיים. ניתוח אלקטרופורטי גילה פסים בטווח של 250 עד 400 זוגות בסיסים, שהיו בולטים יותר בדגימות טריות, בהשוואה לישנים.