ציטומטריית זרימה של תאי מח עצם של עכבר מוכתמים על ידי Hoechst לזיהוי יעיל של אוכלוסיית צד באמצעות לייזרים רבי עוצמה של 375 ננומטר ו- 405 ננומטר

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

110 Views

•

04:11 min

•

August 23rd, 2024

DOI :

10.3791/202210-v

August 23rd, 2024

•

Fangfang Wang¹^,², Xinyu Zhai¹, Tingting Guo³, Hengyi Xiao², Jingcao Huang¹

¹Institute of Hematology, Department of Hematology, State Key Laboratory of Biotherapy, West China Hospital, Sichuan University, ²The Lab of Aging Research, State Key Laboratory of Biotherapy, National Clinical Research Center for Geriatrics, West China Hospital, Sichuan University, ³Precision Medicine Research Laboratory, West China Hospital, Sichuan University

Transcript

כדי להתחיל, להכתים את תאי מח עצם murine עם Hoechst 33342. עבור ציטומטריית זרימה, הפעל את התוכנה הנדרשת ולאחר מכן בחר את תקינת QC. הכנס את בקרת האיכות או צינור הדגימה QC FluoroSphere למחזיק הצינור לפני בחירת התחל כדי להתחיל את הליך QC.

ליצירת ניסוי חדש, לחצו על 'ניסוי חדש' בתפריט 'קובץ', ציינו את נתיב הקובץ ושמרו את הניסוי. לאחר מכן בחרו 'הגדר ערוץ' בתפריט 'הגדרות'. בחר בתיבת הסימון אות ערוץ והוסף את שם המגיב בעמודת התווית.

לאחר מכן, לחצו על הסמל 'תרשימי צבע מדומים' באזור ההתוויה ליצירת תרשימים. לחץ על הוסף מבחנה במסך המבחנה כדי ליצור מבחנות מדגם חדשות ולשנות את שמותיהן. לאחר מכן בחר הפעל כדי לטעון את הדגימה, להציג את החלקות ולהקים את השערים.

התאם את הגדרות הרווח והסף ובחר הקלט כדי לשמור את הנתונים. כדי לעצב את לוגיקת הגדרת השער, לחץ על ציר ה- x כדי לבחור FSEW, ולחץ על ציר y כדי לבחור FSEA. בחר 'שער מצולע' כדי לצייר את שער A כדי להקיף את התא הבודד ולא לכלול תאים דבקים.

עבור ההתוויה השניה, לחץ על ציר x כדי לבחור FSEA, ולחץ על ציר y כדי לבחור SSEA. בחר שער מצולע כדי לצייר את שער B כדי להפריד תאים שאינם מקוטעים ולא לכלול פסולת תאית. בתרשים השלישי, לחצו על ציר ה-x לבחירת PIA, ולחצו על ציר ה-y לבחירת SSEA.

לאחר ציור השער B, בחר תאים חיים המציגים יודיד פרופידיום שלילי וצייר את שער C כדי לקבל תאים חיים. לתרשים הדו-ממדי הרביעי, לחץ על ציר ה- x כדי לבחור Hoechst Red, ולחץ על ציר y כדי לבחור Hoechst Blue. לחץ לחיצה ימנית על ההתוויה ובחר מאפיין מהתפריט הנפתח.

בחר תבנית ליניארית הן לציר x והן לציר y וצייר את השער לתאי אוכלוסייה צדדיים. השתמש בלייזרים של 355 ננומטר ו- 405 ננומטר בו זמנית כדי לזהות הן את תאי הבקרה והן את תאי הניסוי. קבל אותות פלואורסצנטיים בתעלות 690 על 50 ו- 450 על 50 ננומטר המתאימות לשני הלייזר.

שימו לב לגירוי היעיל של צבע Hoechst 33342 עם לייזרים של 355 ו -405 ננומטר כדי לדמיין את תאי האוכלוסייה הצדדיים הברורים. עבור אותן דגימות, השתמש בלייזרים של 375 ננומטר ו- 405 ננומטר לזיהוי תאים. הלייזר בגודל 355 ננומטר עורר ביעילות את צבע Hoechst 33342, וכתוצאה מכך התבוננות ברורה בתאי SP של מח עצם.

תאי SP של אותן דגימות שזוהו על ידי לייזר 355 ננומטר ולייזר 405 ננומטר נמצאו זהים במהותם. הן לייזרים של 375 ננומטר והן לייזרים של 405 ננומטר עוררו ביעילות את Hoechst 33342 להשגת תאי SP.

Explore More Videos