כדי להתחיל, במכסה מנוע של תרבית תאים, הוסף את הליפואספירט שנקטף לתוך צינור צנטריפוגה של 50 מיליליטר. מעבירים את הליפואספירט למזרק נעילה סטרילי של 20 מיליליטר Luer. לאחר מכן חבר מחבר 1.4 מ"מ למזרק.
כעת חבר מזרק נעילה Luer שני של 20 מיליליטר לצד הנגדי של המחבר. לדחוף את רקמת השומן ממזרק אחד לשני בערך 30 פעמים. לאחר מכן מעבירים את השומן המתחלב לצינור צנטריפוגה טרי של 50 מיליליטר.
צנטריפוגייט את השומן ב 500 גרם במשך 10 דקות. לאחר מכן השליכו את השכבה העליונה השומנית. אספו את השכבה המטוהרת המרכזית המכילה את שכבת כלי הדם המופרדת והעבירו אותה לצינור צנטריפוגה טרי של 50 מיליליטר.
עכשיו למלא את צינור צנטריפוגה עם DMEM בתוספת עד סימן 40 מיליליטר. צנטריפוגה את הצינור שוב ב 500 G במשך חמש דקות. אספו את שכבת mSVF המתקבלת והעבירו אותה לצינור צנטריפוגה חדש של 50 מיליליטר.
לתוך צינור סטרילי 1.5 מיליליטר, פיפטה 100 מיקרוליטר של חלק כלי הדם סטרומה מבודד. לשם כך, להוסיף 10 מיקרוליטר של תרובין, ולאחר מכן פיפטה 10 מיקרוליטר של סידן כלורי. לבסוף, להוסיף 70 מיקרוליטר של חומצה tranexamic לתערובת.
עם קצה פיפטה טרי, להוסיף 10 מיקרוליטר של פיברינוגן לצינור זמן קצר לפני היישום. לאחר פילמור תערובת הידרוג'ל mSVF, פיפטה 200 מיקרוליטר של הידרוג'ל לתוך צלחת 12 בארות למטרות אנליטיות. עכשיו להוסיף 100 מיקרוליטר של הידרוג'ל פיברין לתוך באר אחת כמו שליטה שלילית.
דגרו על צלחת 12 הקידוחים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס מתחת ל-5% פחמן דו-חמצני למשך 30 דקות. לאחר מכן הוסיפו מיליליטר אחד של מדיום תרבית שחומם מראש לכל באר. החזירו את צלחת 12 הבארות שוב לאינקובטור למשך ארבע שעות.
מוסיפים מיליליטר רזזורין אחד לכל באר לפני הדגירה שוב למשך 24 שעות. פיפטה דגימות resazurin לתוך צלחת 96 באר. למחרת, השתמש בקורא מיקרו-צלחות רב-מצבי להדמיית תאים כדי למדוד את עוצמת הפלואורסצנטיות הראשונה.
לניתוח היסטולוגי בימים הראשון, השלישי והשביעי, יש לדגור על פיברין הידרוג'ל ב-0.5 מיליליטר של 4% פרפורמלדהיד. כעת הוסיפו 1% PBS לצלחת ואחסנו אותו בארבע מעלות צלזיוס. בדיקת רסזורין בוצעה כדי לכמת את הכדאיות של תאי המבחנה של החלק הווסקולרי וההידרוג'ל.
מקטע כלי הדם הראה כדאיות מופחתת ביום השלישי, בעוד ששילוב mSVF-פיברין הידרוג'ל נשאר קרוב לקו הבסיס. ביום השביעי, הכדאיות של mSVF ירדה, בעוד שילוב mSVF-פיברין הידרוג'ל גדל. ניתוח היסטולוגי לא הראה ירידה במספר גרעיני התא בימים השלישי והשביעי.
הפיברין הידרוג'ל הציג השפלה מינימלית עם אשכולות תאים גלויים המפוזרים באופן שווה.
