כדי להתחיל, הכינו את תמיסת Selenoprotein באמצעות בדיקת שינוי תרמי או מאגר TSA. יש לחלק את החלבון, המולקולות הקטנות והצבע הכתום SYPRO לבארות המתאימות של צלחת בת 384 בארות. מכסים את הצלחת בסרט דבק שקוף אופטית ומסובבים לזמן קצר את הצלחת ב -1, 000 גרם למשך דקה אחת בצנטריפוגה.
לאחר מכן הניחו את הצלחת במכשיר PCR בזמן אמת ותכנתו אותה להחזיק את הדגימה בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס למשך שתי דקות, ולאחר מכן עלייה של 0.5 מעלות בטמפרטורה לדקה עד 95 מעלות צלזיוס. יצא את הנתונים ממכונת RT PCR עבור יחידות פלואורסצנטיות יחסיות או RFU ביחס לטמפרטורה. באמצעות התוכנה הנבחרת, חלץ והתווה נקודות נתונים עד לעוצמה הגבוהה ביותר שנמדדה עבור כל עקומת התכה.
קבע את טמפרטורת ההתכה עם התאמה סיגמואידית בולצמן לנתונים כדי לקבוע את טמפרטורת ההתכה או Tm.עקומות הדנטורציה התרמית הצביעו על עלייה של ארבע מעלות צלזיוס Escherichia ביציבות התרמית של Escherichia coli SelO בנוכחות ATP עם יוני מגנזיום ועלייה של 12 מעלות צלזיוס באותו הדבר עבור ATP עם יוני מנגן. עם זאת, לא היה שינוי ביציבות התרמית בעת הדגירה עם UTP, מה שמצביע על כך ש- Escherichia coli SelO עשוי שלא להציג קשירה ניתנת לזיהוי ל- UTP. בקרות ללא חלבון כמו גם ללא צבע היו בעלות אות פלואורסצנטי נמוך, שלא הגיב לעליית הטמפרטורה.
