כדי להתחיל, סדרו את מסנן מסנן מעוקר טרי, 10X מאגר תגובה אחד ושניים על פלטפורמת עבודה. מניחים צינורות פתוחים המכילים 2.5 מיליליטר של חיץ חוסם וחמישה מיליליטר של מים טהורים במיוחד במייבש ודגאס תחת ואקום. לאחר 15 דקות, לשחרר את הלחץ ולהסיר את הצינורות.
הניחו את מכלול תאי זרימת הביוטין-PEG המוכן על במת מיקרוסקופ ואבטחו אותו באמצעות מרק דבק בכל קצה. חבר את צינור יציאת תא הזרימה למשאבת המזרק באמצעות מחט. הפעילו את תנור החימום האובייקטיבי ל-30 מעלות צלזיוס.
הצמידו מיליליטר אחד עד שניים של מים ששוחררו בצינור לחתיכה נפרדת של מרק דבק ליד תא הזרימה. הכנס את צינור הכניסה לתוך הצינור עד שהוא מגיע לתחתית ותזרים מים דרך התעלה. הגדל את קצב הזרימה כדי להסיר בועות לכודות ליד צינורות הכניסה.
הוסף 100 מיקרוליטר של חיץ חוסם degassed כדי aliquot 20 מיקרוליטר של מיליגרם אחד למיליליטר streptavidin. חברו את הצינור הפתוח למרק הדבקה. מעבירים את צינורות הכניסה מהמים לסטרפטאווידין ומתחילים את הזרימה בקצב של 40 מיקרוליטר לדקה למשך שתי דקות.
לאחר חמש דקות, שטפו את עודפי הסטרפטווידין בעזרת מאגר החסימה. זרימה בדנ"א ביוטינילציה מדולל במאגר חוסם המכיל 25 ננו-טוקס SYTOX Orange. תמונה באמצעות תצוגה חיה עם לייזר 532 ננומטר כדי לצפות בדנ"א נקשר לפני השטח בזמן אמת.
ברגע שמושגת הצפיפות הרצויה של דנ"א על פני השטח, יש לזרום במאגר חוסם המכיל 25 ננו-טוקס מולארי כדי לשטוף את הדנ"א החופשי. כעת, זרימה ונוגדן אנטי-דיגוקסיגנין ביוטינילציה מדוללים במאגר חוסם המכיל 25 ננו-טוקס SYTOX Orange. שטפו את נוגדן האנטי-דיגוקסיגנין הביוטינילציה ואת SYTOX Orange עם חיץ חוסם.
זרימה של 50 מיקרוליטר של תערובת ATP-gamma-S לתוך תא הזרימה. הוסף מנחת מסוקים מטוהר CMG לכ-100 ננו-מולרים בריכוזים סופיים של 30 מיקרוליטר של תערובת ATP-gamma-S וזרימה במהירות של 20 מיקרוליטר לדקה עבור 20 מיקרוליטר. דוגרים במשך 15 דקות.
לאחר מכן, זרימה תערובת RPA ATP ב 40 מיקרוליטר לדקה עבור 80 מיקרוליטר. באמצעות כל לייזר עם חשיפה של 50 עד 100 אלפיות השנייה, דמיינו ורכשו EGFP RPA עם לייזר 488 ננומטר, ולאחר מכן רכשו CMG עם לייזר 640 ננומטר. לבסוף, דמיינו ורכשו DNA מוכתם בכתום של SYTOX באמצעות לייזר של 532 ננומטר.
חשיפת מנחת המסוקים CMG של הדנ"א הודגמה על ידי הצמיחה הליניארית של ה-RPA הצהוב שנצפתה לאורך זמן, מה שמצביע על גדילי הדנ"א שלא פוצעו. נזק חד-גדילי לדנ"א הפחית את מספר אירועי ההתרגעות המוצלחים שנצפו, כפי שהודגם על ידי פחות עקבות מלאים בנתונים.
