כדי להתחיל, להכין פתרון ציפוי המכיל גורם גדילה מופחת ממברנה מרתף מדיום תרבית אורגנואיד ביחס של אחד לשניים. מוסיפים 115 מיקרוליטר של תמיסת הציפוי לכל באר של צלחת 48 בארות ומניחים את הצלחת על 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות באינקובטור לח. לשיטת הקולגן, יש להוסיף מיליליטר אחד של ג'ל קולגן לממברנה פנימית בקוטר 30 מ"מ, ולתת לו להתמצק במשך 30 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות באינקובטור לח.
לקציר תערובת התאים, שטפו את רקמת המלנומה הטרייה בצלוחית פטרי 10 מיליליטר המכילה מדיום כביסה המונחת על קרח. בעזרת פינצטה סטרילית, מעבירים את הגידול לצלחת שנייה עם מדיום כביסה לשטיפה הבאה על קרח. במהלך שלושת מחזורי השטיפה באמצעות מספריים סטריליים ולהב, מסירים עודפי רקמת חיבור, שומן ושאריות דם.
מניחים את הגידול בצלחת פטרי ריקה וטוחנים אותו דק עם להבים סטריליים. לאחר מכן להעביר את רקמת טחון צינור חרוט 50 מיליליטר המכיל 10 מיליליטר של מדיום העיכול מוכן. מניחים את החרוט באמבט מים ב 37 מעלות צלזיוס מערבולת כל חמש דקות.
לאחר 25 דקות, הוסף 30 מיליליטר של מדיום ADMEM/F12 המכיל 10% FBS כדי לעצור את העיכול. לאחר מכן, סנן את תרחיף התאים המעוכל דרך מסננת תאי ניילון בגודל 70 מיקרומטר ושטוף את המסננת בתוספת ADMEM/F12. בעזרת פיפטה, אחזרו את כל המדיה שנותרה בתחתית המסנן.
ואז גלולה את התאים ב 300 x גרם במשך שבע דקות בארבע מעלות צלזיוס. לאחר השלכת הסופרנטנט, השהה מחדש את הגלולה במדיום תרבית האורגנואידים. לגידול, זרע 200, 000 תאים בבארות מצופות מטריג'ל לפני המלחמה בתוספת 200 מיקרוליטר של מדיום תרבית אורגנואידים.
לחלופין, זרעו מיליון תאים מעורבבים עם מיליליטר אחד של ג'ל קולגן על קרום ג'ל קולגן שהתמצק מראש והכניסו לצלחת של שש בארות והוסיפו את מדיום תרבית האורגנואידים לבאר. למעבר של אורגנואידים של 150 עד 200 מיקרומטר, העבירו אותם לחרוט של 15 מיליליטר ושטפו אותם עם PBS של דולבקו. צנטריפוגה את התערובת ב 300 x גרם במשך שבע דקות בארבע מעלות צלזיוס.
לאחר הסרת הסופרנטנט, דוגרים על האורגנואידים עם תחליף טריפסין ומערבבים לאחר כל שלוש דקות. כדי לעצור את העיכול, יש להוסיף ADMEM/F12 עם מדיום מופחת בסרום המכיל 10% FBS. צנטריפוגו את התערובת ב 300 x גרם במשך שבע דקות, והשעו מחדש את החיך בתווך תרבית אורגנואידים.
לבסוף, זרעו את תרחיף התא הבודד לתוך מטריג'ל חדש או באר מצופה קולגן באותה צפיפות זריעה ראשונית לדגירה. תמונות מיקרוסקופיות של האורגנואידים בסוף המטריגל ביום השני וביום השביעי הצביעו על כך שגודל האורגנואידים גדל בהדרגה. בנוסף, לא נמצאה הבחנה מובהקת סטטיסטית ביחס תאי אלפא-בטא-T בין גידולי ההורים לבין האורגנואידים בהתאמה שגודלו במטריג'ל או בקולגן.
