כדי להתחיל, להשיג את קטעי agarose extruded מזרקים הדרגתיים, מחוסן עם סוג בר או מיני methylomona מוטנטיים, LW13. הוסף 0.75 מיליליטר של 0.85% נתרן כלורי במים לדגימת אגרוז extruded, הומוגניזציה על ידי מערבולת. יתר על כן, לדלל את המדגם 1 עד 10 בצינור מיקרו צנטריפוגה חדש עם 900 מיקרוליטר של תמיסת מלח.
דגרו על הדגימות עם שלושה מיקרוליטרים של תערובת אחד לאחד של כתמי SYTO 9 ופרופידיום יודיד בחושך בטמפרטורת החדר למשך 15 דקות. כדי לקבוע את התאים למיליליטר של agarose, sonicate מיקרוספירה ספירת חרוזים השעיה באמבט מים במשך חמש דקות. לאחר מכן להוסיף 10 מיקרוליטר של ההשעיה למדגם לפני ניתוח ציטומטריה זרימה.
נתח דגימות באמצעות ציטומטר זרימה. השווה בין חלקות פיזור צדדיות לעומת חלקות אופ מפוזרות קדימה בין דגימות בקרה נטולות תאים לבין דגימות אגרוז מחוסנות כדי לצייר שערי מתח אירועים חיידקיים שאינם כוללים חלקיקי אגרוז ברקע. כדי לספור יחידות יוצרות מושבה בתוך מזרק השיפוע, הוסף 800 מיקרוליטר של מלחים מינרליים חנקתיים בינוניים למקטע האגרוז האקסטרוזי ולמערבולת למשך 10 שניות כדי לסייע בפיפט.
מכינים צלחת סטרילית של 96 בארות עם 180 מיקרוליטר מלחים מינרליים חנקתיים בינוניים בכל באר. מוסיפים 20 מיקרוליטר דגימת אגרוז מדוללת לכל באר בטור הראשון ומערבבים. באמצעות פיפטה רב ערוצית, לדלל סדרתית 20 מיקרוליטר של דגימות פי עשרה, החל מהשורה הראשונה של בארות.
תווית צלחת רשת מרובעת המכילה מלחים מינרליים חנקתיים, אוגר או מדיה לפי בחירה. בעזרת פיפטה רב-ערוצית, זהו חמישה מיקרוליטרים מעמוד של צלחת 96 בארות על צלחת האוגר. ציטומטריית זרימה באמצעות דגימות אגרוז אקסטרוזיה אישרה כי מוטנט מחיקת OAT של LW13 הראה צמיחה מופחתת של תאים בהשוואה לזן מסוג פראי.
השלמה של המוטציה עם הגן OAT החזירה את מספרי התאים ואת היווצרות הפסים לרמות דומות לסוג הבר, מה שמצביע על התפקיד הספציפי של הגן בהיווצרות הלהקה.
