עיבוד רקמת השחלה וקביעת רזרבה שחלתית אצל נקבות צעירות באמצעות ניתוח צפיפות זקיקים Z-Score

כדי להתחיל, לאסוף את רקמת השחלה מחדר הניתוח לאחר ביופסיה בצינור המכיל חמישה מיליליטר של תוספת 1X DPBS. באמצעות אזמל סטרילי, לחתוך חתיכה קטנה של רקמת השחלה של כשני מילימטר קוביות מפני השטח של השחלה. לאחר מכן לטבול את הרקמה ב 350 מיקרוליטר של הפתרון של Bouin בטמפרטורת החדר במשך שעתיים.

לאחר הדגירה, לשטוף את הרקמה עם 70% אתנול שלוש פעמים. לאחר הטבעה וחתך הרקמות, לבצע צביעת hematoxylin ו eosin ולרכוש תמונות דיגיטליות לניתוח. פתח את הקבצים באמצעות תוכנות מתאימות כגון QuPath.

גררו את הקובץ לחלון הראשי של QuPath והגדירו את סוג התמונה ל-Brightfield H&E. הגדירו מילימטר אחד מאפיתל פני השטח באמצעות סרגל קנה המידה. לחץ על כלי האליפסה והוסף הערות לזקיקים.

ספרו את מספר הזקיקים באזור זה של מילימטר אחד משלב הבשלה ראשוני ועד שלב ההבשלה הראשוני. הזן את מזהה הדגימה, גיל, מספר הזקיקים עבור כל שקופית, עובי מקטע ומקטע N שנספרו בגיליון בשם זקיק בקובייה מילימטרית בקובץ Excel של מחשבון Z-Score Follicle. לאחר זיהוי 10% הגדולים ביותר של הזקיקים בכל חלק שנספר, לחץ על כלי הקו וצייר שני קווים ניצבים דרך קרום הביצית.

בחר מדידה, ולאחר מכן לחץ על הצג מדידות ביאור כדי לקבוע את הקוטר הממוצע של ביציות אלה. רשום את המדידות מתחת לעמודה המסומנת באורך במיקרומטרים. הזן את קוטר הביציות הממוצע של 10% הזקיקים הגדולים ביותר במיקרומטרים עבור כל שקופית בקובץ Excel של מחשבון Z-Score של זקיקים.

מקם את התמונה במרכז המסך ב- QuPath ולחץ על סמל ImageJ. לאחר מכן בחר שלח תמונה ל- ImageJ. ב- ImageJ, תחמו מילימטר אחד מהגבול בעזרת הכלי מברשת, לחצו על Image, לאחר מכן הקלידו ובחרו 8 סיביות.

לאחר מכן, לחץ על כלי הקו וצייר קו בסרגל קנה המידה. בחר נתח ולאחר מכן הגדר קנה מידה, הזן את האורך המצוין בסרגל קנה המידה בשדה מרחק ידוע ולחץ על אישור. לאחר מכן לחץ על תמונה, לאחר מכן התאם בהירות/ניגודיות ובחר אוטומטי. כעת לחץ על תמונה, ואז התאם את סף ובחר אוטומטי.

לחץ על כלי השרביט, בחר את האזור ולאחר מכן הקש Ctrl M.הזן את ערך האזור לקובץ Excel של מחשבון Z-Score Follicle. לאחר שכל הנתונים מסודרים בטבלה בקובץ Excel של מחשבון זקיק Z-Score, עבור לגיליון בשם Z-Score Follicle Per Millimeter Cube באותו קובץ Excel כדי לקבוע אם יש רזרבה שחלתית מופחתת. אפיתל פני השטח של השחלה של הילד נראה בבירור, כאשר הרזרבה השחלתית שוכנת מתחתיו לאחר הליך הצביעה.

צפיפות זקיקים שימשה לחישוב ציוני Z של הרזרבה השחלתית, כאשר ציון Z נמוך משלילי 1.7 המציין רזרבה שחלתית מופחתת.